Name: molecular imaging to target transplanted muscle progenitor cells
Uploaded: 2013-03-27T08:54:00
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Los autores desean agradecer a Sanjiv Gambhir por el don del gen reportero fluc/mrfp/sr39tk. Este trabajo fue financiado por la Red de Células Madre (SCN) de Canadá, y la Fundación de Jesse Journey.

1. Mantenimiento y Propagación de mioblastos C2C12 <ol><li> Placa de mioblastos C2C12 en un matraz de 75 cm 2 y mantener las células en el suero de alta glucosa Dulbecco Modificado de Eagle (HG-DMEM) suplementado con suero fetal bovino (FBS) a una concentración final de 10%. No permitir que las células se hacen confluentes en cualquier momento ya que esto agotar la población myoblastic. Medio debe ser cambiado cada otro día Nota:. Medio siempre caliente a 37 ° C en un baño de agua a...

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	<li>Emery, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+muscular+dystrophies.">The muscular dystrophies.</a> Lancet. 359, 687-695 (2002).</li><li>Blake, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Function+and+genetics+of+dystrophin+and+dystrophin-related+proteins+in+muscle.">Function and genetics of dystrophin and dystrophin-related proteins in muscle.</a> Physiol. Rev. 82, 291-329 (2002).</li><li>Goldring, K., Partridge, T., Watt, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+stem+cells.">Muscle stem cells.</a> J. Pathol. 197, 457-467 (2002).</li><li>Partridge, T. 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En este estudio, hemos descrito un rápido y fiable de imagen molecular enfoque, gen indicador de mioblastos diana de manera no invasiva / PSM tras el trasplante. Aunque este estudio demuestra la localización a corto plazo de los PSM trasplantadas a través de bioluminescense formación de imágenes (BLI), la manera en que las células están dirigidos puede, de hecho, ser fácilmente aplicada a una evaluación longitudinal de un injerto de células, a través de la implantación de células que expre...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre de reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> C2C12 mioblastos </td><td> ATCC </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco modificada de Eagle </td><td> Life Technologies </td><td> 12800-017 </td><td></td></tr><tr><td> suero bovino fetal </td><td> Life Technologies </td><td> 12483020 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% de tripsina-EDTA </td><td> Life Technologies </td><td> 25200-72 </td><td></td></tr><tr><td> Hanks Balanced Salt Solution </td><td> Sigma Aldrich </td><td> H6648 </td><td></td></tr><tr><td> Lipofectamine 2000 </td><td> Life Technologies </td><td> 11668-019 </td><td></td></tr><tr><td> Nikon Eclipse TE2000-5 </td><td> Nikon Instruments Inc. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Xenolight D-luciferina </td><td> PerkinElmer </td><td> 122796 </td><td> 40 mg / ml en PBS </td></tr></tbody></table>

molecular imaging to target transplanted muscle progenitor cells

La distrofia muscular de Duchenne (DMD) es una grave enfermedad genética neuromuscular que afecta a 1 de cada 3.500 varones, y se caracteriza por la degeneración progresiva de los músculos 1, 2. En los pacientes, la capacidad de los residentes células musculares satélite (SCS) para regenerar las miofibras dañadas vuelve cada vez más ineficaz 4. Por lo tanto, el trasplante de células progenitoras musculares (PSM) / mioblastos de sujetos sanos es un enfoque terapéutico prometedor para DMD. Una limitación importante para el uso de la terapia con células madre, sin embargo, es la falta de tecnologías de imágenes fiables de seguimiento a largo plazo de las células implantadas, y para evaluar su eficacia. Aquí, describimos una manera no invasiva, en tiempo real enfoque para evaluar el éxito del transplante de mioblastos. Este método tiene la ventaja de un gen de fusión informador unificada compuesta de genes (luciferasa de luciérnaga [fluc], monomérico proteína fluorescente roja [mRFP] SR39 y la timidina quinasa [sr39tk]) cuya Expression se pueden obtener imágenes con diferentes modalidades de imágenes 9, 10. Una variedad de técnicas de imagen, como la tomografía por emisión de positrones (PET), emisión de fotón único tomografía computarizada (SPECT), resonancia magnética (MRI), formación de imágenes ópticas y de alta frecuencia de ultrasonido en 3D están disponibles, cada uno con sus ventajas y limitaciones 11. Bioluminiscencia de imágenes (BLI) estudios, por ejemplo, tienen la ventaja de ser un coste relativamente bajo y de alto rendimiento. Es por esta razón que, en este estudio, se hace uso de la luciferasa de luciérnaga (fluctuaciones) secuencia de gen reportero contenido dentro del gen de fusión y formación de imágenes de bioluminiscencia (BLI) para la localización a corto plazo de mioblastos C2C12 viables después de la implantación en un ratón modelo de DMD (distrofia muscular en el cromosoma X [mdx] ratón) 12-14. Es importante destacar que, BLI nos proporciona un medio para examinar la cinética de los PSM etiqueta post-implantación, y será útil para rastrear las células repetidamente en time y la migración siguiente. Nuestro enfoque de genes reportero además nos permite fusionar múltiples modalidades de imagen en un sujeto vivo solo, dada la naturaleza tomográfico, buena resolución espacial y la capacidad de escalar a grandes animales y seres humanos 10,11, PET será la base del trabajo futuro que sugieren que puede facilitar la traducción rápida de los métodos desarrollados en las células a modelos preclínicos y para aplicaciones clínicas.

Tras la confluencia 50-60%, mioblastos C2C12 fueron transfectadas transitoriamente con el gen de fusión antes mencionada construcción reportera compuesto de la luciferasa de luciérnaga [fluc], proteína monomérica fluorescente de color rojo [mRFP] y SR39 timidina quinasa [sr39tk] (Figura 1A). La eficiencia de transfección se calculó a través de microscopía de fluorescencia (Figuras 1B, C), haciendo uso de la secuencia de mRFP en nuestro constr...

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Molecular Imaging to Target Transplanted Muscle Progenitor Cells

Un medio no invasivo para evaluar el éxito de trasplante de mioblastos se describe. El método se aprovecha de un gen de fusión informador unificada compuesta de genes cuya expresión se pueden obtener imágenes con diferentes modalidades de imágenes. Aquí, se hace uso de un<em&gt; Fluc</emReportero&gt; secuencia de genes a las células diana a través de imágenes de bioluminiscencia.

Imagen Molecular a Target trasplantó células progenitoras musculares

Duchenne muscular dystrophy (DMD) is a severe genetic neuromuscular disorder that affects 1 in 3,500 boys, and is characterized by progressive muscle ...

Research

JoVE Journal

Medicine

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En vivo en el infrarrojo cercano fluorescencia (NIRF) imagen intravascular molecular de placa inflamatoria, un enfoque multimodal de imágenes de la aterosclerosis

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Investigación

Medicina

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