Name: production of disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes for structural studies
Uploaded: 2013-03-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies at JoVE.com

Finansieringen af ​​dette arbejde er tilvejebragt af National Sundhed og Medical Research Council i Australien (NHMRC projekttilskud 1.011.352 til MEC og MJC, uafhængige forskningsinstitutter Infrastruktur Support Scheme [IRIISS] tilskud til WEHI) og den victorianske regering (Veski Innovation Fellowship til MEC; Victorian statens regering Operationel Infrastructure Support til WEHI). MEC er en dronning Elizabeth II Fellow af Australian Research Council. EFXB anerkender støtte fra Norma Hilda Schuster Scholarship Program ved University of Melbourne.

1. Kloning og Construct Design Klon sekvenserne af interesse i pMM-peptid vektor (som kan være tilvejebragt på anmodning) under anvendelse af HindIII-og BamHI-restriktionssteder (se figur 1). Den dobbeltstrengede DNA insert bør, i følgende rækkefølge: et HindIII-sted, et enkelt methioninkodon til CNBr-spaltning; E. coli kodon-optimeret peptid-kodende sekvens, en stopkodon, et BamHI-sted. Alle andre methioniner i peptidet bør fjernes og dipeptidet sekvensen Asp-...

<ol>
	<li>Call, M. E., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+view+into+the+blind+spot:+solution+NMR+provides+new+insights+into+signal+transduction+across+the+lipid+bilayer.">A view into the blind spot: solution NMR provides new insights into signal transduction across the lipid bilayer.</a> Structure. 18, 1559-1569 (2010).</li><li>Bocharov, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+of+the+dimeric+transmembrane+domain+of+the+growth+factor+receptor+ErbB2+presumably+corresponding+to+the+receptor+active+state.">Spatial structure of the dimeric transmembrane domain of the growth factor receptor ErbB2 presumably corresponding to the receptor active state.</a> The Journal of Biological Chemistry. 283, 6950-6956 (2008).</li><li>Mineev, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+of+the+transmembrane+domain+heterodimer+of+ErbB1+and+ErbB2+receptor+tyrosine+kinases.">Spatial structure of the transmembrane domain heterodimer of ErbB1 and ErbB2 receptor tyrosine kinases.</a> J. Mol. Biol. 400, 231-243 (2010).</li><li>Mineev, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+and+dimer--monomer+equilibrium+of+the+ErbB3+transmembrane+domain+in+DPC+micelles.">Spatial structure and dimer--monomer equilibrium of the ErbB3 transmembrane domain in DPC micelles.</a> Biochim. Biophys Acta. 1808, 2081-2088 (2011).</li><li>Lau, T. L., Kim, C., Ginsberg, M. H., Ulmer, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+integrin+alphaIIbbeta3+transmembrane+complex+explains+integrin+transmembrane+signalling.">The structure of the integrin alphaIIbbeta3 transmembrane complex explains integrin transmembrane signalling.</a> The EMBO Journal. 28, 1351-1361 (2009).</li><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+a+receptor+with+two+associating+transmembrane+domains+on+the+cell+surface:+integrin+alphaIIbbeta3.">The structure of a receptor with two associating transmembrane domains on the cell surface: integrin alphaIIbbeta3.</a> Molecular Cell. 34, 234-249 (2009).</li><li>Call, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+zetazeta+transmembrane+dimer+reveals+features+essential+for+its+assembly+with+the+T+cell+receptor.">The structure of the zetazeta transmembrane dimer reveals features essential for its assembly with the T cell receptor.</a> Cell. 127, 355-368 (2006).</li><li>Call, M. E., Wucherpfennig, K. W., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structural+basis+for+intramembrane+assembly+of+an+activating+immunoreceptor+complex.">The structural basis for intramembrane assembly of an activating immunoreceptor complex.</a> Nat. Immunol. 11, 1023-1029 (2010).</li><li>Diefenderfer, C., Lee, J., Mlyanarski, S., Guo, Y., Glover, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliable+expression+and+purification+of+highly+insoluble+transmembrane+domains.">Reliable expression and purification of highly insoluble transmembrane domains.</a> Anal. Biochem. 384, 274-278 (2009).</li><li>Schnell, J. R., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+the+M2+proton+channel+of+influenza+A+virus.">Structure and mechanism of the M2 proton channel of influenza A virus.</a> Nature. 451, 591-595 (2008).</li><li>Xie, X. Q., Zhao, J., Zheng, H. E. x. p. r. e. s. s. i. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=purification,+and+isotope+labeling+of+cannabinoid+CB2+receptor+fragment,+CB2(180-233).">purification, and isotope labeling of cannabinoid CB2 receptor fragment, CB2(180-233).</a> Protein Expr. Purif. 38, 61-68 (2004).</li><li>Miozzari, G. F., Yanofsky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+of+the+leader+region+of+the+Escherichia+coli+tryptophan+operon.">Translation of the leader region of the Escherichia coli tryptophan operon.</a> J. Bacteriol. 133, 1457-1466 (1978).</li><li>North, C. L., Blacklow, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+independence+of+ligand-binding+modules+five+and+six+of+the+LDL+receptor.">Structural independence of ligand-binding modules five and six of the LDL receptor.</a> Biochemistry. 38, 3926-3935 (1999).</li><li>Staley, J. P., Kim, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+a+native-like+subdomain+in+a+partially+folded+intermediate+of+bovine+pancreatic+trypsin+inhibitor.">Formation of a native-like subdomain in a partially folded intermediate of bovine pancreatic trypsin inhibitor.</a> Protein Sci. 3, 1822-1832 (1994).</li><li>Narayanan, S., Sato, T., Wolfe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C-terminal+region+of+signal+peptide+peptidase+defines+a+functional+domain+for+intramembrane+aspartic+protease+catalysis.">A C-terminal region of signal peptide peptidase defines a functional domain for intramembrane aspartic protease catalysis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 282, 20172-20179 (2007).</li><li>Klunk, W. E., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer's+beta-amyloid+protein+is+covalently+modified+when+dissolved+in+formic+acid.">Alzheimer's beta-amyloid protein is covalently modified when dissolved in formic acid.</a> J. Neurochem. 54, 2050-2056 (1990).</li><li>Klunk, W. E., Xu, C. J., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMR+identification+of+the+formic+acid-modified+residue+in+Alzheimer's+amyloid+protein.">NMR identification of the formic acid-modified residue in Alzheimer's amyloid protein.</a> J. Neurochem. 62, 349-354 (1994).</li><li>Previero, A., Coletti-Previero, M. A., Cavadore, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reversible+chemical+modification+of+the+tryptophan+residue.">A reversible chemical modification of the tryptophan residue.</a> Biochim. Biophys. Acta. 147, 453-461 (1967).</li><li>Kim, H. J., Howell, S. C., Van Horn, W. D., Jeon, Y. H., Sanders, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Advances+in+the+Application+of+Solution+NMR+Spectroscopy+to+Multi-Span+Integral+Membrane+Proteins.">Recent Advances in the Application of Solution NMR Spectroscopy to Multi-Span Integral Membrane Proteins.</a> Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 55, 335-360 (2009).</li></ol>

Ekspression af TrpLE-TM fusioner. Er vores erfaring, er TrpLE-TM fusioner dårligt udtrykt i rigt kultur medium ved 37 ° C, og dyrkningsbetingelser beskrevet her, har vist sig gode til mange forskellige sekvenser, der indeholder 1-4 TM domæner med udbytter spænder 50 til 150 mg / L af ren, intakt fusionsprotein. Fusions koder for tre-eller fire-TM GPCR-fragmenter (human CCR5 TM1-TM3 og TM4-TM7, henholdsvis) eller en kerne katalytisk fragment af human signalpeptid peptidase (fire TM-domæner, se ref 15)<...

Denne protokol detaljer en procedure, vi har udviklet til at producere disulfid-stabiliserede komplekser af transmembrane (TM) peptider til strukturelle undersøgelser med opløsning NMR. Fremgangsmåden udnytter den robuste ekspression ydes af ΔtrpLE1413 fusionssystemet (se nedenfor) og tillader TM peptidkomplekser med defineret sammensætning, der skal genereres ved hjælp af avancerede stabil-isotop mærkningsteknikker til moderne flerdimensionale NMR-forsøg. Vi har ansat disse teknikker til at bestemme flere NMR-strukturer, der afslørede vigtig ny viden om, hvordan lymfocyt-aktiverende immunoreceptors samles fra flere membran proteinunderenheder gennem interaktion blandt deres TM domæner (for nylig revideret i 1). Disse teknikker kan anvendes på mange andre membranprotein-systemer samt en bred vifte af downstream analysemetoder foruden opløsning NMR. Mens eksemplet her anvender native cysteinresterat skabe et kompleks, der efterligner naturligt disulfidbundet protein, designet er lige velegnet til at skabe gensplejsede disulfidbindinger at stabilisere komplekser, der normalt holdes sammen af ​​svagere, ikke-kovalente interaktioner, såsom homo-og hetero-dimere TM komplekser af epidermal vækstfaktor receptor (EGFR)-familie-proteiner 2-4 eller heterodimere αβ integrinreceptorer komplekser 5,6. Ekstremt hydrofobe peptidsekvenser, såsom dem afledt af lipiddobbeltlaget-spænder over dele af TM-proteiner er overordentlig vanskelige emner for biokemiske og biofysiske undersøgelser. Ud over at være meget udfordrende at manipulere under anvendelse af standard protein og peptidkemi teknikker, er de ofte ganske toksisk for celler og er derfor svære at producere rekombinant. Vi 7,8 og andre 9-11 har haft betydelig succes udtrykker så vanskelige peptidsekvenser i bakterier som i ramme carboxyterminalefusioner til en modificeret version af ΔtrpLE1413 sekvens afledt af E. coli trp-operonen 12. De ~ 13 kDa TrpLE polypeptid, der kodes af denne sekvens kan produceres i høje niveauer under en T7-promotor og udelukkende lokaliseret til inklusionslegemer, hvor problemer i forbindelse med toksicitet og / eller ustabilitet omgås. Modifikation af sekvensen ved tilsætning af en aminoterminal 9-histidin-tag 13 og fjernelse af indre methionin og cystein rester fra TrpLE sekvens 14 tilladt TrpLE-peptidfusioner skal renses ved metal-ion-affinitetskromatografi og fordøjet med cyanogenbromid (CNBr ) for at frigøre den ønskede peptidsekvens. Vi har med succes brugt dette system til at udtrykke mere end et dusin forskellige sekvenser som TrpLE fusioner, der repræsenterer membran proteinfragmenter, der indeholder så mange som fire TM-domæner (7,8 og upublicerede resultater, se også DISKUSSION afsnit). Dennøgle innovation i denne protokol er identificering af betingelser, hvorunder de ustrukturerede og meget dårligt opløselige TrpLE-TM fusioner kan være effektivt disulfid-tværbundet i forbindelse med et strømlinet workflow. Flere aspekter af high-yield udtryk, håndtering og rensning af peptid produkter er også blevet grundigt optimeret, og de anbefalinger, der præsenteres her, er lige så relevant for produktion af ikke-disulfid-tværbundne (monomere) TM peptid produkter.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagens / Material </td><td> Firma </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cyanogenbromid </td><td> ALDRICH </td><td> P.No-C91492, CAS-506-68-3 </td><td> Farligt stof. Farligt gods. Meget giftig ved indånding, ved hudkontakt og ved indtagelse. Kontakt med syrer frigiver meget giftig gas. Meget giftig for organismer, kan forårsage uønskede langtidsvirkninger i vandmiljøet. </td></tr><tr><td> Trifluoreddikesyre </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> P.CODE-1000984387, CAS 76-05-1 </td><td> Farligt stof. Farligt gods., Alvorlig ætsningsfare. Farlig ved indånding. Skadelig for vandlevende organismer, kan forårsage uønskede langtidsvirkninger i vandmiljøet. </td></tr><tr><td> 2-Mercaptoethanol </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> P.No M7154, CAS 60-24-2 </td><td> Farligt stof. FARLIGT GODS. Giftig ved indånding, ved hudkontakt og ved indtagelse. Irriterer huden. Risiko for alvorlig øjenskade. Kan give overfølsomhed ved kontakt med huden. Meget giftig for organismer, kan forårsage uønskede langtidsvirkninger i vandmiljøet. </td></tr><tr><td> 1,1,1,3,3,3-hexafluor-2-propanol </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Produkt Nummer 52.512, CAS-nr. 920-66-1 </td><td> Farligt stof. FARLIGT GODS. Farlig ved indånding og ved indtagelse. Ætsningsfare. </td></tr><tr><td> Myresyre </td><td> Merck KGaA </td><td> K41186564 </td><td> Brandfarlig væske og damp. Forårsager svære forbrændinger af huden og øjenskader. </td></tr><tr><td> Urea </td><td> UNIVAR, AJAX FINECHEM </td><td> Produktnummer, 817, CAS-nr 57-13-6 </td><td> Når det opvarmes, decomposes til kuldioxid og ammoniak, hvis brændt, udsender små mængder af nitrogenoxider. Kan forårsage rødme og irritation af hud og øjne. </td></tr><tr><td> Guanidinhydrochlorid </td><td> Amresco </td><td> P.No-M110, CAS: 50-01-1 </td><td> Farlig ved indtagelse, Forårsager alvorlig øjenirritation, Forårsager hudirritation, Akut Toksicitet Oral, hudirriterende Øjenrriterende. </td></tr><tr><td> TRITON X-100 </td><td> SIGMA </td><td> Produktnummer-T8532 CAS nr.: 9002-93-1 </td><td> Triton X-100 er et ikke-ionisk detergent, 100% aktiv bestanddel, som ofte anvendes i biokemiske anvendelser til at solubilisere proteiner. Triton X-100 har ingen antimikrobielle egenskaber og betragtes som en forholdsvis mild ikke-denaturerende detergent </td></tr><tr><td> His-Select Nikkel-affinitetsgel </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Katalog Num-P6611 </td><td> IS-Select Nickel affinitetsgel er en immobiliseret metal-ion-affinitetskromatografi (IMAC) produkt. HIS-Select Nickel Affinity gel er en navnebeskyttet quadridentate chelat på beaded agarose ladet med nikkel, der er designet til specifikt at binde histidin-holdige proteiner. </td></tr><tr><td> (-)-Glutathion, oxideret </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Catalog num 150.568 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Misonix S-3000 sonikator </td><td> QSONICA </td><td> S-3000 (udgået) </td><td> Max effekt 600 watt. 1/2-inch udskiftelig-tip sonde tager 1/2-inch høj intensitet, high-volume tips og en række høj intensitet, lav volumen tips. Nærmeste modeller øjeblikket er tilgængelige fra dette selskab er Q500 og Q700. </td></tr><tr><td> RP-HPLC: BioLogic DuoFlow chromatografi-system, Software Version 5,3 </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> Catalog Num 760-0047, Config No: AU500571, Løbenr: 484BR3705 </td><td> Peptider binder til omvendt fase-HPLC-søjler med høj aqueous mobil fase og elueres fra RP HPLC-søjler med høj organisk mobil fase. I RP HPLC peptider separeres på grundlag af deres hydrofobe karakter. Peptider kan separeres ved at køre en lineær gradient af det organiske opløsningsmiddel. </td></tr><tr><td> Prep HT C3 ZORBAX 300SB-Analytisk HPLC-søjle, 21,2 x 150 mm, 5 um partikelstørrelse </td><td> Agilent </td><td> Produkt nr.: 895150-909 </td><td> Omvendt fase HPLC COLUM </td></tr><tr><td> NuPAGE 12% Bis-Tris Gels </td><td> Life Technologies </td><td> NP0341BOX </td><td> Pre støbte geler til proteinelektroforese </td></tr><tr><td> Slide-A-Lyzer G2 Dialyse Kassetter, 3.5K MWCO </td><td> Thermo Scientific </td><td> Product No: 87.724 </td><td> Prøve dialyse </td></tr></tbody></table>

production of disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes for structural studies

Fysiske interaktioner mellem lipid-indlejrede alfa-helikale domæner af membranproteiner spiller en afgørende rolle i foldning og samling af membran-proteinkomplekser og dynamiske processer, såsom transmembran (TM) signalering og regulering af celleoverflade-proteinniveauer. Forståelse af de strukturelle træk køre sammenslutningen af ​​bestemte sekvenser kræver avancerede biofysiske og biokemiske analyser af TM peptidkomplekser. Imidlertid den ekstreme hydrofobicitet TM-domæner gør dem meget vanskelige at håndtere under anvendelse af standard peptid-kemi teknikker, og fremstilling af egnede undersøgelse materiale viser sig ofte uoverkommeligt udfordrende. Identifikation betingelser, hvorunder peptider kan vedtage stabile spiralformede konformationer og danne komplekser spontant tilføjer en yderligere sværhedsgrad. Her præsenteres en fremgangsmåde til fremstilling af homo-eller hetero-dimere TM peptidkomplekser fra materialer, der er udtrykt i E. coli, således at inkorporering af stabile isotoper etiketter til kernemagnetisk resonans (NMR) eller ikke-naturlige aminosyrer til andre anvendelser relativt billigt. Det centrale nyskabelse i denne fremgangsmåde er, at TM-komplekser er fremstillet og oprenset som kovalent forbundet (disulfid-tværbundne) komponenter, der kan danne stabile, støkiometrisk og homogene strukturer efter rekonstitution i detergent, lipid eller andre membran-mimetiske materialer. Vi præsenterer også omhyggeligt optimerede procedurer for ekspression og oprensning, der finder anvendelse, uanset at producere en enkelt TM domæner eller tværbundne komplekser og yde rådgivning til tilpasning af disse metoder til nye TM-sekvenser.

Niveauet af ekspression opnået for TrpLE fusioner er variabel og stærkt afhængig af den aminosyresekvens i vedlagte peptid. Figur 3 viser SDS-PAGE analyse af præ-induktion (bane 1) og time-of-høst (bane 2) prøver fra en kultur, der gav cirka 120 mg ren, intakt TrpLE-DAP12TM fusion fra 1 liter kultur og 4 ml nikkelmatrixen. Alle de TrpLE-DAP12TM fusionen blev lokaliseret til inklusionslegeme pellet (bane 4) i modsætning til supernatant (bane 3). 70% af den nikkel-opren...

Watch this Scientific Journal Video about Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies at JoVE.com

Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies

Biofysiske og biokemiske studier af samspillet mellem membran-embedded proteindomæner står over for mange tekniske udfordringer, hvoraf den første er at opnå passende undersøgelse materiale. I denne artikel beskrives en protokol til fremstilling og oprensning af disulfid-stabiliserede transmembrane peptidkomplekser, der er egnede til strukturel analyse ved opløsning kernemagnetisk resonans (NMR) og andre analytiske anvendelser.

Produktion af disulfid-stabiliserede transmembrane peptidkomplekser til strukturelle studier

Physical  interactions among the lipid-embedded alpha-helical domains of membrane  proteins play a crucial role in folding and assembly of membrane ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Surface Passivation for Single-molecule Protein Studies

Overfladepassivering for Single-molekyle Protein Studies

Single-molecule fluorescence spectroscopy has proven to be instrumental in understanding a wide range of biological phenomena at the nanoscale. Important ...

Steady-state, Pre-steady-state, and Single-turnover Kinetic Measurement for DNA Glycosylase Activity

Steady-state, Pre-steady-state, og Single-omsætningen Kinetic måling for DNA glycosylase Activity

Human 8-oxoguanine DNA glycosylase (OGG1) excises the mutagenic oxidative DNA lesion 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8-oxoG) from DNA. Kinetic characterization ...

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Copper (I) binding by metallochaperone transport proteins prevents copper oxidation and release of the toxic ions that may participate in harmful redox ...

Thin-layer Chromatographic (TLC) Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Thin-layer Chromatographic TLC Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Tyndtlagskromatografisk (TLC) Separations og Bioassays planteekstrakter til at identificere antimikrobielle forbindelser

A common screen for plant antimicrobial compounds consists of separating plant extracts by paper or thin-layer chromatography (PC or TLC), exposing the ...

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Kontrolleret Photoredox Ring-åbning polymerisering af O- Carboxyanhydrides medieret af Ni/Zn komplekser

Here, we describe an effective protocol that combines photoredox Ni/Ir catalysis with the use of a Zn-alkoxide for efficient ring-opening polymerization, ...

Preparation of Stable Bicyclic Aziridinium Ions and Their Ring-Opening for the Synthesis of Azaheterocycles

Forberedelse af stabile bicykliske Aziridinium ioner og deres Ring-åbning for syntese af Azaheterocycles

Bicyclic aziridinium ions were generated by the removal of an appropriate leaving group through internal nucleophilic attack by nitrogen atom in the ...

Novel Techniques for Observing Structural Dynamics of Photoresponsive Liquid Crystals

Nye teknikker til at observere strukturdynamik Photoresponsive flydende krystaller

We discuss in this article the experimental measurements of the molecules in liquid crystal (LC) phase using the time-resolved infrared (IR) vibrational ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Analysere Protein arkitekturer og Protein-Ligand komplekser af Integrativ strukturelle massespektrometri

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Experimental Methods for Efficient Solar Hydrogen Production in Microgravity Environment

Eksperimentelle metoder til effektiv produktion af solenergi i Mikrogravitations miljø

Long-term space flights and cis-lunar research platforms require a sustainable and light life-support hardware which can be reliably employed outside the ...