Name: production of disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes for structural studies
Uploaded: 2013-03-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies at JoVE.com

De financiering voor dit werk wordt geleverd door de National Health en Medical Research Council van Australië (NHMRC projectsubsidie ​​1011352 naar MEC en MJC; onafhankelijke onderzoeksinstituten Infrastructure Support Scheme [IRIISS] subsidie ​​aan WEHI) en de Victoriaanse regering (Veski Innovation Fellowship aan MEC; Victoriaanse Deelstaatoverheid operationele infrastructuur te ondersteunen om WEHI). MEC is een Koningin Elizabeth II Fellow van de Australian Research Council. EFXB erkent steun van de Norma Hilda Schuster Scholarship Program aan de Universiteit van Melbourne.

1. Klonen en Construct Ontwerp Kloon de sequenties van interesse in de vector pMM-peptide (die kan zijn voorzien op aanvraag) met HindIII en BamHI restrictieplaatsen (zie figuur 1). Het dubbelstrengs DNA insert, opgenomen in de volgende volgorde: een HindIII-plaats, een methionine codon voor CNBr splitsing, de E. coli codon-geoptimaliseerde coderende sequentie, een stopcodon, een BamHI site. Alle andere methionines in het peptide worden geëlimineerd en de sequentie d...

<ol>
	<li>Call, M. E., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+view+into+the+blind+spot:+solution+NMR+provides+new+insights+into+signal+transduction+across+the+lipid+bilayer.">A view into the blind spot: solution NMR provides new insights into signal transduction across the lipid bilayer.</a> Structure. 18, 1559-1569 (2010).</li><li>Bocharov, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+of+the+dimeric+transmembrane+domain+of+the+growth+factor+receptor+ErbB2+presumably+corresponding+to+the+receptor+active+state.">Spatial structure of the dimeric transmembrane domain of the growth factor receptor ErbB2 presumably corresponding to the receptor active state.</a> The Journal of Biological Chemistry. 283, 6950-6956 (2008).</li><li>Mineev, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+of+the+transmembrane+domain+heterodimer+of+ErbB1+and+ErbB2+receptor+tyrosine+kinases.">Spatial structure of the transmembrane domain heterodimer of ErbB1 and ErbB2 receptor tyrosine kinases.</a> J. Mol. Biol. 400, 231-243 (2010).</li><li>Mineev, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+and+dimer--monomer+equilibrium+of+the+ErbB3+transmembrane+domain+in+DPC+micelles.">Spatial structure and dimer--monomer equilibrium of the ErbB3 transmembrane domain in DPC micelles.</a> Biochim. Biophys Acta. 1808, 2081-2088 (2011).</li><li>Lau, T. L., Kim, C., Ginsberg, M. H., Ulmer, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+integrin+alphaIIbbeta3+transmembrane+complex+explains+integrin+transmembrane+signalling.">The structure of the integrin alphaIIbbeta3 transmembrane complex explains integrin transmembrane signalling.</a> The EMBO Journal. 28, 1351-1361 (2009).</li><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+a+receptor+with+two+associating+transmembrane+domains+on+the+cell+surface:+integrin+alphaIIbbeta3.">The structure of a receptor with two associating transmembrane domains on the cell surface: integrin alphaIIbbeta3.</a> Molecular Cell. 34, 234-249 (2009).</li><li>Call, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+zetazeta+transmembrane+dimer+reveals+features+essential+for+its+assembly+with+the+T+cell+receptor.">The structure of the zetazeta transmembrane dimer reveals features essential for its assembly with the T cell receptor.</a> Cell. 127, 355-368 (2006).</li><li>Call, M. E., Wucherpfennig, K. W., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structural+basis+for+intramembrane+assembly+of+an+activating+immunoreceptor+complex.">The structural basis for intramembrane assembly of an activating immunoreceptor complex.</a> Nat. Immunol. 11, 1023-1029 (2010).</li><li>Diefenderfer, C., Lee, J., Mlyanarski, S., Guo, Y., Glover, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliable+expression+and+purification+of+highly+insoluble+transmembrane+domains.">Reliable expression and purification of highly insoluble transmembrane domains.</a> Anal. Biochem. 384, 274-278 (2009).</li><li>Schnell, J. R., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+the+M2+proton+channel+of+influenza+A+virus.">Structure and mechanism of the M2 proton channel of influenza A virus.</a> Nature. 451, 591-595 (2008).</li><li>Xie, X. Q., Zhao, J., Zheng, H. E. x. p. r. e. s. s. i. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=purification,+and+isotope+labeling+of+cannabinoid+CB2+receptor+fragment,+CB2(180-233).">purification, and isotope labeling of cannabinoid CB2 receptor fragment, CB2(180-233).</a> Protein Expr. Purif. 38, 61-68 (2004).</li><li>Miozzari, G. F., Yanofsky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+of+the+leader+region+of+the+Escherichia+coli+tryptophan+operon.">Translation of the leader region of the Escherichia coli tryptophan operon.</a> J. Bacteriol. 133, 1457-1466 (1978).</li><li>North, C. L., Blacklow, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+independence+of+ligand-binding+modules+five+and+six+of+the+LDL+receptor.">Structural independence of ligand-binding modules five and six of the LDL receptor.</a> Biochemistry. 38, 3926-3935 (1999).</li><li>Staley, J. P., Kim, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+a+native-like+subdomain+in+a+partially+folded+intermediate+of+bovine+pancreatic+trypsin+inhibitor.">Formation of a native-like subdomain in a partially folded intermediate of bovine pancreatic trypsin inhibitor.</a> Protein Sci. 3, 1822-1832 (1994).</li><li>Narayanan, S., Sato, T., Wolfe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C-terminal+region+of+signal+peptide+peptidase+defines+a+functional+domain+for+intramembrane+aspartic+protease+catalysis.">A C-terminal region of signal peptide peptidase defines a functional domain for intramembrane aspartic protease catalysis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 282, 20172-20179 (2007).</li><li>Klunk, W. E., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer's+beta-amyloid+protein+is+covalently+modified+when+dissolved+in+formic+acid.">Alzheimer's beta-amyloid protein is covalently modified when dissolved in formic acid.</a> J. Neurochem. 54, 2050-2056 (1990).</li><li>Klunk, W. E., Xu, C. J., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMR+identification+of+the+formic+acid-modified+residue+in+Alzheimer's+amyloid+protein.">NMR identification of the formic acid-modified residue in Alzheimer's amyloid protein.</a> J. Neurochem. 62, 349-354 (1994).</li><li>Previero, A., Coletti-Previero, M. A., Cavadore, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reversible+chemical+modification+of+the+tryptophan+residue.">A reversible chemical modification of the tryptophan residue.</a> Biochim. Biophys. Acta. 147, 453-461 (1967).</li><li>Kim, H. J., Howell, S. C., Van Horn, W. D., Jeon, Y. H., Sanders, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Advances+in+the+Application+of+Solution+NMR+Spectroscopy+to+Multi-Span+Integral+Membrane+Proteins.">Recent Advances in the Application of Solution NMR Spectroscopy to Multi-Span Integral Membrane Proteins.</a> Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 55, 335-360 (2009).</li></ol>

Expressie van TM trpLE-fusies. Onze ervaring is trpLE-TM fusies slecht uitgedrukt in rijke kweekmedium bij 37 ° C en de kweekomstandigheden hier beschreven zijn effectief gebleken voor verschillende sequenties die een tot vier domeinen met TM opbrengsten variërend 50 tot 150 mg / L zuiver, intact fusie. Fusies coderen drie of vier TM GPCR fragmenten (humane CCR5-TM1 TM3 en TM4-TM7 respectievelijk) of een kern katalytisch fragment van humaan signaalpeptide peptidase (vier domeinen TM, zie ref 15) he...

Dit protocol gegevens een procedure we hebben ontwikkeld om disulfide-gestabiliseerde complexen van transmembraan (TM) peptiden voor structurele studies met oplossing NMR produceren. De procedure maakt gebruik van de robuuste expressie geboden door de ΔtrpLE1413 fusiesysteem (zie hieronder) en kunnen TM peptide complexen gedefinieerde samenstelling worden gegenereerd met behulp van geavanceerde stabiele isotopen labeltechnieken voor moderne multi-dimensionale NMR experimenten. Wij hebben gebruik gemaakt van deze technieken naar verschillende NMR structuren die belangrijke nieuwe informatie over hoe lymfocyt-activerende immunoreceptors zijn opgebouwd uit meerdere membraan eiwitsubeenheden door interacties tussen de TM-domeinen (recent beoordeeld in 1) geopenbaard te bepalen. Deze technieken zijn van toepassing op vele andere membraaneiwit systemen alsmede diverse downstream analysemethoden naast oplossing NMR. Terwijl de hier gegeven voorbeeld maakt gebruik van inheemse cysteïnerestenom een ​​complex dat de natuurlijk disulfide-gebonden eiwit nabootst, het ontwerp is ook geschikt voor het maken van kunstmatige disulfide bindingen met complexen die normaal worden bijeengehouden door zwakkere niet-covalente interacties, zoals homo-en hetero-dimere TM complexen stabiliseren epidermale groeifactor receptor (EGFR)-familie eiwitten 2-4 of heterodimere αβ integrine complexen 5,6. Zeer hydrofoob peptide sequenties zoals die afgeleid van de lipide dubbellaag omspannende delen van TM eiwitten zijn bijzonder moeilijk onderwerpen voor biochemische en biofysische studies. Behalve zeer moeilijk te manipuleren met behulp van standaard eiwitten en peptiden chemische technieken, ze zijn vaak toxisch voor cellen en zijn daarom moeilijk recombinant produceren. We 7,8 en anderen negen-elf hebben gehad groot succes uitdrukken zulke moeilijke peptidesequenties in bacteriën als in-frame carboxyterminalefusies met een aangepaste versie van de ΔtrpLE1413 sequentie afgeleid uit de E. coli trp operon 12. De ~ 13 kDa trpLE polypeptide gecodeerd door deze sequentie worden geproduceerd met hoge niveaus onder een T7 promoter en geheel gelokaliseerd insluitingslichamen waar problemen inzake toxiciteit en / of instabiliteit worden omzeild. Wijziging van de sequentie door toevoeging van een amino-terminale histidine tag 9-13 en eliminatie van interne methionine en cysteine ​​residuen van de sequentie 14 trpLE toegestaan ​​trpLE-peptide fusies gezuiverd worden door metaal-ion affiniteitschromatografie en geknipt met cyanogeenbromide (CNBr ) om de gewenste peptidesequentie vrij. We hebben met succes gebruikt dit systeem om de meer dan een dozijn verschillende sequenties als trpLE fusies die membraaneiwit fragmenten die maar liefst vier TM-domeinen bevatten uiten (7,8 en niet gepubliceerde resultaten, zie ook DISCUSSIE sectie). Debelangrijke innovatie in dit protocol is de identificatie van de voorwaarden waaronder de ongestructureerde en zeer slecht oplosbaar trpLE-TM fusies kan efficiënt disulfide-verknoopt in het kader van een gestroomlijnde workflow. Verschillende aspecten van high-yield expressie, behandeling en zuivering van peptide producten zijn ook goed geoptimaliseerd en de aanbevelingen hier gepresenteerde even relevant voor de productie van niet-disulfide-verknoopte (monomeer) TM peptide producten.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van de Reagens / Materiaal </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogus nummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cyanogeenbromide </td><td> ALDRICH </td><td> P.No-C91492, CAS-506-68-3 </td><td> GEVAARLIJKE STOF. GEVAARLIJKE GOEDEREN. Zeer vergiftig bij inademing, aanraking met de huid en bij opname door de mond. In contact met zuren Vormt zeer giftig gas. Zeer vergiftig voor in het water levende organismen, kan op lange termijn schadelijke effecten veroorzaken in het aquatisch milieu. </td></tr><tr><td> Trifluorazijnzuur </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> P.CODE-1000984387, CAS-nummer 76-05-1 </td><td> GEVAARLIJKE STOF. GEVAARLIJKE GOEDEREN., Veroorzaakt ernstige brandwonden. Schadelijk bij inademing. Schadelijk voor in het water levende organismen, kan op lange termijn schadelijke effecten veroorzaken in het aquatisch milieu. </td></tr><tr><td> 2-Mercaptoethanol </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> P.No M7154, CAS-nummer 60-24-2 </td><td> GEVAARLIJKE STOF. GEVAARLIJKE GOEDEREN. Vergiftig bij inademing, aanraking met de huid en bij opname door de mond. Irriterend voor de huid. Gevaar voor ernstig oogletsel. Kan overgevoeligheid veroorzaken bij contact met de huid. Zeer vergiftig voor in het water levende organismen, kan op lange termijn schadelijke effecten veroorzaken in het aquatisch milieu. </td></tr><tr><td> 1,1,1,3,3,3-hexafluor-2-propanol </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Productnummer 52512, CAS-nr. 920-66-1 </td><td> GEVAARLIJKE STOF. GEVAARLIJKE GOEDEREN. Schadelijk bij inademing en opname door de mond. Veroorzaakt brandwonden. </td></tr><tr><td> Mierenzuur </td><td> Merck KGaA </td><td> K41186564 </td><td> Ontvlambare vloeistof en damp. Veroorzaakt ernstige brandwonden en oogletsel. </td></tr><tr><td> Ureum </td><td> UNIVAR, AJAX FINECHEM </td><td> Productnummer, 817, CAS-No 57-13-6 </td><td> Bij verhitting, decomposes tot koolstofdioxide en ammoniak bij verbranding, stoot kleine hoeveelheden stikstofoxiden. Kan leiden tot roodheid en irritatie aan huid en ogen. </td></tr><tr><td> Guanidinehydrochloride </td><td> Amresco </td><td> P.No-M110, CAS-nummer: 50-01-1 </td><td> Schadelijk bij opname door de mond, Veroorzaakt ernstige oogirritatie, Veroorzaakt huidirritatie, acute toxiciteit Oraal, irriterend voor de huid, irriterend voor de ogen. </td></tr><tr><td> TRITON X-100 </td><td> SIGMA </td><td> Productnummer-T8532 CAS-nr: 9002-93-1 </td><td> Triton X-100 is een niet-ionische detergent, 100% actief bestanddeel, die vaak wordt gebruikt in biochemische toepassingen eiwitten oplosbaar. Triton X-100 heeft geen antibacteriële eigenschappen en als een relatief milde niet-denaturerend detergens </td></tr><tr><td> Zijn-Select Nikkel-Affiniteit gel </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Winkel Num-P6611 </td><td> IS-Select Nikkel Affiniteit Gel is een geïmmobiliseerd metaal-ion affiniteitschromatografie (IMAC) product. De HIS-Select Nickel Affinity gel is een eigen viertandige chelaat op agarose kralen geladen met nikkel die ontworpen is om specifiek te binden histidine bevattende eiwitten. </td></tr><tr><td> (-)-Glutathion, geoxideerd </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Winkel num 150568 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Misonix S-3000 sonicator </td><td> QSONICA </td><td> S-3000 (uit productie) </td><td> Max vermogen 600 Watt. 1/2-inch vervangbare-tip sonde neemt 1/2-inch hoge intensiteit, high-volume tips en een reeks van hoge intensiteit, laag-volume tips. Dichtstbijzijnde modellen die nu verkrijgbaar bij dit bedrijf zijn Q500 en Q700. </td></tr><tr><td> RP-HPLC: BioLogic DuoFlow chromatografie systeem, Software Versie 5.3 </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> Winkel Num 760-0047, Config No: AU500571, Serienummer: 484BR3705 </td><td> Peptiden bindt aan fase HPLC kolommen te keren in hoge aqueous mobiele fase en worden geëlueerd van RP HPLC-kolommen met een hoog organische mobiele fase. In RP HPLC peptiden worden gescheiden op basis van hun hydrofobe karakter. Peptiden kunnen worden gescheiden door het uitvoeren van een lineaire gradiënt van het organische oplosmiddel. </td></tr><tr><td> Prep HT C3 ZORBAX 300SB-Analytische HPLC kolom, 21,2 x 150 mm, 5 urn deeltjesgrootte </td><td> Agilent </td><td> Product No: 895150-909 </td><td> Omgekeerde fase HPLC colum </td></tr><tr><td> NuPAGE 12% Bis-Tris Gels </td><td> Life Technologies </td><td> NP0341BOX </td><td> Pre cast gels voor eiwitelektroforese </td></tr><tr><td> Slide-A-Lyzer G2 Dialyse Cassettes, 3.5K MWCO </td><td> Thermo Scientific </td><td> Product No: 87724 </td><td> Voorbeeld dialyse </td></tr></tbody></table>

production of disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes for structural studies

Fysieke interactie tussen het lipide-ingebedde alpha-helix domeinen van membraaneiwitten spelen een cruciale rol in vouwing en assemblage van membraaneiwit complexen en dynamische processen zoals transmembraan (TM) signalisatie en regulatie van celoppervlak eiwitniveaus. Begrijpen van de structurele kenmerken de associatie van een bepaalde sequenties vereist geavanceerde biofysische en biochemische analyses van TM peptide complexen. De extreme hydrofobiciteit van TM domeinen maakt ze zeer moeilijk te manipuleren met behulp van standaard peptide chemische technieken en productie van geschikte studiemateriaal blijkt vaak onbetaalbaar uitdaging. Het identificeren van de voorwaarden waaronder peptiden kan aannemen stabiele spiraalvormige conformaties en vorm complexen spontaan voegt een extra moeilijkheidsgraad. Hier wordt een procedure voor de productie van homo-of hetero-dimere TM peptide complexen uit materialen die worden uitgedrukt in E. coli, zodat opname van stabiele isotooplabels voor nucleaire magnetische resonantie (NMR) of niet-natuurlijke aminozuren voor andere toepassingen relatief goedkoop. De belangrijkste innovatie in deze methode is dat TM complexen worden geproduceerd en gezuiverd zoals covalent verbonden (disulfide-verknoopte) samenstellingen die vormen stabiele, homogene en stoichiometrische structuren na reconstitutie in detergent, lipide of andere membraan-mimetische materiaal. We presenteren ook zorgvuldig geoptimaliseerde procedures voor expressie en zuivering die evenzeer van toepassing of het produceren van een TM-domeinen of verknoopt complexen en geven advies voor de aanpassing van deze methoden om nieuwe TM sequenties.

Het expressieniveau bereikt trpLE fusies is variabel en sterk afhankelijk van de aminozuursequentie van de bijgevoegde peptide. Figuur 3 toont de SDS-PAGE analyse van pre-inductie (laan 1) en time-of-oogst (laan 2) monsters uit een cultuur die ongeveer 120 mg zuivere, intacte trpLE-DAP12TM fusie van 1 liter cultuur en 4 ml nikkel matrix opgeleverd. Alle trpLE-fusie DAP12TM was gelokaliseerd in het insluitingslichaam pellet (baan 4) tegenover supernatant (laan 3). Ongeveer 70...

Watch this Scientific Journal Video about Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies at JoVE.com

Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies

Biofysische en biochemische studies van interacties tussen membraan-ingebed eiwitdomeinen geconfronteerd met vele technische uitdagingen, waarvan de eerste is het verkrijgen van passende studiemateriaal. Dit artikel beschrijft een protocol voor het produceren en zuiveren van disulfide-gestabiliseerde transmembraan peptide complexen die geschikt zijn voor structurele analyse door oplossing kernspinresonantie (NMR) en andere analytische toepassingen.

Productie van Disulfide gestabiliseerde Transmembrane peptidecomplexen voor structurele studies

Physical  interactions among the lipid-embedded alpha-helical domains of membrane  proteins play a crucial role in folding and assembly of membrane ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Surface Passivation for Single-molecule Protein Studies

Oppervlaktepassivering voor Single-molecule Protein Studies

Single-molecule fluorescence spectroscopy has proven to be instrumental in understanding a wide range of biological phenomena at the nanoscale. Important ...

Steady-state, Pre-steady-state, and Single-turnover Kinetic Measurement for DNA Glycosylase Activity

Steady-state, Pre-steady-state, en Single-omzet Kinetic Meting voor DNA Glycosylase Activiteit

Human 8-oxoguanine DNA glycosylase (OGG1) excises the mutagenic oxidative DNA lesion 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8-oxoG) from DNA. Kinetic characterization ...

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Copper (I) binding by metallochaperone transport proteins prevents copper oxidation and release of the toxic ions that may participate in harmful redox ...

Thin-layer Chromatographic (TLC) Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Thin-layer Chromatographic TLC Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Thin-layer Chromatographic (TLC) Scheidingen en Bioassays van plantenextracten te identificeren antimicrobiële verbindingen

A common screen for plant antimicrobial compounds consists of separating plant extracts by paper or thin-layer chromatography (PC or TLC), exposing the ...

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Gecontroleerd Photoredox Ring-Opening polymerisatie van O- Carboxyanhydrides gemedieerd door Ni/Zn complexen

Here, we describe an effective protocol that combines photoredox Ni/Ir catalysis with the use of a Zn-alkoxide for efficient ring-opening polymerization, ...

Preparation of Stable Bicyclic Aziridinium Ions and Their Ring-Opening for the Synthesis of Azaheterocycles

Voorbereiding op stabiele bicyclische Aziridinium ionen en hun Ring-Opening voor de synthese van Azaheterocycles

Bicyclic aziridinium ions were generated by the removal of an appropriate leaving group through internal nucleophilic attack by nitrogen atom in the ...

Novel Techniques for Observing Structural Dynamics of Photoresponsive Liquid Crystals

Nieuwe technieken voor het observeren van structurele dynamica van Photoresponsive vloeibare kristallen

We discuss in this article the experimental measurements of the molecules in liquid crystal (LC) phase using the time-resolved infrared (IR) vibrational ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Analyseren van platforms voor eiwit en eiwit-Ligand complexen door integratieve structurele massaspectrometrie

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Experimental Methods for Efficient Solar Hydrogen Production in Microgravity Environment

Experimentele methoden voor efficiënte productie van zonne-energie waterstof in de omgeving van microzwaartekracht

Long-term space flights and cis-lunar research platforms require a sustainable and light life-support hardware which can be reliably employed outside the ...