Name: production of disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes for structural studies
Uploaded: 2013-03-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies at JoVE.com

Midler til dette arbeidet er levert av National Health and Medical Research Council of Australia (NHMRC prosjektstøtte 1.011.352 til MEC og MJC, forskningsinstitutter Infrastruktur støtteordning [IRIISS] tilskudd til WEHI) og den viktorianske regjeringen (Veski Innovation Fellowship til MEC; Victorian State Government Operasjonell Infrastruktur Støtte til WEHI). MEC er en dronning Elizabeth II medlem av Australian Research Council. EFXB erkjenner støtte fra Norma Hilda Schuster Scholarship Program ved University of Melbourne.

1. Kloning og Construct Design Klone sekvenser av interesse i PMM-peptid vektor (som kan leveres på forespørsel) med Hindlll og BamHI restriksjonsseter (se figur 1). Den dobbel-strengede DNA innskuddet bør inkludere, i den følgende rekkefølge: a Hindlll sted; en enkelt metionin kodon for CNBr spalting; E. coli kodonoptimalisert peptid kodende sekvens, en stopp-kodon, et BamHI-sete. Alle andre methionines i peptidet bør elimineres og dipeptidet sekvensen asp-pro ...

<ol>
	<li>Call, M. E., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+view+into+the+blind+spot:+solution+NMR+provides+new+insights+into+signal+transduction+across+the+lipid+bilayer.">A view into the blind spot: solution NMR provides new insights into signal transduction across the lipid bilayer.</a> Structure. 18, 1559-1569 (2010).</li><li>Bocharov, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+of+the+dimeric+transmembrane+domain+of+the+growth+factor+receptor+ErbB2+presumably+corresponding+to+the+receptor+active+state.">Spatial structure of the dimeric transmembrane domain of the growth factor receptor ErbB2 presumably corresponding to the receptor active state.</a> The Journal of Biological Chemistry. 283, 6950-6956 (2008).</li><li>Mineev, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+of+the+transmembrane+domain+heterodimer+of+ErbB1+and+ErbB2+receptor+tyrosine+kinases.">Spatial structure of the transmembrane domain heterodimer of ErbB1 and ErbB2 receptor tyrosine kinases.</a> J. Mol. Biol. 400, 231-243 (2010).</li><li>Mineev, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+and+dimer--monomer+equilibrium+of+the+ErbB3+transmembrane+domain+in+DPC+micelles.">Spatial structure and dimer--monomer equilibrium of the ErbB3 transmembrane domain in DPC micelles.</a> Biochim. Biophys Acta. 1808, 2081-2088 (2011).</li><li>Lau, T. L., Kim, C., Ginsberg, M. H., Ulmer, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+integrin+alphaIIbbeta3+transmembrane+complex+explains+integrin+transmembrane+signalling.">The structure of the integrin alphaIIbbeta3 transmembrane complex explains integrin transmembrane signalling.</a> The EMBO Journal. 28, 1351-1361 (2009).</li><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+a+receptor+with+two+associating+transmembrane+domains+on+the+cell+surface:+integrin+alphaIIbbeta3.">The structure of a receptor with two associating transmembrane domains on the cell surface: integrin alphaIIbbeta3.</a> Molecular Cell. 34, 234-249 (2009).</li><li>Call, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+zetazeta+transmembrane+dimer+reveals+features+essential+for+its+assembly+with+the+T+cell+receptor.">The structure of the zetazeta transmembrane dimer reveals features essential for its assembly with the T cell receptor.</a> Cell. 127, 355-368 (2006).</li><li>Call, M. E., Wucherpfennig, K. W., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structural+basis+for+intramembrane+assembly+of+an+activating+immunoreceptor+complex.">The structural basis for intramembrane assembly of an activating immunoreceptor complex.</a> Nat. Immunol. 11, 1023-1029 (2010).</li><li>Diefenderfer, C., Lee, J., Mlyanarski, S., Guo, Y., Glover, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliable+expression+and+purification+of+highly+insoluble+transmembrane+domains.">Reliable expression and purification of highly insoluble transmembrane domains.</a> Anal. Biochem. 384, 274-278 (2009).</li><li>Schnell, J. R., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+the+M2+proton+channel+of+influenza+A+virus.">Structure and mechanism of the M2 proton channel of influenza A virus.</a> Nature. 451, 591-595 (2008).</li><li>Xie, X. Q., Zhao, J., Zheng, H. E. x. p. r. e. s. s. i. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=purification,+and+isotope+labeling+of+cannabinoid+CB2+receptor+fragment,+CB2(180-233).">purification, and isotope labeling of cannabinoid CB2 receptor fragment, CB2(180-233).</a> Protein Expr. Purif. 38, 61-68 (2004).</li><li>Miozzari, G. F., Yanofsky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+of+the+leader+region+of+the+Escherichia+coli+tryptophan+operon.">Translation of the leader region of the Escherichia coli tryptophan operon.</a> J. Bacteriol. 133, 1457-1466 (1978).</li><li>North, C. L., Blacklow, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+independence+of+ligand-binding+modules+five+and+six+of+the+LDL+receptor.">Structural independence of ligand-binding modules five and six of the LDL receptor.</a> Biochemistry. 38, 3926-3935 (1999).</li><li>Staley, J. P., Kim, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+a+native-like+subdomain+in+a+partially+folded+intermediate+of+bovine+pancreatic+trypsin+inhibitor.">Formation of a native-like subdomain in a partially folded intermediate of bovine pancreatic trypsin inhibitor.</a> Protein Sci. 3, 1822-1832 (1994).</li><li>Narayanan, S., Sato, T., Wolfe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C-terminal+region+of+signal+peptide+peptidase+defines+a+functional+domain+for+intramembrane+aspartic+protease+catalysis.">A C-terminal region of signal peptide peptidase defines a functional domain for intramembrane aspartic protease catalysis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 282, 20172-20179 (2007).</li><li>Klunk, W. E., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer's+beta-amyloid+protein+is+covalently+modified+when+dissolved+in+formic+acid.">Alzheimer's beta-amyloid protein is covalently modified when dissolved in formic acid.</a> J. Neurochem. 54, 2050-2056 (1990).</li><li>Klunk, W. E., Xu, C. J., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMR+identification+of+the+formic+acid-modified+residue+in+Alzheimer's+amyloid+protein.">NMR identification of the formic acid-modified residue in Alzheimer's amyloid protein.</a> J. Neurochem. 62, 349-354 (1994).</li><li>Previero, A., Coletti-Previero, M. A., Cavadore, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reversible+chemical+modification+of+the+tryptophan+residue.">A reversible chemical modification of the tryptophan residue.</a> Biochim. Biophys. Acta. 147, 453-461 (1967).</li><li>Kim, H. J., Howell, S. C., Van Horn, W. D., Jeon, Y. H., Sanders, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Advances+in+the+Application+of+Solution+NMR+Spectroscopy+to+Multi-Span+Integral+Membrane+Proteins.">Recent Advances in the Application of Solution NMR Spectroscopy to Multi-Span Integral Membrane Proteins.</a> Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 55, 335-360 (2009).</li></ol>

Uttrykk for trpLE-TM fusjoner. Vår erfaring er trpLE-TM fusjoner dårlig uttrykt i rike kultur medium ved 37 ° C, og kultur forholdene beskrevet her har vist seg vellykket for mange forskjellige sekvenser som inneholder 1-4 TM domener med avkastning spenner 50-150 mg / L av ren, intakt fusion. Fusions koding tre-eller fire-TM GPCR fragmenter (human CCR5 TM1-TM3 og TM4-TM7, henholdsvis) eller en kjerne katalytisk fragment av menneskelig signal peptid peptidase (fire TM-domener, se ref 15) represente...

Denne protokollen detaljer en prosedyre vi har utviklet for å produsere disulfid-stabiliserte komplekser av transmembrane (TM) peptider for strukturelle studier med løsning NMR. Prosedyren tar fordel av den robuste uttrykket som gis gjennom den ΔtrpLE1413 fusion system (se nedenfor) og tillater TM peptid komplekser av definert sammensetning som skal genereres ved hjelp av avanserte stabil-isotope merkingsteknikker for moderne multi-dimensjonale NMR eksperimenter. Vi har ansatt disse teknikkene for å bestemme flere NMR strukturer som avslørte ny og viktig informasjon om hvordan lymfocytt-aktiverende immunoreceptors er samlet fra flere membran protein subenheter gjennom samspill mellom sine TM domener (nylig gjennomgått i 1). Disse teknikkene er gjeldende for mange andre membran protein systemer samt et bredt utvalg av nedstrøms analysemetoder i tillegg til løsning NMR. Mens eksempel gitt her benytter innfødte cysteinresterå skape et komplekst som etterligner naturlig disulfid-limt protein, er utformingen like godt egnet for å skape konstruert disulfidbindinger å stabilisere komplekser som normalt holdes sammen av svakere, ikke-kovalente interaksjoner som homo-og hetero-dimeriske TM komplekser av epidermal vekstfaktor reseptor (EGFR)-familien proteiner 2-4 eller heterodimere αβ integrin komplekser 5,6. Ekstremt hydrofobe peptidsekvenser slik som de avledet fra lipid bilayer-spenner delene for TM proteiner er overmåte vanskelige fag for biokjemiske og biofysiske studier. I tillegg til å være svært utfordrende å manipulere ved hjelp av standard protein og peptid kjemi teknikker, er de ofte ganske giftig for celler og er derfor vanskelig å produsere rekombinant. Vi 7,8 og andre 9-11 har hatt betydelig suksess uttrykker slike vanskelige peptidsekvenser i bakterier som i-frame karboksy-terminalfusjoner til en modifisert versjon av ΔtrpLE1413 sekvensen avledet fra E. coli trp operon 12. Den ~ 13 kDa trpLE polypeptid kodet for av denne sekvensen kan produseres ved høye nivåer under en T7 promoter og er i sin helhet lokalisert til inklusjonslegemer der problemer knyttet til toksisitet og / eller ustabilitet blir omgått. Modifisering av sekvensen ved tilsetning av en amino-terminal 9-histidin tag 13 og eliminering av interne metionin og cystein rester fra trpLE sekvensen 14 medbringes trpLE-peptid fusjoner å renses ved metall-ion affinitetskromatografi og fordøyd med cyanogenbromid (CNBr ) for å frigjøre den ønskede peptidsekvens. Vi har med hell brukt dette systemet til å uttrykke mer enn et dusin forskjellige sekvenser som trpLE fusjoner representerer membran protein fragmenter som inneholder så mange som fire TM domener (7,8 og upubliserte resultater, se også DISKUSJON avsnitt). DenNøkkelen innovasjon i denne protokollen er identifisering av forholdene som ustrukturerte og svært dårlig løselig trpLE-TM fusjoner kan være effektivt disulfid-kryssbundet i sammenheng med en strømlinjeformet arbeidsflyt. Flere aspekter av high-yield uttrykk, håndtering og rensing av peptid produkter har også blitt grundig optimalisert, og anbefalingene som presenteres her er like relevant for produksjon av ikke-disulfid-tverrbundede (monomere) TM peptid produkter.

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagens / Material </td><td> Selskapet </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cyanbromid </td><td> ALDRICH </td><td> P.No-C91492, CAS-506-68-3 </td><td> STOFF. Farlig gods. Meget giftig ved innånding, hudkontakt og svelging. Ved kontakt med syre utvikles meget giftig gass. Meget giftig for vannlevende organismer, kan forårsake uønskede langtidsvirkninger i vannmiljøet. </td></tr><tr><td> Trifluoreddiksyre </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> P.CODE-1000984387, CAS-nummer 76-05-1 </td><td> STOFF. Farlig gods., Sterkt etsende. Farlig ved innånding. Skadelig for vannlevende organismer: kan forårsake uønskede langtidsvirkninger i vannmiljøet miljø. </td></tr><tr><td> 2-merkaptoetanol </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> P.No M7154, CAS-nummer 60-24-2 </td><td> STOFF. Farlig gods. Giftig ved innånding, hudkontakt og svelging. Irriterer huden. Fare for alvorlig øyeskade. Kan gi allergi ved hudkontakt. Meget giftig for vannlevende organismer, kan forårsake uønskede langtidsvirkninger i vannmiljøet. </td></tr><tr><td> 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Produktnummer 52512, CAS-nr. 920-66-1 </td><td> STOFF. Farlig gods. Farlig ved innånding og svelging. Etsende. </td></tr><tr><td> Maursyre </td><td> Merck KGaA </td><td> K41186564 </td><td> Brannfarlig væske og damp. Gir alvorlige etseskader på hud og øyne. </td></tr><tr><td> Urea </td><td> UNIVAR, AJAX Finechem </td><td> Produktnummer, 817, CAS-No 57-13-6 </td><td> Ved oppvarming, decomposes til karbondioksid og ammoniakk, hvis brent, avgir små mengder av nitrogenoksider. Kan føre til rødhet og irritasjon av hud og øyne. </td></tr><tr><td> Guanidin-hydroklorid </td><td> Amresco </td><td> P.No-M110, CAS-nummer: 50-01-1 </td><td> Farlig ved svelging, Gir alvorlig øyeirritasjon, Irriterer huden, Akutt toksisitet Oral, hudirriterende, Eye Irriterende. </td></tr><tr><td> TRITON X-100 </td><td> SIGMA </td><td> Produktnummer-T8532 CAS No: 9002-93-1 </td><td> Triton X-100 er en ikke-ionisk vaskemiddel, 100% aktiv bestanddel, som ofte brukes i biokjemiske applikasjoner å solubilisere proteiner. Triton X-100 har ingen antimikrobielle egenskaper og anses som en forholdsvis mild ikke-denaturerende vaskemiddel </td></tr><tr><td> Hans-Select Nikkel-Affinity gel </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Katalog Num-P6611 </td><td> IS-Select Nikkel Affinity Gel er en immobilisert metall-ion affinitetskromatografi (IMAC) produktet. HIS-Select Nickel Affinity gel er en proprietær quadridentate chelat på beaded agarose belastet med nikkel som er laget spesielt for binde histidin inneholder proteiner. </td></tr><tr><td> (-)-Glutation, oksidert </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Katalog num 150568 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Misonix S-3000 sonikator </td><td> QSONICA </td><td> S-3000 (utgått) </td><td> Max utgangseffekt 600 watt. 1/2-inch utskiftbar-tip probe tar 1/2-inch høy intensitet, høy-volum tips og en rekke høy intensitet, lav-volum tips. Nærmeste modeller som for tiden er dette selskapet er Q500 og Q700. </td></tr><tr><td> RP-HPLC: Biologisk DuoFlow kromatografi system, Software versjon 5.3 </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> Katalog Num 760-0047, Config No: AU500571, Serial No: 484BR3705 </td><td> Peptider binder seg til reversfase HPLC kolonner i høy aqueous mobile fase og elueres fra RP HPLC kolonner med høy organisk mobil fase. I RP HPLC peptider skilles basert på deres hydrofobe karakter. Peptider kan skilles ved å kjøre en lineær gradient av det organiske løsningsmiddel. </td></tr><tr><td> Prep HT C3 Zorbax 300SB-Analytisk HPLC kolonne, 21,2 x 150 mm, 5 mikrometer partikkelstørrelse </td><td> Agilent </td><td> Produkt nr: 895150-909 </td><td> Reversert-fase HPLC COLUM </td></tr><tr><td> NuPAGE 12% Bis-Tris Gels </td><td> Life Technologies </td><td> NP0341BOX </td><td> Pre støpte geler for protein elektroforese </td></tr><tr><td> Slide-A-Lyzer G2 Dialyse Kassetter, 3.5K MWCO </td><td> Thermo Scientific </td><td> Produkt nr: 87724 </td><td> Eksempel dialyse </td></tr></tbody></table>

production of disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes for structural studies

Fysiske samspill mellom lipid-innebygde alpha-helical domener av membran proteiner spiller en avgjørende rolle i folding og montering av membran protein komplekser og i dynamiske prosesser som transmembrane (TM) signal og regulering av celle-overflate protein nivåer. Forstå strukturelle trekk som driver foreningen av bestemte sekvenser krever avanserte biofysiske og biokjemiske analyser av TM peptid komplekser. Imidlertid gjør den ekstreme hydrofobitet for TM domener dem svært vanskelig å manipulere med standard peptidkjemi teknikker, og produksjon av passende studie materiale ofte viser uoverkommelig utfordrende. Identifisere hvilke vilkår peptider kan vedta stabile spiralformede conformations og form komplekser legger spontant en ytterligere vanskelighetsgrad. Her presenterer vi en prosedyre for fremstilling av homo-eller hetero-dimeriske TM peptid komplekser fra materialer som er uttrykt i E. coli, således tillater inkorporering av stabile isotopen etiketter for nukleær magnetisk resonans (NMR) eller ikke-naturlige aminosyrer for andre programmer relativt billig. Nøkkelen innovasjon i denne metoden er at TM komplekser produsert og renset som kovalent assosierte (disulfid-kryssbundet) sammenstillinger som kan danne stabile, støkiometrisk og homogen strukturer når rekonstituert inn vaskemiddel, lipid eller andre membran-mimetiske materialer. Vi presenterer også nøye optimalisert prosedyrer for uttrykk og rensing som er like anvendelige enten produsere enkle TM domener eller kryssbundet komplekser og gi råd for å tilpasse disse metodene til nye TM sekvenser.

Nivået av uttrykket oppnådd for trpLE fusjoner er variabel og sterkt avhengig aminosyre sekvensen av det vedlagte peptid. Fig. 3 viser SDS-PAGE-analyse av pre-induksjon (kolonne 1) og time-of-innhøsting (søyle 2) prøver fra en kultur som ga ca 120 mg ren, intakt trpLE-DAP12TM fusion fra 1 liter av kultur og 4 ml nikkel. Alle de trpLE-DAP12TM fusjon ble lokalisert til inklusjonslegeme pellet (felt 4), i motsetning til supernatant (felt 3). Omtrent 70% av nikkel-renset tr...

Watch this Scientific Journal Video about Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies at JoVE.com

Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies

Biofysiske og biokjemiske studier av samspill mellom membran-innebygde protein domener står overfor mange tekniske utfordringer, hvorav den første er å skaffe riktig studie materiale. Denne artikkelen beskriver en protokoll for fremstilling og rensing av disulfid-stabiliserte transmembrane peptid komplekser som er egnet for strukturell analyse av oppløsning nukleær magnetisk resonans (NMR) og andre analytiske programmer.

Produksjon av disulfide-stabilisert transmembrane Peptid Komplekser for Strukturelle studier

Physical  interactions among the lipid-embedded alpha-helical domains of membrane  proteins play a crucial role in folding and assembly of membrane ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Surface Passivation for Single-molecule Protein Studies

Overflate Passivisering for single-molekyl Protein Studies

Single-molecule fluorescence spectroscopy has proven to be instrumental in understanding a wide range of biological phenomena at the nanoscale. Important ...

Steady-state, Pre-steady-state, and Single-turnover Kinetic Measurement for DNA Glycosylase Activity

Steady-state, Pre-steady-state, og Single-omsetningen Kinetic måling for DNA glykosylase aktivitet

Human 8-oxoguanine DNA glycosylase (OGG1) excises the mutagenic oxidative DNA lesion 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8-oxoG) from DNA. Kinetic characterization ...

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Copper (I) binding by metallochaperone transport proteins prevents copper oxidation and release of the toxic ions that may participate in harmful redox ...

Thin-layer Chromatographic (TLC) Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Thin-layer Chromatographic TLC Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Tynnsjiktskromatografiske (TLC) separasjoner og biologiske tester av planteekstrakter for å identifisere antimikrobielle forbindelser

A common screen for plant antimicrobial compounds consists of separating plant extracts by paper or thin-layer chromatography (PC or TLC), exposing the ...

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Kontrollert Photoredox Ring-åpning polymerisering av O- Carboxyanhydrides formidlet av Ni/Zn komplekser

Here, we describe an effective protocol that combines photoredox Ni/Ir catalysis with the use of a Zn-alkoxide for efficient ring-opening polymerization, ...

Preparation of Stable Bicyclic Aziridinium Ions and Their Ring-Opening for the Synthesis of Azaheterocycles

Utarbeidelse av stabile bisyklisk Aziridinium ioner og deres Ring-åpning for syntese av Azaheterocycles

Bicyclic aziridinium ions were generated by the removal of an appropriate leaving group through internal nucleophilic attack by nitrogen atom in the ...

Novel Techniques for Observing Structural Dynamics of Photoresponsive Liquid Crystals

Romanen teknikker for å observere strukturelle dynamikken i Photoresponsive flytende krystaller

We discuss in this article the experimental measurements of the molecules in liquid crystal (LC) phase using the time-resolved infrared (IR) vibrational ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Analysere Protein arkitekturer og Protein-Ligand komplekser av integrerende strukturelle massespektrometri

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Experimental Methods for Efficient Solar Hydrogen Production in Microgravity Environment

Eksperimentelle metoder for effektiv Solar hydrogen produksjon i mikrogravitasjon miljø

Long-term space flights and cis-lunar research platforms require a sustainable and light life-support hardware which can be reliably employed outside the ...