Name: production of disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes for structural studies
Uploaded: 2013-03-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies at JoVE.com

Finansieringen för detta arbete ges av den nationella hälso-och Medicinska forskningsrådet i Australien (NHMRC projektbidrag 1.011.352 till MEC och MJC, oberoende forskningsinstitut Infrastruktur stödsystem [IRIISS] bidrag till WEHI) och den viktorianska regeringen (Veski Innovation Fellowship till MEC; Viktorianska delstatsregeringen operativa infrastruktur Stöd till WEHI). MEC är en drottning Elizabeth II kamrat av Australian Research Council. EFXB erkänner stöd från Norma Hilda Schuster Scholarship Program vid University of Melbourne.

1. Kloning och konstruera design Klona sekvenserna av intresse i PMM-peptid vektorn (som kan tillhandahållas på begäran) med användning av Hindlll och BamHI restriktionsställen (se figur 1). Den dubbelsträngade DNA-insatsen bör innehålla, i följande ordning: ett Hindlll-ställe, en enda metionin kodon för CNBr-klyvning, E. E. coli kodon-optimerad kodande sekvens, ett stoppkodon, ett BamHI-ställe. Alla andra metioniner i peptiden bör elimineras och dipeptid...

<ol>
	<li>Call, M. E., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+view+into+the+blind+spot:+solution+NMR+provides+new+insights+into+signal+transduction+across+the+lipid+bilayer.">A view into the blind spot: solution NMR provides new insights into signal transduction across the lipid bilayer.</a> Structure. 18, 1559-1569 (2010).</li><li>Bocharov, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+of+the+dimeric+transmembrane+domain+of+the+growth+factor+receptor+ErbB2+presumably+corresponding+to+the+receptor+active+state.">Spatial structure of the dimeric transmembrane domain of the growth factor receptor ErbB2 presumably corresponding to the receptor active state.</a> The Journal of Biological Chemistry. 283, 6950-6956 (2008).</li><li>Mineev, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+of+the+transmembrane+domain+heterodimer+of+ErbB1+and+ErbB2+receptor+tyrosine+kinases.">Spatial structure of the transmembrane domain heterodimer of ErbB1 and ErbB2 receptor tyrosine kinases.</a> J. Mol. Biol. 400, 231-243 (2010).</li><li>Mineev, K. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+structure+and+dimer--monomer+equilibrium+of+the+ErbB3+transmembrane+domain+in+DPC+micelles.">Spatial structure and dimer--monomer equilibrium of the ErbB3 transmembrane domain in DPC micelles.</a> Biochim. Biophys Acta. 1808, 2081-2088 (2011).</li><li>Lau, T. L., Kim, C., Ginsberg, M. H., Ulmer, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+integrin+alphaIIbbeta3+transmembrane+complex+explains+integrin+transmembrane+signalling.">The structure of the integrin alphaIIbbeta3 transmembrane complex explains integrin transmembrane signalling.</a> The EMBO Journal. 28, 1351-1361 (2009).</li><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+a+receptor+with+two+associating+transmembrane+domains+on+the+cell+surface:+integrin+alphaIIbbeta3.">The structure of a receptor with two associating transmembrane domains on the cell surface: integrin alphaIIbbeta3.</a> Molecular Cell. 34, 234-249 (2009).</li><li>Call, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+zetazeta+transmembrane+dimer+reveals+features+essential+for+its+assembly+with+the+T+cell+receptor.">The structure of the zetazeta transmembrane dimer reveals features essential for its assembly with the T cell receptor.</a> Cell. 127, 355-368 (2006).</li><li>Call, M. E., Wucherpfennig, K. W., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structural+basis+for+intramembrane+assembly+of+an+activating+immunoreceptor+complex.">The structural basis for intramembrane assembly of an activating immunoreceptor complex.</a> Nat. Immunol. 11, 1023-1029 (2010).</li><li>Diefenderfer, C., Lee, J., Mlyanarski, S., Guo, Y., Glover, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reliable+expression+and+purification+of+highly+insoluble+transmembrane+domains.">Reliable expression and purification of highly insoluble transmembrane domains.</a> Anal. Biochem. 384, 274-278 (2009).</li><li>Schnell, J. R., Chou, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+the+M2+proton+channel+of+influenza+A+virus.">Structure and mechanism of the M2 proton channel of influenza A virus.</a> Nature. 451, 591-595 (2008).</li><li>Xie, X. Q., Zhao, J., Zheng, H. E. x. p. r. e. s. s. i. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=purification,+and+isotope+labeling+of+cannabinoid+CB2+receptor+fragment,+CB2(180-233).">purification, and isotope labeling of cannabinoid CB2 receptor fragment, CB2(180-233).</a> Protein Expr. Purif. 38, 61-68 (2004).</li><li>Miozzari, G. F., Yanofsky, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translation+of+the+leader+region+of+the+Escherichia+coli+tryptophan+operon.">Translation of the leader region of the Escherichia coli tryptophan operon.</a> J. Bacteriol. 133, 1457-1466 (1978).</li><li>North, C. L., Blacklow, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+independence+of+ligand-binding+modules+five+and+six+of+the+LDL+receptor.">Structural independence of ligand-binding modules five and six of the LDL receptor.</a> Biochemistry. 38, 3926-3935 (1999).</li><li>Staley, J. P., Kim, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+a+native-like+subdomain+in+a+partially+folded+intermediate+of+bovine+pancreatic+trypsin+inhibitor.">Formation of a native-like subdomain in a partially folded intermediate of bovine pancreatic trypsin inhibitor.</a> Protein Sci. 3, 1822-1832 (1994).</li><li>Narayanan, S., Sato, T., Wolfe, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+C-terminal+region+of+signal+peptide+peptidase+defines+a+functional+domain+for+intramembrane+aspartic+protease+catalysis.">A C-terminal region of signal peptide peptidase defines a functional domain for intramembrane aspartic protease catalysis.</a> The Journal of Biological Chemistry. 282, 20172-20179 (2007).</li><li>Klunk, W. E., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alzheimer's+beta-amyloid+protein+is+covalently+modified+when+dissolved+in+formic+acid.">Alzheimer's beta-amyloid protein is covalently modified when dissolved in formic acid.</a> J. Neurochem. 54, 2050-2056 (1990).</li><li>Klunk, W. E., Xu, C. J., Pettegrew, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMR+identification+of+the+formic+acid-modified+residue+in+Alzheimer's+amyloid+protein.">NMR identification of the formic acid-modified residue in Alzheimer's amyloid protein.</a> J. Neurochem. 62, 349-354 (1994).</li><li>Previero, A., Coletti-Previero, M. A., Cavadore, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reversible+chemical+modification+of+the+tryptophan+residue.">A reversible chemical modification of the tryptophan residue.</a> Biochim. Biophys. Acta. 147, 453-461 (1967).</li><li>Kim, H. J., Howell, S. C., Van Horn, W. D., Jeon, Y. H., Sanders, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+Advances+in+the+Application+of+Solution+NMR+Spectroscopy+to+Multi-Span+Integral+Membrane+Proteins.">Recent Advances in the Application of Solution NMR Spectroscopy to Multi-Span Integral Membrane Proteins.</a> Prog. Nucl. Magn. Reson. Spectrosc. 55, 335-360 (2009).</li></ol>

Uttryck av trpLE-TM fusioner. Enligt vår erfarenhet är trpLE-TM fusioner dåligt uttryckt i rikt odlingsmedium vid 37 ° C och odlingsbetingelser som beskrivs här har visat sig vara framgångsrika för många olika sekvenser innehållande 1-4 TM domäner med avkastningen varierar 50 till 150 mg / l av ren, intakt fusion. Fusioner kodning tre-eller fyra-TM GPCR fragment (humant CCR5 TM1-TM3 och TM4-TM7, respektive) eller en kärna katalytisk fragment av humant signalpeptid peptidas (fyra TM-domäner, se ref <...

Detta protokoll detaljer ett förfarande som vi har utvecklat för att producera disulfid-stabiliserade komplex av transmembran (TM) peptider för strukturella studier med lösning NMR. Proceduren tar fördel av den robusta uttryck som ges av ΔtrpLE1413 fusion systemet (se nedan) och låter TM peptid komplex av definierad sammansättning som skall genereras med hjälp av sofistikerade stabil-isotopmärkning tekniker för moderna flerdimensionella NMR-experiment. Vi har använt dessa tekniker för att bestämma flera NMR strukturer som avslöjade viktig ny information om hur lymfocyt-aktiverande immunoreceptors monteras från flera subenheter membran protein genom interaktioner bland sina TM domäner (nyligen granskas 1). Dessa tekniker kan tillämpas på många andra system membranprotein samt ett brett utbud av nedströms analysmetoder förutom lösning NMR. Medan exemplet som ges här utnyttjar nativa cysteinresteratt skapa en komplex som efterliknar naturligt disulfidbunden proteinet, är konstruktionen lika väl lämpad för att skapa modifierade disulfidbindningar att stabilisera komplex som normalt hålls samman av svagare, icke-kovalenta interaktioner såsom homo-och hetero-dimera TM komplex av epidermal tillväxtfaktor (EGFR)-familjen proteiner 2-4 eller heterodimera αβ integrin komplex 5,6. Extremt hydrofoba peptidsekvenser såsom de som härrör från lipiddubbelskiktet-överbryggande delar av TM-proteiner är ytterst svåra ämnen för biokemiska och biofysiska studier. Förutom att vara mycket utmanande att manipulera med standard protein och peptid tekniker kemi, är de ofta ganska toxisk för celler och är därför svåra att framställa rekombinant. Vi 7,8 och andra 9-11 har haft betydande framgång som uttrycker sådana svåra peptidsekvenser i bakterier som i ram karboxiterminalfusioner till en modifierad version av ΔtrpLE1413 sekvens härledd från E. E. coli trp-operonet 12. Den ~ 13 kDa trpLE polypeptid som kodas av denna sekvens kan produceras på höga nivåer under en T7-promotor och är helt lokaliserad till inklusionskroppar där problem med toxicitet och / eller instabilitet kringgås. Modifiering av sekvensen genom tillsats av en aminoterminal 9-histidinmärkning 13 och eliminering av interna metionin och cystein rester från trpLE sekvensen 14 tillåts trpLE-peptid-fusioner som skall renas genom metall-jon affinitetskromatografi och digererades med cyanogenbromid (CNBr ) för att frigöra den önskade peptidsekvensen. Vi har framgångsrikt använt detta system för att uttrycka mer än ett dussin olika sekvenser som trpLE fusioner representerar fragment membranprotein som innehåller så många som fyra TM-domäner (7,8 och opublicerade resultat, se även DISKUSSION avsnitt). Denviktig innovation i detta protokoll är identifieringen av villkoren för ostrukturerade och mycket svårlösliga trpLE-TM fusioner kan vara effektivt disulfid-tvärbunden i samband med ett strömlinjeformat arbetsflöde. Flera aspekter av högavkastande uttryck, hantering och rening av peptid produkter har också noggrant optimerats och rekommendationerna som presenteras här är lika relevanta för produktion av icke-disulfid-tvärbundna (monomer) TM peptid-produkter.

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn på reagens / material </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cyanogenbromid </td><td> ALDRICH </td><td> P.No-C91492, CAS-506-68-3 </td><td> Farligt ämne. Farligt gods. Mycket giftigt vid inandning, hudkontakt och förtäring. Kontakt med syror frigör mycket giftig gas. Mycket giftigt för vattenlevande organismer, kan orsaka långvariga negativa effekter i vattenmiljön. </td></tr><tr><td> Trifluorättiksyra </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> P.CODE-1000984387, CAS-nummer 76-05-1 </td><td> Farligt ämne. Farligt gods., Starkt frätande. Farligt vid inandning. Skadligt för vattenlevande organismer, kan orsaka långvariga negativa effekter i vattenmiljön. </td></tr><tr><td> 2-merkaptoetanol </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> P.No M7154, CAS-nummer 60-24-2 </td><td> Farligt ämne. Farligt gods. Giftigt vid inandning, hudkontakt och förtäring. Irriterar huden. Risk för allvarliga ögonskador. Kan ge allergi vid hudkontakt. Mycket giftigt för vattenlevande organismer, kan orsaka långvariga negativa effekter i vattenmiljön. </td></tr><tr><td> 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-propanol </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Produktnummer 52512, CAS-nr. 920-66-1 </td><td> Farligt ämne. Farligt gods. Farligt vid inandning och förtäring. Frätande. </td></tr><tr><td> Myrsyra </td><td> Merck KGaA </td><td> K41186564 </td><td> Brandfarlig vätska och ånga. Orsakar allvarliga frätskador på hud och ögon. </td></tr><tr><td> Urea </td><td> Univar, AJAX Finechem </td><td> Produktnummer, 817, CAS-nr 57-13-6 </td><td> Vid upphettning decemberomposes till koldioxid och ammoniak, om bränns avger små mängder kväveoxider. Kan orsaka rodnad och irritation av hud och ögon. </td></tr><tr><td> Guanidinhydroklorid </td><td> Amresco </td><td> P.No-M110, CAS-nummer: 50-01-1 </td><td> Farligt vid förtäring, Orsakar allvarlig ögonirritation, Irriterar huden, akut toxicitet Oral, hudirriterande irriterande för ögonen. </td></tr><tr><td> TRITON X-100 </td><td> SIGMA </td><td> Produktnummer-T8532 CAS-nr: 9002-93-1 </td><td> Triton X-100 är en nonjonisk detergent, 100% aktiv beståndsdel, som ofta används i biokemiska tillämpningar att solubilisera proteiner. Triton X-100 inte har några antimikrobiella egenskaper och betraktas som en förhållandevis mild icke-denaturerande rengöringsmedel </td></tr><tr><td> His-Välj nickel-affinitetsgel </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Katalog Num-P6611 </td><td> IS-Välj Nickel Affinity Gel är en immobiliserad metall-jon affinitetskromatografi (IMAC) produkt. His-Välj Nickel Affinity gel är en patentskyddad quadridentate kelat på pärlstav agaros laddad med nickel som är utformad för att specifikt binda histidin innehållande proteiner. </td></tr><tr><td> (-)-Glutation, oxiderad </td><td> SIGMA-ALDRICH </td><td> Katalog num 150.568 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Misonix S-3000 sonikator </td><td> QSONICA </td><td> S-3000 (utgångna) </td><td> Max effekt 600 watt. 1/2-tums utbytbar-tip sond tar 1/2-tums högintensiva, stora volymer tips och en rad hög intensitet, låg volym tips. Närmaste modeller tillgängliga från detta företag är Q500 och Q700. </td></tr><tr><td> RP-HPLC: Biologisk Tvåkanals kromatografisystem, programvaruversion 5,3 </td><td> Bio-Rad Laboratories </td><td> Katalog Num 760-0047, Konfig No: AU500571, Serial No: 484BR3705 </td><td> Peptider binder till omvänd fas-HPLC kolonner i hög vattenhaltigueous mobil fas och elueras från RP-HPLC-kolonner med hög organisk mobil fas. I RP HPLC peptiderna separeras baserat på deras hydrofoba karaktär. Peptider kan separeras genom att köra en linjär gradient av det organiska lösningsmedlet. </td></tr><tr><td> Prep HT C3 ZORBAX 300SB-Analytisk HPLC kolonn, 21,2 x 150 mm, 5 fim partikelstorlek </td><td> Agilent </td><td> Artikelnr: 895150-909 </td><td> Omvänd-fas HPLC-kolonn </td></tr><tr><td> NuPAGE 12% Bis-Tris Gel </td><td> Life Technologies </td><td> NP0341BOX </td><td> Pre gjutna geler för protein-elektrofores </td></tr><tr><td> Slide-A-Lyzer G2 Dialys kassetter, 3,5 K MWCO </td><td> Thermo Scientific </td><td> Artikelnr: 87724 </td><td> Prov dialys </td></tr></tbody></table>

production of disulfide-stabilized transmembrane peptide complexes for structural studies

Fysiska interaktioner mellan lipid-inbäddade alfa-spiralformade domäner av membranproteiner spelar en avgörande roll för veckning och sammansättning av komplex membranprotein och dynamiska processer, såsom transmembran (TM) signalering och reglering av cellytprotein nivåer. Förstå de strukturella drag som driver sammanslutning av enskilda sekvenser kräver sofistikerade biofysiska och biokemiska analyser av TM peptidkomplex. Emellertid gör den extrema hydrofobiciteten av TM-domäner dem mycket svåra att manipulera med användning av standardtekniker peptidkemi, och produktion av lämpligt studiematerial ofta visar oöverkomligt utmanande. Identifiera vilka villkor peptider kan anta stabila spiralformade konformationer och komplex bildas spontant lägger ytterligare en svårighetsgrad. Här presenterar vi ett förfarande för framställning av homo-eller hetero-dimera TM komplex peptid från material som uttrycks i E. colI, vilket möjliggör inkorporering av stabila isotopen etiketter för kärnmagnetisk resonans (NMR) eller icke-naturliga aminosyror för andra tillämpningar relativt billigt. Nyckeln innovationen i denna metod är att TM komplex produceras och renas som kovalent associerade (disulfid-tvärbundna) anordningar som kan bilda stabila, stökiometrisk och homogena strukturer vid rekonstituering i tvättmedel, lipid eller andra membran-mimetiska material. Vi presenterar också noggrant optimerade rutiner för uttryck och rening som är lika tillämpliga om att producera enkla TM domäner eller tvärbundna komplex och ge råd för att anpassa dessa metoder till nya TM-sekvenser.

Nivån av expression uppnås för trpLE fusioner är variabel och starkt beroende av den aminosyrasekvensen av den bifogade peptiden. Figur 3 visar SDS-PAGE-analys av före-induktion (spår 1) och time-of-skörd (spår 2) prov från en kultur som gav ungefär 120 mg ren, intakt trpLE-DAP12TM fusion från 1 liter kultur och 4 ml nickel matris. Alla de trpLE-DAP12TM fusion lokaliserad till inklusionskropp pelleten (spår 4) i motsats till supernatanten (fält 3). Cirka 70% av ...

Watch this Scientific Journal Video about Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies at JoVE.com

Production of Disulfide-stabilized Transmembrane Peptide Complexes for Structural Studies

Biofysiska och biokemiska studier av interaktioner mellan membran-inbäddade proteindomäner inför många tekniska utmaningar, varav den första är att få lämplig studiematerial. Denna artikel beskriver ett protokoll för framställning och rening av disulfid-stabiliserade komplexen transmembrana peptid som är lämpliga för strukturell analys genom lösning kärnmagnetisk resonans (NMR) och andra analytiska tillämpningar.

Produktion av disulfid-stabiliserade transmembran peptidkomplex för strukturstudier

Physical  interactions among the lipid-embedded alpha-helical domains of membrane  proteins play a crucial role in folding and assembly of membrane ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Surface Passivation for Single-molecule Protein Studies

Ytpassivering för Single-molekyl Protein Studier

Single-molecule fluorescence spectroscopy has proven to be instrumental in understanding a wide range of biological phenomena at the nanoscale. Important ...

Steady-state, Pre-steady-state, and Single-turnover Kinetic Measurement for DNA Glycosylase Activity

Steady-state, Pre-steady-state, och Single-omsättningen Kinetic Mätning för DNA-glykosylas aktivitet

Human 8-oxoguanine DNA glycosylase (OGG1) excises the mutagenic oxidative DNA lesion 8-oxo-7,8-dihydroguanine (8-oxoG) from DNA. Kinetic characterization ...

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Structure and Coordination Determination of Peptide-metal Complexes Using 1D and 2D 1H NMR

Struktur och samordning Fastställande av peptid-metallkomplex Använda 1D och 2D<sup&gt; 1</sup&gt; H-NMR

Copper (I) binding by metallochaperone transport proteins prevents copper oxidation and release of the toxic ions that may participate in harmful redox ...

Thin-layer Chromatographic (TLC) Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Thin-layer Chromatographic TLC Separations and Bioassays of Plant Extracts to Identify Antimicrobial Compounds

Tunnskiktskromatografisk (TLC) Separationer och Bioanalyser av växtextrakt för att identifiera antimikrobiella föreningar

A common screen for plant antimicrobial compounds consists of separating plant extracts by paper or thin-layer chromatography (PC or TLC), exposing the ...

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Kontrollerade Photoredox ringa-öppning polymerisation av O- Carboxyanhydrides medieras av Ni/Zn komplex

Here, we describe an effective protocol that combines photoredox Ni/Ir catalysis with the use of a Zn-alkoxide for efficient ring-opening polymerization, ...

Preparation of Stable Bicyclic Aziridinium Ions and Their Ring-Opening for the Synthesis of Azaheterocycles

Beredning av stabil bicykliska Aziridinium joner och deras ringa-öppning för syntesen av Azaheterocycles

Bicyclic aziridinium ions were generated by the removal of an appropriate leaving group through internal nucleophilic attack by nitrogen atom in the ...

Novel Techniques for Observing Structural Dynamics of Photoresponsive Liquid Crystals

Nya tekniker för att observera strukturella dynamiken i Photoresponsive flytande kristaller

We discuss in this article the experimental measurements of the molecules in liquid crystal (LC) phase using the time-resolved infrared (IR) vibrational ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Analysera Protein arkitekturer och Protein-Ligand komplex av integrativ strukturella masspektrometri

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Experimental Methods for Efficient Solar Hydrogen Production in Microgravity Environment

Experimentella metoder för effektiv produktion av sol väte i Mikrogravitations miljö

Long-term space flights and cis-lunar research platforms require a sustainable and light life-support hardware which can be reliably employed outside the ...