Name: live imaging of apoptotic cell clearance during drosophila embryogenesis
Uploaded: 2013-08-18T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis at JoVE.com

Questo lavoro è stato sostenuto da una borsa Marie Curie di reinserimento Grant (IRG249084). Ringraziamo tutti i membri del laboratorio Kurant.

Per seguire le dinamiche di gioco cellulare per apoptosi in vivo due popolazioni di cellule devono essere etichettati: fagociti e cellule apoptotiche. Per contrassegnare le popolazioni di cellule fagocitarie che usiamo una linea Drosophila contenente il marcatore simulare cytGFP, che le etichette esclusivamente le cellule fagocitarie nell&#39;embrione: macrofagi, cellule gliali e ectoderma 8. Si possono utilizzare diversi marcatori per i fagociti, compre...

<ol>
	<li>Kinchen, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+to+die+for:+signaling+to+apoptotic+cell+removal+in+worm,+fly+and+mouse.">A model to die for: signaling to apoptotic cell removal in worm, fly and mouse.</a> Apoptosis. 15, 998-1006 (2010).</li><li>Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagosome+maturation:+going+through+the+acid+test.">Phagosome maturation: going through the acid test.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 9, 781-795 (2008).</li><li>Kinchen, J. M., Ravichandran, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytic+signaling:+you+can+touch,+but+you+can't+eat.">Phagocytic signaling: you can touch, but you can't eat.</a> Curr. Biol. 18, 521-524 (2008).</li><li>Stuart, L. M., Ezekowitz, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytosis:+elegant+complexity.">Phagocytosis: elegant complexity.</a> Immunity. 22, 539-550 (2005).</li><li>Lauber, K., Blumenthal, S. G., Waibel, M., Wesselborg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clearance+of+apoptotic+cells:+getting+rid+of+the+corpses.">Clearance of apoptotic cells: getting rid of the corpses.</a> Mol. Cell. 14, 277-287 (2004).</li><li>Henson, P. M., Hume, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+cell+removal+in+development+and+tissue+homeostasis.">Apoptotic cell removal in development and tissue homeostasis.</a> Trends Immunol. 27, 244-250 (2006).</li><li>Kurant, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Keeping+the+CNS+clear:+glial+phagocytic+functions+in+Drosophila.">Keeping the CNS clear: glial phagocytic functions in Drosophila.</a> Glia. 59, 1304-1311 (2011).</li><li>Kurant, E., Axelrod, S., Leaman, D., Gaul, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Six-microns-under+acts+upstream+of+Draper+in+the+glial+phagocytosis+of+apoptotic+neurons.">Six-microns-under acts upstream of Draper in the glial phagocytosis of apoptotic neurons.</a> Cell. 133, 498-509 (2008).</li><li>Mergliano, J., Minden, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase-independent+cell+engulfment+mirrors+cell+death+pattern+in+Drosophila+embryos.">Caspase-independent cell engulfment mirrors cell death pattern in Drosophila embryos.</a> Development. 130, 5779-5789 (2003).</li><li>van den Eijnde, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+surface+exposure+of+phosphatidylserine+during+apoptosis+is+phylogenetically+conserved.">Cell surface exposure of phosphatidylserine during apoptosis is phylogenetically conserved.</a> Apoptosis. 3, 9-16 (1998).</li></ol>

Gioco cellulare per apoptosi è un ultima fase critica di apoptosi, che è altamente dinamico. Pertanto studi in tempo reale del processo sono di massima importanza. Qui si descrive un protocollo che consente il monitoraggio della clearance cellulare per apoptosi nello sviluppo di embrioni di Drosophila vivere. In questa procedura, due popolazioni di cellule devono essere marcati usando specifici marcatori: cellule apoptotiche e fagociti. Il giornalista simulare cytGFP è adatto per il monitoraggio dei...

La corretta eliminazione delle cellule indesiderate o aberranti attraverso apoptosi e successiva fagocitosi è cruciale per lo sviluppo embrionale e per omeostasi tissutale nell&#39;adulto. Fagocitosi delle cellule apoptotiche o di liquidazione per apoptosi è un processo altamente dinamico che si svolge in quattro fasi: (1) il reclutamento dei fagociti al cellulare per apoptosi (&#39;find-me&#39;), (2) il riconoscimento della cellula come un obiettivo per fagocitosi ( &#39;mangia-me&#39;) e (3) engulfment, seguito da (4) maturazione phagosome e la degradazione della particella apoptotico 1-5. Ci sono due tipi di fagociti: macrofagi &#39;professionali&#39; e le cellule dendritiche immature e la &#39;non professionale&#39; cellule vicine tessuto residenti, che sono cruciali per la liquidazione cellulare per apoptosi durante lo sviluppo dei metazoi 6,7. Sviluppo in Drosophila, l&#39;eliminazione delle cellule superflue attraverso apoptosi si verifica in tre mfasi Ain, prima nella metà alla fine embrione, poi a metà pupa, e di nuovo nei primi anni adulto. Durante l&#39;embriogenesi particelle apoptotici vengono rimosse dai fagociti &#39;professionali&#39;, macrofagi e da ectoderma il &#39;non professionale&#39; e glia 8,9. Nel nostro precedente lavoro abbiamo identificato un recettore dei fagociti, Six-micron-under (SIMU), che si esprime esclusivamente in fagociti durante l&#39;embriogenesi. Utilizzando il promotore simulazione abbiamo generato un marcatore specifico per le popolazioni di cellule fagocitarie (simu-cytGFP) che ci permette di monitorare i macrofagi, ectoderma e glia contemporaneamente in un live embrione in via di sviluppo 8. Inoltre, utilizzando marcatori specifici per le cellule in apoptosi in diversi stadi di apoptosi, siamo in grado di seguire le dinamiche di gioco cellulare per apoptosi in vivo.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Reagent</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Annexin V </td>
 <td>Molecular Probes</td>
 <td>A35108</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PhiPhiLux G2D2</td>
 <td>OncoImmunin</td>
 <td>A304R2G-5</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LysoTracker</td>
 <td>Molecular Probes</td>
 <td>L-7528</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Halocarbon oil 700</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>H8898</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>Material</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Capillary tubing</td>
 <td>FHC </td>
 <td>30-30-0</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cell Strainer</td>
 <td>SPL</td>
 <td>93100</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Paintbrush</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

live imaging of apoptotic cell clearance during drosophila embryogenesis

La corretta eliminazione delle cellule indesiderate o aberrante attraverso l&#39;apoptosi e la successiva fagocitosi (clearance cellulare per apoptosi) è cruciale per lo sviluppo normale in tutti gli organismi metazoi. Gioco cellulare per apoptosi è un processo altamente dinamico intimamente associato con la morte delle cellule, le cellule apoptotiche unengulfed sono a malapena visibili in vivo in condizioni normali. Al fine di comprendere le diverse fasi del gioco cellulare per apoptosi e per confrontare fagociti &#39;professionali&#39; - macrofagi e cellule dendritiche a &#39;non professionale&#39; - le cellule vicine tessuto residenti, imaging in vivo vivo del processo è estremamente utile. Qui si descrive un protocollo per lo studio di liquidazione cellulare per apoptosi in vivo embrioni di Drosophila. Per seguire le dinamiche delle diverse fasi della fagocitosi che utilizziamo marcatori specifici per le cellule apoptotiche e fagociti. Inoltre, siamo in grado di monitorare i due sistemi fagocita in parallelo: macrofagi &#39;professionali&#39; e &#39;semi-profeglia ssional &#39;nel sistema nervoso centrale di sviluppo (SNC). Il metodo descritto qui impiega l&#39;embrione di Drosophila come un ottimo modello per studi in tempo reale di gioco cellulare per apoptosi.

Fotogrammi rappresentativi di un film in cui le cellule apoptotiche sono marcate con annessina V, e glia, ectoderma e macrofagi sono etichettati con simu-cytGFP sono illustrati nella Figura 2. Ogni frame è una proiezione di 3 fette 2 micron ciascuna. L&#39;embrione di scena 15 è posizionato correttamente mostrando il SNC embrionali in mezzo con glia ben marcato (g). I macrofagi (m), che sono per lo più al di fuori del sistema nervoso centrale, mostrano una forte ...

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Live Imaging of Apoptotic Cell Clearance during Drosophila Embryogenesis

Qui si descrive un metodo efficace per lo studio delle dinamiche di gioco cellulare per apoptosi<em&gt; In vivo</em&gt;. Questo metodo impiega vivere<em&gt; Drosophila</em&gt; Embrioni come un potente modello per il monitoraggio fagocitosi delle cellule apoptotiche mediante etichettatura specifica delle cellule apoptotiche e fagociti.

Vivere Imaging di apoptotica delle cellule libera nel corso<em&gt; Drosophila</em&gt; Embriogenesi

The  proper elimination of unwanted or aberrant cells through apoptosis and  subsequent phagocytosis (apoptotic cell clearance) is crucial for normal  ...

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