Name: the multibac protein complex production platform at the embl
Uploaded: 2013-07-11T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL at JoVE.com

हम क्रिस्टोफ Bieniossek, साइमन Trowitzsch, डैनियल फिजराल्ड़, Yuichiro Takagi, क्रिस्टियन Schaffitzel, युवान Hunziker, टिमोथी रिचमंड और मदद और सलाह के लिए बर्गर प्रयोगशाला के सभी पूर्व और वर्तमान सदस्यों को धन्यवाद. MultiBac मंच और इसके विकास के लिए किया गया है और उदारता से स्विस राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (SNSF), एजेंस राष्ट्रीय डी Recherche (ANR) और केंद्र में राष्ट्रीय डी Recherche Scientifique (CNRS) और यूरोपीय आयोग (ईसी) सहित आर्थिक सहायता एजेंसियों द्वारा समर्थित हैं फ्रेमवर्क कार्यक्रमों में (एफपी) 6 और 7. अंतरराष्ट्रीय पहुंच के लिए समर्थन ईसी परियोजनाओं FP7 पी घन (द्वारा प्रदान की गई है <a href="http://www.p-cube.eu" target="_blank">www.p-cube.eu</a> ) और BioStruct एक्स ( <a href="http://www.biostruct-x.eu" target="_blank">www.biostruct-x.eu</a> ). विज्ञान के फ्रेंच मंत्रालय विशेषकर Investissement डी Avenir परियोजना FRISBI माध्यम EMBL में MultiBac मंच का समर्थन करने के लिए स्वीकार किया है.

1. बहुजीनीय अभिव्यक्ति constructs बनाने के लिए मिलकर Recombineering (टीआर) <ol><li> सह अभिव्यक्ति रणनीति योजना. दाताओं और स्वीकार करने में अपनी रुचि के जीन डालने के लिए डिजाइन दृष्टिकोण. अपने परिसर के संभावित शारीरिक...

<ol>
	<li>Nie, Y., Viola, C., Bieniossek, C., Trowitzsch, S., Vijay-Achandran, L. S., Chaillet, M., Garzoni, F., Berger, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+a+Grip+on+Complexes.">Getting a Grip on Complexes.</a> Curr. Genomics. 10 (8), 558-572 (2009).</li><li>Robinson, C. V., Sali, A., Baumeister, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+sociology+of+the+cell.">The molecular sociology of the cell.</a> Nature. 450 (7172), 973-982 (2007).</li><li>Kost, T. A., Condreay, J. P., Jarvis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baculovirus+as+versatile+vectors+for+protein+expression+in+insect+and+mammalian+cells.">Baculovirus as versatile vectors for protein expression in insect and mammalian cells.</a> Nat. Biotechnol. 23 (5), 567-575 (2005).</li><li>Bieniossek, C., Imasaki, T., Takagi, Y., Berger, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MultiBac:+expanding+the+research+toolbox+for+multiprotein+complexes.">MultiBac: expanding the research toolbox for multiprotein complexes.</a> Trends Biochem. Sci. 37 (2), 49-57 (2012).</li><li>Fitzgerald, D. J., Berger, P., Schaffitzel, C., Yamada, K., Richmond, T. J., Berger, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+complex+expression+by+using+multigene+baculoviral+vectors.">Protein complex expression by using multigene baculoviral vectors.</a> Nat. Methods. 3 (12), 1021-1032 (2006).</li><li>Bieniossek, C., Richmond, T. J., Berger, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MultiBac:+multigene+baculovirus-based+eukaryotic+protein+complex+production.">MultiBac: multigene baculovirus-based eukaryotic protein complex production.</a> Curr. Protoc. Protein Sci. Chapter 5, Unit 5.20 (2008).</li><li>Trowitzsch, S., Bieniossek, C., Nie, Y., Garzoni, F., Berger, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+baculovirus+expression+tools+for+recombinant+protein+complex+production.">New baculovirus expression tools for recombinant protein complex production.</a> J. Struct. Biol. 172 (1), 45-54 (2010).</li><li>Vijayachandran, L. S., Viola, C., Garzoni, F., Trowitzsch, S., Bieniossek, C., Chaillet, M., Schaffitzel, C., Busso, D., Romier, C., Poterszman, A., Richmond, T. J., Berger, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Robots,+pipelines,+polyproteins:+enabling+multiprotein+expression+in+prokaryotic+and+eukaryotic+cells.">Robots, pipelines, polyproteins: enabling multiprotein expression in prokaryotic and eukaryotic cells.</a> J. Struct. Biol. 175 (2), 198-208 (2011).</li><li>Thomas, M. C., Chiang, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+general+transcription+machinery+and+general+cofactors.">The general transcription machinery and general cofactors.</a> Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 41 (3), 105-178 (2006).</li><li>Klinge, S., Voigts-Hoffmann, F., Leibundgut, M., Ban, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atomic+structures+of+the+eukaryotic+ribosome.">Atomic structures of the eukaryotic ribosome.</a> Trends Biochem. Sci. 37 (5), 189-198 (2012).</li><li>Melnikov, S., Ben-Shem, A., Garreau de Loubresse, N., Jenner, L., Yusupova, G., Yusupov, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One+core,+two+shells:+bacterial+and+eukaryotic+ribosomes.">One core, two shells: bacterial and eukaryotic ribosomes.</a> Nat. Struct. Mol. Biol. 19 (6), 560-567 (2012).</li><li>Cramer, P., Bushnell, D. A., Fu, J., Gnatt, A. L., Maier-Davis, B., Thompson, N. E., Burgess, R. R., Edwards, A. M., David, P. R., Kornberg, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Architecture+of+RNA+polymerase+II+and+implications+for+the+transcription+mechanism.">Architecture of RNA polymerase II and implications for the transcription mechanism.</a> Science. 288 (5466), 640-649 (2000).</li><li>Berger, I., Fitzgerald, D. J., Richmond, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Baculovirus+expression+system+for+heterologous+multiprotein+complexes.">Baculovirus expression system for heterologous multiprotein complexes.</a> Nat. Biotechnol. 22 (12), 1583-1587 (2004).</li><li>Bieniossek, C., Nie, Y., Frey, D., Olieric, N., Schaffitzel, C., Collinson, I., Romier, C., Berger, P., Richmond, T. J., Steinmetz, M. O., Berger, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+unrestricted+multigene+recombineering+for+multiprotein+complex+production.">Automated unrestricted multigene recombineering for multiprotein complex production.</a> Nat. Methods. 6 (6), 447-450 (2009).</li><li>Nie, Y., Bieniossek, C., Frey, D., Olieric, N., Schaffitzel, C., Steinmetz, M. O., Berger, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ACEMBLing+multigene+expression+constructs+by+recombineering.">ACEMBLing multigene expression constructs by recombineering.</a> Nat. Protocols. , (2009).</li><li>Wasilko, D. J., Lee, S. E., Stutzman-Engwall, K. J., Reitz, B. A., Emmons, T. L., Mathis, K. J., Bienkowski, M. J., Tomasselli, A. G., Fischer, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=H.D.+titerless+infected-cells+preservation+and+scale-up+(TIPS)+method+for+large-scale+production+of+NO-sensitive+human+soluble+guanylate+cyclase+(sGC)+from+insect+cells+infected+with+recombinant+baculovirus.">H.D. titerless infected-cells preservation and scale-up (TIPS) method for large-scale production of NO-sensitive human soluble guanylate cyclase (sGC) from insect cells infected with recombinant baculovirus.</a> Protein Expr. Purif. 65 (2), 122-132 (2009).</li><li>Chao, W. C., Kulkarni, K., Zhang, Z., Kong, E. H., Barford, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+the+mitotic+checkpoint+complex.">Structure of the mitotic checkpoint complex.</a> Nature. 484 (7393), 208-213 (2012).</li><li>Yamada, K., Frouws, T. D., Angst, B., Fitzgerald, D. J., DeLuca, C., Schimmele, K., Sargent, D. F., Richmond, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+the+chromatin+remodelling+factor+ISW1a.">Structure and mechanism of the chromatin remodelling factor ISW1a.</a> Nature. 472 (7344), 448-453 (2011).</li></ol>

आंकड़े 2 और 3 में वीडियो तस्वीर शॉट्स बहुजीनीय अभिव्यक्ति की सीडीएनए से रोबोट की मदद से पीढ़ी से पूरी प्रक्रिया को वर्णन प्रोटीन के उत्पादन के लिए कीट सेल संस्कृतियों के संक्रमण के लिए सभी ...

जैविक गतिविधि प्रोटीन और सेलुलर कार्यों को उत्प्रेरित करने के लिए संगीत कार्यक्रम में कार्य करने वाले अन्य biomolecules की विधानसभाओं द्वारा नियंत्रित किया जाता है. उल्लेखनीय उदाहरण दूत शाही सेना में डीएनए में निहित वंशानुगत जानकारी transcribes कि मशीनरी शामिल हैं. मनुष्यों में, 100 से ज्यादा प्रोटीन होते हैं आरएनए पोलीमरेज़ द्वितीय और ऐसे TFIID, TFIIH और दूसरों के रूप में सामान्य प्रतिलेखन कारक है. 9 अन्य उदाहरणों सहित 10 और अधिक यूनिटों के साथ बड़े multiprotein परिसरों के गठन, जीन टाइप करने के लिए एक परिभाषित और विनियमित प्रक्रिया में एक साथ आते हैं राइबोसोम, प्रोटीन संश्लेषण, या eukaryotes में परमाणु लिफाफा के माध्यम से biomolecules के चक्कर के लिए जिम्मेदार है जो परमाणु ताकना जटिल catalyzes कि कई प्रोटीन और आरएनए अणुओं से मिलकर. सेल में अनिवार्य रूप से सभी multicomponent मशीनों की एक विस्तृत वास्तु और जैव रासायनिक विच्छेदन उनके कार्य को समझने के लिए महत्वपूर्ण है. प्रोकार्योटिक और eukar की संरचना व्याख्याyotic राइबोसोम, उदाहरण के लिए, इन macromolecular मशीनों सेल में अपने निर्दिष्ट कार्यों को पूरा कैसे में अभूतपूर्व अंतर्दृष्टि उपज बानगी घटनाओं का गठन किया. 10,11 राइबोसोम ऊपर सेलुलर द्रव्यमान का 30% करने के लिए राइबोसोम के होते हैं कि इस तथ्य के कारण संवर्धित कोशिकाओं से अंतर्जात सामग्री, सफ़ाई द्वारा विस्तृत अध्ययन के लिए पर्याप्त गुणवत्ता और मात्रा में प्राप्त किया जा सकता है. शाही सेना पोलीमरेज़ द्वितीय अन्य आवश्यक परिसरों की भारी बहुमत में फिर भी मौजूद हैं, जो पहले से ही खमीर संस्कृति के कम परिमाण के आदेश से प्रचुर मात्रा में है, और कई हजार लीटर है प्रतिलेखन के लिए केंद्रीय इस आवश्यक परिसर की एक विस्तृत परमाणु दृश्य प्राप्त करने के लिए संसाधित किया जा सकता था. 12 इस प्रकार देशी कोशिकाओं, और में बहुत कम मात्रा में देशी स्रोत सामग्री से पर्याप्त रूप से शुद्ध नहीं किया जा सकता. विस्तृत संरचनात्मक और कार्यात्मक विश्लेषण के लिए सुलभ ऐसे परिसरों रेंडर करने के लिए पुनः संयोजक ते का उपयोग करके heterologous उत्पादन की आवश्यकताchniques. पुनः संयोजक प्रोटीन के उत्पादन को जीवन विज्ञान अनुसंधान पर एक बड़ा प्रभाव था. कई प्रोटीन recombinantly उत्पादन किया, और उनकी संरचना और समारोह के उच्च संकल्प पर विच्छेदित किए गए. स्ट्रक्चरल जीनोमिक्स कार्यक्रमों उच्च throughput (हिंदुस्तान टाइम्स) मोड में संपूर्ण जीवों के जीन उत्पाद प्रदर्शनों की सूची को संबोधित करने के लिए कई जीवों के जीनोम की व्याख्या का लाभ ले लिया है. प्रोटीन संरचनाओं के हजारों इस प्रकार निर्धारित किया गया है. तिथि करने के लिए, पुनः संयोजक प्रोटीन के उत्पादन के लिए सबसे prolifically इस्तेमाल किया प्रणाली ई. किया गया है कोली, और कई अभिव्यक्ति सिस्टम इस मेजबानी में heterologous उत्पादन के लिए पिछले कुछ वर्षों में विकसित और परिष्कृत किया गया है. ई. में प्रोटीन के उत्पादन को सक्षम करने के functionalities के ढेर सारे शरण प्लास्मिडों कोली वाणिज्यिक प्रदाताओं की पूरी सूची भरें. हालांकि, ई. कोली कई यूकेरियोटिक प्रोटीन का उत्पादन करने के लिए यह अनुपयुक्त है जो कुछ सीमाएं हैं और पी मेंकई यूनिटों के साथ जोड़ प्रोटीन परिसरों. इसलिए, यूकेरियोटिक मेजबान में प्रोटीन के उत्पादन को तेजी से हाल के वर्षों में चुनाव का तरीका बन गया है. यूकेरियोटिक प्रोटीन का उत्पादन करने के लिए एक विशेष रूप से अच्छी तरह से अनुकूल प्रणाली प्रयोगशाला में खेती कीट सेल संस्कृतियों को संक्रमित करने heterologous जीन ले एक पुनः संयोजक baculovirus पर निर्भर करता है कि baculovirus अभिव्यक्ति वेक्टर प्रणाली (BEVs) है. MultiBac प्रणाली विशेष रूप से कई यूनिटों (चित्रा 1) के साथ यूकेरियोटिक प्रोटीन परिसरों के उत्पादन के लिए बनाया गया है, जो एक और अधिक हाल ही में विकसित BEVs है. MultiBac पहली बार 2004 में शुरू की गई थी. 13 अपनी शुरुआत के बाद से, MultiBac लगातार परिष्कृत किया गया है और, हैंडलिंग सरल बनाने के लक्ष्य प्रोटीन की गुणवत्ता में सुधार और आम तौर पर कुशल मानक संचालन प्रक्रिया (रियायतों) डिजाइन द्वारा गैर विशेषज्ञ उपयोगकर्ताओं के लिए व्यवस्था सुलभ बनाने के लिए धारा खड़े हैं. 4 MultiBac एसी में, दुनिया भर में व्यापक कई प्रयोगशालाओं में लागू किया गया हैademia और उद्योग. ग्रेनोबल में EMBL में, अंतरराष्ट्रीय पहुंच कार्यक्रमों उनके अनुसंधान को आगे बढ़ाने के लिए इस उत्पादन प्रणाली का उपयोग करने के लिए कामना की है जो वैज्ञानिकों के लिए MultiBac मंच पर विशेषज्ञ प्रशिक्षण प्रदान करने के लिए यूरोपीय आयोग द्वारा जगह में डाल रहे थे. वे EMBL ग्रेनोबल में MultiBac सुविधा पर चल रही हैं के रूप में अब तक सुलभ नहीं थे कि कई प्रोटीन परिसरों की संरचना और समारोह MultiBac के साथ उत्पादन के नमूनों का उपयोग करके स्पष्ट किया गया था. 4 बाद में, MultiBac उत्पादन के लिए आवश्यक कदम प्रोटोकॉल में संक्षेप हैं.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bluo-Gal</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>15519-028 (1 g)</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tetracycline</td>
 <td>Euromedex</td>
 <td>UT2965-B (25 g)</td>
 <td>1,000X at 10 mg/ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Kanamycine</td>
 <td>Euromedex</td>
 <td>EU0420 (25 g)</td>
 <td>1,000X at 50 mg/ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Gentamycine</td>
 <td>SIGMA</td>
 <td>G3632 (5 g)</td>
 <td>1,000X at 10 mg/ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>IPTG</td>
 <td>Euromedex</td>
 <td>EU0008-B (5 g)</td>
 <td>1,000X at 1M</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cre-recombinase</td>
 <td>New England BioLabs</td>
 <td>M0298</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>X-Treme GENE HP transfection reagent</td>
 <td>Roche</td>
 <td>06 366 236 001</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hyclone SFM4 Insect</td>
 <td>Thermo Scientific</td>
 <td>SH 30913.02</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>6-well plate Falcon</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>353046</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 ml pipette Falcon</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>357507</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5 ml pipette Falcon</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>357543</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 ml pipette Falcon</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>357551</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>25 ml pipette Falcon</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>357535</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 ml pipette Falcon</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>357550</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>50 ml tube Falcon</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>352070</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>15 ml tube Falcon</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>352096</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1.8 ml cryotube Nunc</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>55005</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>100 ml shaker flasks Pyrex</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>211917</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>250 ml shaker flasks Pyrex</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>211918</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>500 ml shaker flasks Pyrex</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>211919</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2 L shaker flasks Pyrex</td>
 <td>Dominique Dutscher</td>
 <td>211921</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Certomat Orbital Shaker + plateau</td>
 <td>Sartorius</td>
 <td>4445110, 4445233</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Liquid nitrogen tank dewar 35 L</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>M76801</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Biological Safety Cabinet Faster</td>
 <td>Sodipro</td>
 <td>FASV20000606</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Optical Microscope</td>
 <td>Zeiss</td>
 <td>451207</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sf21 Insect cells</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Hi5 Insect cells</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>B855-02</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tecan freedom EVO running Evoware plus</td>
 <td>TECAN</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 &mu;l conductive tips (black),</td>
 <td>TECAN</td>
 <td>10 612 516</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>200 &mu;l conductive tips (black)</td>
 <td>TECAN</td>
 <td>10 612 510</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>disposable trough for reagents, 100 ml</td>
 <td>TECAN</td>
 <td>10 613 049</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>twin.tec PCR plate 96, skirted</td>
 <td>Eppendorf</td>
 <td>0030 128.648</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>96 well V bottom, non sterile</td>
 <td>BD falcon</td>
 <td>353263</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>96 deepwell plate color natural, PP)</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>M3752M</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PS microplate, 96 well flat bottom</td>
 <td>Greiner</td>
 <td>655101</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>96 deepwell plate</td>
 <td>Thermo scientific</td>
 <td>AB-0932</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>24 well blocks RB</td>
 <td>Qiagen</td>
 <td>19583</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DpnI restriction enzyme</td>
 <td>NEB</td>
 <td>R0176L</td>
 <td>20 U/uL</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>NEBuffer 4 10X</td>
 <td>NEB</td>
 <td>B7004S</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2X phusion mastermix HF</td>
 <td>Finnzyme</td>
 <td>ref F-531L</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2X phusion mastermix GC</td>
 <td>Finnzyme</td>
 <td>ref F-532L</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DGLB 1.5X</td>
 <td>homemade</td>
 <td></td>
 <td>7.5% glycerol, 0.031% Bromophenol blue, 0.031% Xylen cyanol FF</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>High DNA Mass Ladder for e-gel</td>
 <td>Life Technologies</td>
 <td>10496-016</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Low DNA Mass Ladder for e-gel</td>
 <td>Life Technologies</td>
 <td>10068-013</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>E-gel 48 1% agarose GP</td>
 <td>Life Technologies</td>
 <td>G8008-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Nucleo Spin- robot-96 plasmid kit</td>
 <td>Macherey Nagel</td>
 <td>740 708.24</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PCR clean-up kit, Nucleospin Robot-96 Extract</td>
 <td>Macherey Nagel</td>
 <td>740 707.2</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Gotaq green master mix</td>
 <td>Promega</td>
 <td>M7113</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>T4 DNA polymerase, LIC-qualified</td>
 <td>Novagen</td>
 <td>70099-3</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DTT 100 mM</td>
 <td>homemade</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Urea 2 M</td>
 <td>homemade</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA 500 mM pH 8.0</td>
 <td>Homemade</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>LB broth (Miller) 500 g</td>
 <td>Athena ES</td>
 <td>103</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

the multibac protein complex production platform at the embl

Proteomics research revealed the impressive complexity of eukaryotic proteomes in unprecedented detail. It is now a commonly accepted notion that proteins in cells mostly exist not as isolated entities but exert their biological activity in association with many other proteins, in humans ten or more, forming assembly lines in the cell for most if not all vital functions.1,2 Knowledge of the function and architecture of these multiprotein assemblies requires their provision in superior quality and sufficient quantity for detailed analysis. The paucity of many protein complexes in cells, in particular in eukaryotes, prohibits their extraction from native sources, and necessitates recombinant production. The baculovirus expression vector system (BEVS) has proven to be particularly useful for producing eukaryotic proteins, the activity of which often relies on post-translational processing that other commonly used expression systems often cannot support.3 BEVS use a recombinant baculovirus into which the gene of interest was inserted to infect insect cell cultures which in turn produce the protein of choice. MultiBac is a BEVS that has been particularly tailored for the production of eukaryotic protein complexes that contain many subunits.4 A vital prerequisite for efficient production of proteins and their complexes are robust protocols for all steps involved in an expression experiment that ideally can be implemented as standard operating procedures (SOPs) and followed also by non-specialist users with comparative ease. The MultiBac platform at the European Molecular Biology Laboratory (EMBL) uses SOPs for all steps involved in a multiprotein complex expression experiment, starting from insertion of the genes into an engineered baculoviral genome optimized for heterologous protein production properties to small-scale analysis of the protein specimens produced.5-8 The platform is installed in an open-access mode at EMBL Grenoble and has supported many scientists from academia and industry to accelerate protein complex research projects.

MultiBac प्रणाली द्वारा प्राप्त heterologous प्रोटीन की मजबूत सह अभिव्यक्ति चित्रा 1 माह (एक निलंबन सेल संस्कृति से संक्रमण के बाद 48 घंटे उठाए जांच) में दिखाया गया है. overexpressed प्रोटीन बैंड के पूरे सेल निकालने (एसए...

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The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

प्रोटीन परिसरों प्रमुख सेलुलर कार्यों उत्प्रेरित. कई आवश्यक परिसरों की विस्तृत कार्यात्मक और संरचनात्मक लक्षण वर्णन पुनः संयोजक उत्पादन की आवश्यकता है. MultiBac विशेष रूप यूकेरियोटिक प्रोटीन और उनके परिसरों व्यक्त करने के लिए सिलवाया एक baculovirus / कीट सेल प्रणाली है. MultiBac एक खुला मंच का उपयोग, और इसकी उपयोगिता को अधिकतम करने के लिए विकसित मानक संचालन प्रक्रिया के रूप में लागू किया गया था.

EMBL में MultiBac प्रोटीन परिसर उत्पादन प्लेटफार्म

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Staining of Proteins in Gels with Coomassie G-250 without Organic Solvent and Acetic Acid

कार्बनिक सॉल्वेंट और एसिटिक एसिड के बिना जी 250 Coomassie के साथ जैल में प्रोटीन की धुंधला

In classical protein staining protocols using Coomassie Brilliant Blue (CBB), solutions with high contents of toxic and flammable organic solvents ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

आण्विक Fractionation वजन के आधार के लिए तरल चरण रिकवरी के साथ GELFREE 8100 Fractionation प्रणाली का उपयोग

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Production of Tissue Microarrays, Immunohistochemistry Staining and Digitalization Within the Human Protein Atlas

ऊतक, immunohistochemistry धुंधला और डिजिटलीकरण की मानव प्रोटीन एटलस के भीतर उत्पादन

The  tissue microarray (TMA) technology provides the means for high-throughput  analysis of multiple tissues and cells. The technique is used within the ...

A Convenient and General Expression Platform for the Production of Secreted Proteins from Human Cells

मानव कोशिकाओं से secreted प्रोटीन के उत्पादन के लिए एक सुविधाजनक और जनरल अभिव्यक्ति प्लेटफार्म

Recombinant protein expression in bacteria, typically E. coli, has been the most successful strategy for milligram quantity expression of proteins. ...

The Logic, Experimental Steps, and Potential of Heterologous Natural Product Biosynthesis Featuring the Complex Antibiotic Erythromycin A Produced Through E. coli

The Logic, Experimental Steps, and Potential of Heterologous Natural Product Biosynthesis Featuring the Complex Antibiotic Erythromycin A Produced Through E. coli

तर्क, प्रायोगिक कदम, और Heterologous प्राकृतिक उत्पाद biosynthesis के संभावित परिसर एंटीबायोटिक एक के माध्यम से उत्पादन इरीथ्रोमाइसीन<em&gt; ई. कोलाई</em

The heterologous production of complex natural products is an approach designed to address current limitations and future possibilities.  It is ...

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

एयर तरल इंटरफेस पर मानव नाक उपकला कोशिकाओं के संवर्धन

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

Quantitative Immunofluorescence Assay to Measure the Variation in Protein Levels at Centrosomes

मात्रात्मक इम्यूनोफ्लोरेसेंस परख Centrosomes में प्रोटीन का स्तर में रूपांतर उपाय

Centrosomes are small but important organelles that serve as the poles of mitotic spindle to maintain genomic integrity or assemble primary cilia to ...

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

Green Fluorescent Protein-based Expression Screening of Membrane Proteins in Escherichia coli

झिल्ली प्रोटीन की हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन आधारित अभिव्यक्ति स्क्रीनिंग में<em&gt; Escherichia कोलाई</em

The production of recombinant membrane proteins for structural and functional studies remains technically challenging due to low levels of expression and ...

CUBIC Protocol Visualizes Protein Expression at Single Cell Resolution in Whole Mount Skin Preparations

घन प्रोटोकॉल पूरा पर्वत त्वचा तैयारी में एकल कक्ष संकल्प पर प्रोटीन अभिव्यक्ति visualizes

The skin is essential for our survival. The outer epidermal layer consists of the interfollicular epidermis, which is a stratified squamous epithelium ...