Name: ex vivo red blood cell hemolysis assay for the evaluation of ph-responsive endosomolytic agents for cytosolic delivery of biomacromolecular drugs
Uploaded: 2013-03-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs at JoVE.com

De auteurs erkennen de financiering door het ministerie van Defensie Congressionally Medical Research Programma (# W81XWH-10-1-0445), National Institutes of Health (NIH R21 HL110056) en American Heart Association (# 11SDG4890030).

1. Voorbereiding en Sterilisatie van Buffers en Test Agenten <ol><li> 150 mM NaCl buffer: Los 4,383 g NaCl kristallen in 500 ml water nanopure. </li><li> pH Buffers: voorbereiden fosfaat buffers bij pH 5,6, 6,2, 6,8 en 7,4 door het mengen van geschikte hoeveelheden monobasisch en dibasisch natriumfosfaat. Indien monsters worden getest bij lagere pH waarden (bijvoorbeeld pH &lt;5,6) dan een geschikte buffer, zoals citraat buffer, worden gebruikt. Buffer recepten zijn direct beschikbaar, en een voorbeeld verzoe...

<ol>
	<li>Alberts, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Biology of the Cell. , (2002).</li><li>Boasson, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Bacteriolysis+by+Lysozyme.">On the Bacteriolysis by Lysozyme.</a> The Journal of Immunology. 34, 281-293 (1938).</li><li>Convertine, A. J., Benoit, D. S., Duvall, C. L., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+endosomolytic+diblock+copolymer+for+siRNA+delivery.">Development of a novel endosomolytic diblock copolymer for siRNA delivery.</a> J. Control. Release. 133, 221-229 (2009).</li><li>Duvall, C. L., Convertine, A. J., Benoit, D. S., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Delivery+of+a+Proapoptotic+Peptide+via+Conjugation+to+a+RAFT+Synthesized+Endosomolytic.">Intracellular Delivery of a Proapoptotic Peptide via Conjugation to a RAFT Synthesized Endosomolytic.</a> 7, 468-476 (2010).</li><li>Varkouhi, A. K., Scholte, M., Storm, G., Haisma, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomal+escape+pathways+for+delivery+of+biologicals.">Endosomal escape pathways for delivery of biologicals.</a> Journal of Controlled Release. 151, 220-228 (2011).</li><li>Plank, C., Oberhauser, B., Mechtler, K., Koch, C., Wagner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+endosome-disruptive+peptides+on+gene+transfer+using+synthetic+virus-like+gene+transfer+systems.">The influence of endosome-disruptive peptides on gene transfer using synthetic virus-like gene transfer systems.</a> Journal of Biological Chemistry. 269, 12918-12924 (1994).</li><li>Ratner, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+Cells+Are+Sensitive+Detectors+of+Bacterial+Pore-forming+Toxins.">Epithelial Cells Are Sensitive Detectors of Bacterial Pore-forming Toxins.</a> Journal of Biological Chemistry. 281, 12994-12998 (2006).</li><li>Saar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+peptides:+A+comparative+membrane+toxicity+study.">Cell-penetrating peptides: A comparative membrane toxicity study.</a> Analytical Biochemistry. 345, 55-65 (2005).</li><li>Kichler, A., Leborgne, C., Coeytaux, E., Danos, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyethylenimine-mediated+gene+delivery:+a+mechanistic+study.">Polyethylenimine-mediated gene delivery: a mechanistic study.</a> The Journal of Gene Medicine. 3, 135-144 (2001).</li><li>Behr, J. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proton+Sponge:+a+Trick+to+Enter+Cells+the+Viruses+Did+Not+Exploit.">The Proton Sponge: a Trick to Enter Cells the Viruses Did Not Exploit.</a> CHIMIA International Journal for Chemistry. 51, 34-36 (1997).</li><li>Dawson, R. M. C., Elliot, D. C., Elliot, W. H., Jones, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Data for Biochemical Research. , (1986).</li><li>Ernst, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Applied Phlebotomy. , (2005).</li><li>Bulmus, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+pH-responsive+and+glutathione-reactive,+endosomal+membrane-disruptive+polymeric+carrier+for+intracellular+delivery+of+biomolecular+drugs.">A new pH-responsive and glutathione-reactive, endosomal membrane-disruptive polymeric carrier for intracellular delivery of biomolecular drugs.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 93, 105-120 (2003).</li><li>Lackey, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolytic+Activity+of+pH-Responsive+Polymer-Streptavidin+Bioconjugates.">Hemolytic Activity of pH-Responsive Polymer-Streptavidin Bioconjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 10, 401-405 (1999).</li><li>Murthy, N., Campbell, J., Fausto, N., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinspired+pH-responsive+polymers+for+the+intracellular+delivery+of+biomolecular+drugs.">Bioinspired pH-responsive polymers for the intracellular delivery of biomolecular drugs.</a> Bioconjugate chemistry. 14, 412-419 (2003).</li><li>Murthy, N., Robichaud, J. R., Tirrell, D. A., Stayton, P. S., Hoffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+and+synthesis+of+polymers+for+eukaryotic+membrane+disruption.">The design and synthesis of polymers for eukaryotic membrane disruption.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 61, 137-143 (1999).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+endosomal+barrier+by+amphotericin+B-loaded+dual+pH-responsive+PDMA-b-PDPA+micelleplexes+for+siRNA+delivery.">Overcoming endosomal barrier by amphotericin B-loaded dual pH-responsive PDMA-b-PDPA micelleplexes for siRNA delivery.</a> ACS nano. 5, 9246-9255 (2011).</li><li>Nelson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+local+delivery+of+siRNA+from+an+injectable+scaffold.">Sustained local delivery of siRNA from an injectable scaffold.</a> Biomaterials. 33, 1154-1161 (2012).</li><li>Miozzari, G. F., Niederberger, P., H&#252;tter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+of+microorganisms+by+Triton+X-100.">Permeabilization of microorganisms by Triton X-100.</a> Analytical Biochemistry. 90, 220-233 (1978).</li><li>Chen, H., Zhang, H., McCallum, C. M., Szoka, F. C., Guo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unsaturated+Cationic+Ortho+Esters+for+Endosome+Permeation+in+Gene+Delivery.">Unsaturated Cationic Ortho Esters for Endosome Permeation in Gene Delivery.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 50, 4269-4278 (2007).</li><li>Roth, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Measurements+and+Rational+Materials+Design+for+Intracellular+Delivery+of+Oligonucleotides.">Quantitative Measurements and Rational Materials Design for Intracellular Delivery of Oligonucleotides.</a> Biotechnology Progress. 24, 23-28 (2008).</li><li>Blumenthal, R., Seth, P., Willingham, M. C., Pastan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-dependent+lysis+of+liposomes+by+adenovirus.">pH-dependent lysis of liposomes by adenovirus.</a> Biochemistry. 25, 2231-2237 (1986).</li><li>Moore, N. M., Sheppard, C. L., Barbour, T. R., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+endosomal+escape+peptides+on+in+vitro+gene+delivery+of+polyethylene+glycol-based+vehicles.">The effect of endosomal escape peptides on in vitro gene delivery of polyethylene glycol-based vehicles.</a> The Journal of Gene Medicine. 10, 1134-1149 (2008).</li><li>Panyam, J., Zhou, W. Z., Prabha, S., Sahoo, S. K., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+endo-lysosomal+escape+of+poly(DL-lactide-co-glycolide)+nanoparticles:+implications+for+drug+and+gene+delivery.">Rapid endo-lysosomal escape of poly(DL-lactide-co-glycolide) nanoparticles: implications for drug and gene delivery.</a> The FASEB Journal. 16, 1217-1226 (2002).</li></ol>

pH-gevoelige polymeren of andere middelen geschikt voor endosomolytic functie kan snel en effectief gescreend op basis van lysis van rode bloedcellen bij een pH aangetroffen in de endosoom (Figuur 1; pH 6,8 - vroege endosoom, pH 6,2 - late endosoom, pH 5,6 - lysosoom). 14-17 pH-afhankelijke hemolyse werd gebruikt om het vermogen van vervoerders endosomale afgifte Biomacromoleculaire geneesmiddelen (bijv. peptiden, siRNA, ODNs, eiwitten) bemiddelen scherm en resultaten van deze assay ...

Hoewel er vele mogelijke high-impact therapeutische targets in de cel, de intracellulaire afgifte van middelen vormt een grote uitdaging. Vaak worden drugs, vooral biologische, geïnternaliseerd door cellen en verhandeld in blaasjes die ofwel leiden tot afbraak van de inhoud door de endo-lysosomale route, of back brachten de cel via exocytose. 1 In de laatste werkwijze, de interne pH van de vesicles wordt aangezuurd tot ongeveer 5-6, met de optimale pH voor activiteit van enzymen die functioneren in dit compartiment, zoals lysozym. twee Recent zijn een aantal materialen zijn speciaal ontworpen om gebruik te maken van de verzuring van endosomen te vergemakkelijken cytosolische levering van hun lading. Een voorbeeld van deze benadering maakt gebruik van synthetische polymeer micel nanodeeltjes die kern zwitterionische en lastenneutraal bij fysiologische pH (bijv. 7,4). Echter bij pH 6,0- 6.5, de polymeren worden geprotoneerd en zich een netto positieve lading die de micel kern destabiliseert en de blootgestelde polymeersegmenten interactie met en verstoren de endosomale membraan. Deze activiteit is aangetoond dat het endosomale ontsnappen van peptide en nucleïnezuur gebaseerde geneesmiddelen bevorderen, waardoor zij hun targets cytosolische openen. 3,4 Andere voorbeelden van ontwikkelde methoden endosomale escape dat het membraan barrière verstoren bemiddelen omvatten &quot;fusogenische&quot; peptiden of eiwitten die membraanfusie of transient poriënvorming kunnen bemiddelen in de fosfolipide dubbellaag. 5 Homopolymeren van anionogene alkyl acrylzuren zoals poly (propylacrylic zuur) een goed bestudeerde benadering en in deze polymeren, de protonering staat hanger carbonzuur dicteert overgang in een hydrofoob, membraan-ontwrichtende staat in endo-lysosomale pH-bereiken. 6,7 Een bruikbaar model systeem voor het screenen van endosomolytic gedrag is het ex vivo pH-afhankelijke hemolyse assay. 8 In dit modelsysteem de erytrocytenmembraan dient als een surrogaat voor het lipidebilaagmembraan die endo-lysosomale vesicles omsluiten. Dit model generaliseerbaar is door anderen om endosomolytic gedrag van cellen binnendringen peptiden en andere polymere genafgiftesystemen evalueren. 8-11 In dit experiment menselijke rode bloedcellen en testmaterialen worden geco-incubeerd in buffers bij pH gedefinieerd dat nabootsen extracellulaire (7,4), vroege endosomale (6,8), en laat endo-lysosomale (&lt;6,8) omgevingen. De hoeveelheid hemoglobine vrijkomt tijdens de incubatieperiode wordt gekwantificeerd als een maat van rode bloedcellen lysis, die is genormaliseerd naar de hoeveelheid hemoglobine model in positieve controlemonsters gelyseerd met een reinigingsmiddel. Van het screenen van een kleine bibliotheek van potentieel endosomolytic testmateriaal, kan men afleiden dat de monsters die geen hemolyse produceren bij pH 7,4, maar significant verhoogd zoomolysis bij pH &lt;6,5, zal de meest effectieve en cytocompatible kandidaten voor cytosolische drug delivery. Materialen die deze criteria past worden naar verwachting inert en niet zonder lipide dubbellaag membranen (bijv. waardoor cytotoxiciteit) vernietigen tot blootstelling aan een daling in de lokale pH na internalisatie in endo-lysosomale compartimenten. In dit protocol worden erythrocyten geïsoleerd uit een menselijke donor en co-geïncubeerd bij pH 5,6, 6,2, 6,8 of 7,4 experimentele endosomolytic drug delivery agents. Intact erytrocyten worden gepelleteerd en de supernatanten (met hemoglobine bezit van gelyseerde erytrocyten) geanalyseerd voor de karakteristieke absorptie van hemoglobine via een plaatlezer (figuur 1).

<table border="1"><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Opmerkingen (optioneel) </td></tr><tr><td> BD Vacutainer - K2EDTA Vacutainer buizen </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-253-145 </td><td> Voor bloedafname </td></tr><tr><td> BD Vacutainer bloedafname Naalden, 20.5-gauge </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-665-31 </td><td> Voor bloedafname </td></tr><tr><td> BD Vacutainer Tube Holder / Naald Adapter </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-289-953 </td><td> Voor bloedafname </td></tr><tr><td> BD Merk Isopropyl Alcohol Swabs </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-680-63 </td><td> Voor bloedafname </td></tr><tr><td> BD Vacutainer Latexvrij Tourniquet </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-657-6 </td><td> Voor bloedafname </td&gt; </tr><tr><td> Zoutzuur (geconcentreerd) </td><td> Fisher Scientific </td><td> A144-500 </td><td> Voor regeling van de pH van D-PBS. </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8787 </td><td> Positieve controle </td></tr><tr><td> Dulbecco&#39;s PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td> Nalgene MF75 Steriel Disposable Bottle-Top Filter Unit met SFCA Membraan </td><td> Fisher Scientific </td><td> 09-740-44A </td><td></td></tr><tr><td> BD 96-well platen, vlakke bodem, weefselkweek behandeld polystyreen </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-772-2C </td><td> Voor plaat-lezing eind van de test. </td></tr><tr><td> BD 96-well platen met ronde bodem, weefselkweek behandelde polystyreen </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-772-17 </td><td> Voor incubatie van rode bloedcellen met experimentele middelen. </td></tr></table&gt;

ex vivo red blood cell hemolysis assay for the evaluation of ph-responsive endosomolytic agents for cytosolic delivery of biomacromolecular drugs

Fosfolipide dat endo-lysosomale blaasjes vormen kunnen vormen een belemmering voor de levering van biologische geneesmiddelen voor intracellulaire targets. Om deze barrière te overwinnen zijn een aantal synthetische drug carriers geconstrueerd om actieve verstoring het endosomale membraan en lading af te leveren in het cytoplasma. Hier beschrijven we de hemolyse assay die kan worden gebruikt als snelle, high-throughput screen voor cytocompatibility en endosomolytic activiteit van intracellulaire drug delivery systemen. In de hemolyse assay worden menselijke rode bloedcellen en testmateriaal geco-incubeerd in buffers bij pH gedefinieerd dat extracellulaire, vroege endosomale en late endo-lysosomale omgeving nabootsen. Na centrifugatie stap pellet intacte rode bloedcellen, wordt de hoeveelheid hemoglobine in het medium afgegeven spectrofotometrisch gemeten (405 nm voor de beste dynamisch bereik). Het percentage rode bloedcellen verstoord wordt dan ten opzichte van de positieve controle samp gekwantificeerdles gelyseerd met een reinigingsmiddel. In dit modelsysteem de erytrocytenmembraan dient als een surrogaat voor het lipidebilaagmembraan die endo-lysosomale vesicles omsluiten. Het gewenste resultaat is verwaarloosbaar hemolyse bij fysiologische pH (7,4) en robuust hemolyse in het endo-lysosomale pH-traject van ongeveer pH 5-6,8.

<html> Typisch het ideale middelen die pH-afhankelijk gedrag vertonen hemolytische hebben het grootste potentieel voor cytosolische toediening van geneesmiddelen, nucleïnezuren en andere biologisch actieve moleculen. Dit wordt geïllustreerd door Agent 1 als afgebeeld in figuur 2, die minimale hemolyse vertoont bij pH 7,4, maar een sterke toename van hemolytische gedrag endosomale pH bereik (&lt;6,5). Sommige middelen kunnen vertonen aanzienlijke mate hemolytische gedrag bij fysiologische pH bereik (Age...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs at JoVE.com

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

Een hemolyse assay kan worden gebruikt als een snelle, high-throughput screen van drug delivery systems &#39;cytocompatibility en endosomolytic activiteit intracellulaire lading levering. De test meet de verstoring van de erythrocyten membranen als functie van pH milieu.

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolyse Assay voor de beoordeling van de pH-responsieve Endosomolytic Agenten voor Cytosolic Levering van Biomacromoleculaire Drugs

Phospholipid bilayers that constitute endo-lysosomal vesicles can pose a barrier to delivery of biologic drugs to intracellular targets. To overcome this ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig Based Artificial antigeen presenterende cellen voor efficiënte Ex vivo Uitbreiding van de Mens CTL

CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introductie van Shear Stress in de studie van bacteriële hechting

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

A Quantitative Evaluation of Cell Migration by the Phagokinetic Track Motility Assay

Een kwantitatieve evaluatie van celmigratie door de Phagokinetic Track Motiliteit Assay

Cellular motility is an important biological process for both unicellular and multicellular organisms. It is essential for movement of unicellular ...

Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols

Antigenen functionele rode bloedcellen die beschermd worden door de membraan enten van Compact Hypervertakte Polyglycerolen

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Methoden voor de kwantitatieve detectie van antilichaam-geïnduceerde complement activatie op de rode bloedcellen

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

High-throughput Kwantitatieve real-time RT-PCR assay voor het bepalen van expressieprofielen van de typen I en III interferon subtypen

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

Toepassing van een monocyt monolaag Gehalte aan Fcy receptor-gemedieerde fagocytose evalueren

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran verbetert de efficiëntie van de lentivirale transductie van lymfkliertest en menselijke primaire NK-cellen

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

A Simple Red Blood Cell Lysis Method for the Establishment of B Lymphoblastoid Cell Lines

A Simple Red Blood Cell Lysis Methode voor de oprichting van B lymfoblastoïde cellijnen

A number of methods exist for the transformation of B lymphocytes by the Epstein Barr virus in vitro into immortalized cell lines. We have developed a new ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay voor detectie van antigeen-specifieke T-cel cytolytische functie met behulp van een vaccinatie-Model

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...