Name: ex vivo red blood cell hemolysis assay for the evaluation of ph-responsive endosomolytic agents for cytosolic delivery of biomacromolecular drugs
Uploaded: 2013-03-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs at JoVE.com

החוקרים מכירים במימון באמצעות משרד הגנת תוכניות בימוי congressionally מחקר רפואיים (# W81XWH-10-1-0445), מכונים לאומיים לבריאות (NIH R21 HL110056), ואיגוד לב אמריקאי (# 11SDG4890030).

1. הכנה ועיקור של חוצצים וסוכני מבחן <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 150 חיץ mM NaCl: ממס 4.383 גבישים גרם NaCl ב500 מיליליטר מי nanopure. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Buffers pH: הכן מאגרי פוספט ב-pH 5.6, 6.2, 6.8, ו -7.4 על ידי ערבוב כמויות מתאימות של monobasic ופוספט נתרן dibasic. אם דגימו?...

<ol>
	<li>Alberts, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Biology of the Cell. , (2002).</li><li>Boasson, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Bacteriolysis+by+Lysozyme.">On the Bacteriolysis by Lysozyme.</a> The Journal of Immunology. 34, 281-293 (1938).</li><li>Convertine, A. J., Benoit, D. S., Duvall, C. L., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+endosomolytic+diblock+copolymer+for+siRNA+delivery.">Development of a novel endosomolytic diblock copolymer for siRNA delivery.</a> J. Control. Release. 133, 221-229 (2009).</li><li>Duvall, C. L., Convertine, A. J., Benoit, D. S., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Delivery+of+a+Proapoptotic+Peptide+via+Conjugation+to+a+RAFT+Synthesized+Endosomolytic.">Intracellular Delivery of a Proapoptotic Peptide via Conjugation to a RAFT Synthesized Endosomolytic.</a> 7, 468-476 (2010).</li><li>Varkouhi, A. K., Scholte, M., Storm, G., Haisma, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomal+escape+pathways+for+delivery+of+biologicals.">Endosomal escape pathways for delivery of biologicals.</a> Journal of Controlled Release. 151, 220-228 (2011).</li><li>Plank, C., Oberhauser, B., Mechtler, K., Koch, C., Wagner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+endosome-disruptive+peptides+on+gene+transfer+using+synthetic+virus-like+gene+transfer+systems.">The influence of endosome-disruptive peptides on gene transfer using synthetic virus-like gene transfer systems.</a> Journal of Biological Chemistry. 269, 12918-12924 (1994).</li><li>Ratner, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+Cells+Are+Sensitive+Detectors+of+Bacterial+Pore-forming+Toxins.">Epithelial Cells Are Sensitive Detectors of Bacterial Pore-forming Toxins.</a> Journal of Biological Chemistry. 281, 12994-12998 (2006).</li><li>Saar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+peptides:+A+comparative+membrane+toxicity+study.">Cell-penetrating peptides: A comparative membrane toxicity study.</a> Analytical Biochemistry. 345, 55-65 (2005).</li><li>Kichler, A., Leborgne, C., Coeytaux, E., Danos, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyethylenimine-mediated+gene+delivery:+a+mechanistic+study.">Polyethylenimine-mediated gene delivery: a mechanistic study.</a> The Journal of Gene Medicine. 3, 135-144 (2001).</li><li>Behr, J. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proton+Sponge:+a+Trick+to+Enter+Cells+the+Viruses+Did+Not+Exploit.">The Proton Sponge: a Trick to Enter Cells the Viruses Did Not Exploit.</a> CHIMIA International Journal for Chemistry. 51, 34-36 (1997).</li><li>Dawson, R. M. C., Elliot, D. C., Elliot, W. H., Jones, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Data for Biochemical Research. , (1986).</li><li>Ernst, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Applied Phlebotomy. , (2005).</li><li>Bulmus, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+pH-responsive+and+glutathione-reactive,+endosomal+membrane-disruptive+polymeric+carrier+for+intracellular+delivery+of+biomolecular+drugs.">A new pH-responsive and glutathione-reactive, endosomal membrane-disruptive polymeric carrier for intracellular delivery of biomolecular drugs.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 93, 105-120 (2003).</li><li>Lackey, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolytic+Activity+of+pH-Responsive+Polymer-Streptavidin+Bioconjugates.">Hemolytic Activity of pH-Responsive Polymer-Streptavidin Bioconjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 10, 401-405 (1999).</li><li>Murthy, N., Campbell, J., Fausto, N., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinspired+pH-responsive+polymers+for+the+intracellular+delivery+of+biomolecular+drugs.">Bioinspired pH-responsive polymers for the intracellular delivery of biomolecular drugs.</a> Bioconjugate chemistry. 14, 412-419 (2003).</li><li>Murthy, N., Robichaud, J. R., Tirrell, D. A., Stayton, P. S., Hoffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+and+synthesis+of+polymers+for+eukaryotic+membrane+disruption.">The design and synthesis of polymers for eukaryotic membrane disruption.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 61, 137-143 (1999).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+endosomal+barrier+by+amphotericin+B-loaded+dual+pH-responsive+PDMA-b-PDPA+micelleplexes+for+siRNA+delivery.">Overcoming endosomal barrier by amphotericin B-loaded dual pH-responsive PDMA-b-PDPA micelleplexes for siRNA delivery.</a> ACS nano. 5, 9246-9255 (2011).</li><li>Nelson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+local+delivery+of+siRNA+from+an+injectable+scaffold.">Sustained local delivery of siRNA from an injectable scaffold.</a> Biomaterials. 33, 1154-1161 (2012).</li><li>Miozzari, G. F., Niederberger, P., H&#252;tter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+of+microorganisms+by+Triton+X-100.">Permeabilization of microorganisms by Triton X-100.</a> Analytical Biochemistry. 90, 220-233 (1978).</li><li>Chen, H., Zhang, H., McCallum, C. M., Szoka, F. C., Guo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unsaturated+Cationic+Ortho+Esters+for+Endosome+Permeation+in+Gene+Delivery.">Unsaturated Cationic Ortho Esters for Endosome Permeation in Gene Delivery.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 50, 4269-4278 (2007).</li><li>Roth, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Measurements+and+Rational+Materials+Design+for+Intracellular+Delivery+of+Oligonucleotides.">Quantitative Measurements and Rational Materials Design for Intracellular Delivery of Oligonucleotides.</a> Biotechnology Progress. 24, 23-28 (2008).</li><li>Blumenthal, R., Seth, P., Willingham, M. C., Pastan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-dependent+lysis+of+liposomes+by+adenovirus.">pH-dependent lysis of liposomes by adenovirus.</a> Biochemistry. 25, 2231-2237 (1986).</li><li>Moore, N. M., Sheppard, C. L., Barbour, T. R., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+endosomal+escape+peptides+on+in+vitro+gene+delivery+of+polyethylene+glycol-based+vehicles.">The effect of endosomal escape peptides on in vitro gene delivery of polyethylene glycol-based vehicles.</a> The Journal of Gene Medicine. 10, 1134-1149 (2008).</li><li>Panyam, J., Zhou, W. Z., Prabha, S., Sahoo, S. K., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+endo-lysosomal+escape+of+poly(DL-lactide-co-glycolide)+nanoparticles:+implications+for+drug+and+gene+delivery.">Rapid endo-lysosomal escape of poly(DL-lactide-co-glycolide) nanoparticles: implications for drug and gene delivery.</a> The FASEB Journal. 16, 1217-1226 (2002).</li></ol>

פולימרים המגיבים לרמת חומציות או סוכנים אחרים שנועדו לתפקוד endosomolytic יכולים להיות מוקרן במהירות וביעילות על בסיס תמוגה של תאי דם אדומים בערכי pH נתקלו בendosome (איור 1; pH 6.8 - endosome מוקדם, pH 6.2 - endosome מאוחר, pH 5.6 - lysosome). 14-17 המוליזה חומציות תלויה נעשה שימוש כדי להק?...

אמנם יש מטרות פוטנציאליות רבות השפעה גבוהה טיפוליות בתוך התא, משלוח תאיים של סוכנים מהווה אתגר משמעותי. לעתים קרובות, תרופות, בעיקר ביולוגי, הם הפנימו על ידי תאים ונסחרים בשלפוחית ​​כי גם להוביל להידרדרות התכנים שלהם דרך מסלול Endo-lysosomal, או מועברים מדלת אחורית של התא דרך exocytosis. 1 בתהליך האחרון, pH הפנימי של השלפוחית ​​היא acidified לכ 5-6, המהווה את ה-pH האופטימלית לפעילות של אנזימים המתפקדים בתא זה, כגון Lysozyme 2. לאחרונה, מספר החומרים שתוכנן במיוחד כדי למנף את ההחמצה של endosomes להקל על הגשת cytosolic של המטען. אחת דוגמאות לגישה זו משתמשת, חלקיקי פולימר סינטטיים micelle ליבה שלהם הוא zwitterionic ותשלום ניטראלי ב pH הפיזיולוגי (כלומר 7.4). עם זאת, ב6.0 pH- 6.5, הפולימרים הפכו protonated ולרכוש מטען חיובי נטו שמערער ליבת micelle, ומגזרי הפולימרים נחשפו אינטראקציה עם ולשבש את קרום endosomal. פעילות זו הוכחה לקדם את בריחת endosomal של רפוי פפטידים וחומצות גרעין מבוסס, המאפשר להם לגשת למטרות cytosolic. 3,4 דוגמאות נוספות לשיטות שפותחו לתווך בריחת endosomal שישבש את מחסום הקרום כוללים פפטידים &#39;fusogenic&#39; או חלבונים שיכולים לתווך איחוי או היווצרות נקבובית חולפת בbilayer פוספוליפידים. 5 Homopolymers של חומצות אקריליק אלקיל anionic כגון פולי (חומצת propylacrylic) הם עוד גישה למד היטב, ובפולימרים אלו, מדינת protonation של חומצת carboxylic תליון מכתיבה מעבר לידרופובי, מדינת קרום מפריע בטווחי pH Endo-lysosomal. 6,7 מערכת מודל שימושית אחד לסינון התנהגות endosomolytic היא הדוארassay x vivo החומציות התלויה המוליזה. 8 במערכת מודל זה, הקרום הכדורי האדום משמש כתחליף לשומני קרום bilayer שמצרף שלפוחית ​​Endo-lysosomal. מודל הכללה זו נעשה שימוש על ידי אחרים כדי להעריך את התנהגות endosomolytic של פפטידים תא חודרים ומערכות אספקה ​​אחרות פולימריים גנים. 8-11 בניסוי זה, תאים אנושיים דם אדומים וחומרי בדיקה הם שיתוף מודגרות-בחוצצים בPHS המוגדר המחקים תאיות (7.4), מוקדם endosomal (6.8), ומאוחר Endo-lysosomal (&lt;6.8) הסביבות. כמות ההמוגלובין שפורסם במהלך תקופת הדגירה היא לכמת כמדד לתמוגה תאי דם אדומה, שמנורמלת לכמות ההמוגלובין פרסמה בדגימות בקרה חיוביות lysed עם חומר ניקוי. מהקרנת ספרייה קטנה של חומרי בדיקת הפוטנציאל endosomolytic, ניתן להסיק כי דגימות שמייצרות לא המוליזה ב-pH 7.4, אבל שולים גבוהים באופן משמעותיolysis ב-pH &lt;6.5, יהיה המועמדים היעילים וcytocompatible ביותר עבור משלוח סמים cytosolic. חומרים המתאימים לקריטריונים אלו יהיו צפויים להישאר אדישים ולא להרוס ללא הבחנה קרומי bilayer שומנים (כלומר שעלולה לגרום cytotoxicity) עד שנחשף לירידה ברמת החומציות המקומית בעקבות הפנמה לתאי אנדו-lysosomal. בפרוטוקול זה, אריתרוציטים מבודדים מתורם אנושי ושיתוף מודגרות-ב-pH 5.6, 6.2, 6.8, או 7.4 עם סוכני משלוח ניסיוניים endosomolytic סמים. אריתרוציטים שלמים pelleted, וsupernatants (המכיל המוגלובין שוחרר מאריתרוציטים lysed) מנותח לספיגה האופיינית למוגלובין באמצעות קורא צלחת (איור 1).

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> שם המגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td><td> תגובות (אופציונלי) </td></tr><tr><td> BD Vacutainer - K2EDTA Vacutainer צינורות </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 22-253-145 </td><td> לאיסוף דם </td></tr><tr><td> מחטי BD Vacutainer דם אוסף, 20.5-מד </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 02-665-31 </td><td> לאיסוף דם </td></tr><tr><td> בעל / מחט מתאם Tube Vacutainer BD </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 22-289-953 </td><td> לאיסוף דם </td></tr><tr><td> BD מותג איזופרופיל אלכוהול מטליות </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 13-680-63 </td><td> לאיסוף דם </td></tr><tr><td> BD-Vacutainer אטקס חינם חוסם עורק </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 02-657-6 </td><td> לאיסוף דם </td&gt; </tr><tr><td> חומצה הידרוכלורית (conc.) </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> A144-500 </td><td> להתאמה של ה-pH של D-PBS. </td></tr><tr><td> טריטון X-100 </td><td> סיגמה אולדריץ </td><td> T8787 </td><td> ביקורת חיובית </td></tr><tr><td> PBS של Dulbecco </td><td> Invitrogen </td><td> 14190 </td><td></td></tr><tr><td> Nalgene MF75 יחידת סטרילי פנוי בקבוק למעלה עם מסנן SFCA ממברנה </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 09-740-44A </td><td></td></tr><tr><td> צלחות BD 96-כן, קלקר שטוח תחתית, רקמת תרבות מטופלים </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 08-772-2C </td><td> לצלחת קריאה בסוף הבדיקה. </td></tr><tr><td> צלחות BD 96-כן, קלקר עגולים תחתיות ורקמות התרבות טופלה </td><td> הפישר סיינטיפיק </td><td> 08-772-17 </td><td> לדגירה של תאי דם אדומים עם סוכנים ניסיוניים. </td></tr></שולחן&gt;

ex vivo red blood cell hemolysis assay for the evaluation of ph-responsive endosomolytic agents for cytosolic delivery of biomacromolecular drugs

bilayers פוספוליפידים שמרכיב שלפוחית ​​Endo-lysosomal יכול להוות מכשול למשלוח של תרופות ביולוגיות למטרות תאיות. כדי להתגבר על המכשול הזה, מספר נישאי תרופות סינטטיים כבר מהונדס באופן פעיל כדי לשבש את קרום endosomal ולספק סחורות לציטופלסמה. כאן, אנו מתארים את assay המוליזה, שיכול לשמש גם כמסך מהיר, תפוקה גבוהה ולפעילות cytocompatibility endosomolytic של מערכות אספקת סמים תאיות. בבדיקת המוליזה, תאים אנושיים דם אדומים וחומרי בדיקה הם שיתוף הדגרו בחוצצים בPHS המוגדר המחקים סביבות תאיות, מוקדם endosomal, ומאוחר Endo-lysosomal. בעקבות צעד צנטריפוגה לתאי דם אדומים שלמים גלולה, כמות ההמוגלובין משתחררת למדיום נמדדה spectrophotometrically (405 ננומטר לטווח דינמי הטוב ביותר). אז שיבוש תאי הדם האדום הוא לכמת אחוזים יחסית לשליטת samp החיוביles lysed עם חומר ניקוי. במערכת מודל זה קרום הכדורי האדום משמש כתחליף לשומני קרום bilayer שמצרף שלפוחית ​​Endo-lysosomal. התוצאה הרצויה היא המוליזה זניח ב-pH הפיזיולוגי (7.4) והמוליזה חזקה בטווח pH Endo-lysosomal מכ חומציות 5-6.8.

<html> בדרך כלל, את הסוכנים שמציגים התנהגות המוליטית חומציות תלויה אידיאלית יש את הפוטנציאל הגבוה ביותר למסירת cytosolic של תרופות, חומצות גרעין, או מולקולות ביו אחרות. זה בא לידי הביטוי על ידי סוכן # 1 כפי שהיא מתוארת באיור 2, אשר מציג המוליזה מינימאלי ב-pH 7.4, אך עלייה ?...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs at JoVE.com

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

Assay המוליזה יכול לשמש כמסך מהיר, תפוקה גבוהה של cytocompatibility &quot;מערכות אספקת סמים ופעילות endosomolytic למסירת מטען תאית. הבדיקה מודדת את השיבוש של קרום כדורי אדום כפונקציה של pH הסביבה.

Assay גופיים תא דם אדום המוליזה להערכת סוכני Endosomolytic pH המגיבים למשלוח cytosolic של סמי Biomacromolecular

Phospholipid bilayers that constitute endo-lysosomal vesicles can pose a barrier to delivery of biologic drugs to intracellular targets. To overcome this ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-איג בהתבסס Antigen תאים מלאכותיים הצגת עבור יעיל לשעבר vivo הרחבת CTL האדם

CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

A Quantitative Evaluation of Cell Migration by the Phagokinetic Track Motility Assay

הערכה כמותית של נדידת תאים על ידי Assay כושר תנועת המסלול Phagokinetic

Cellular motility is an important biological process for both unicellular and multicellular organisms. It is essential for movement of unicellular ...

Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols

אנטיגנים מוגנים תאי דם אדומים פונקציונליים על ידי ההשתלה של ממברנה Polyglycerols Hyperbranched הקומפקטי

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

שיטות כמותיות לאיתור של הפעלת משלים-Induced נוגדן בתאי דם אדומים

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

תפוקה גבוהה בזמן אמת כמותי RT-PCR Assay לקביעת פרופילי ביטוי של סוגי I ו- III תת סוגי אינטרפרון

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

שימוש Assay מונוציטים חד שכבתי להערכת Fcγ קולטן בתיווך Phagocytosis

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

לתוספי משפר את היעילות התמרה חושית Lentiviral של תאי NK העיקרי מאתר ואנושי

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

A Simple Red Blood Cell Lysis Method for the Establishment of B Lymphoblastoid Cell Lines

תא דם אדום פשוט שיטת תמוגה להקמת שורות תאי B Lymphoblastoid

A number of methods exist for the transformation of B lymphocytes by the Epstein Barr virus in vitro into immortalized cell lines. We have developed a new ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

אין ויוו Assay גילוי של הפונקציה Cytolytic תא T אנטיגן ספציפי באמצעות מודל החיסון

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...