Name: ex vivo red blood cell hemolysis assay for the evaluation of ph-responsive endosomolytic agents for cytosolic delivery of biomacromolecular drugs
Uploaded: 2013-03-09T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs at JoVE.com

Författarna erkänner finansiering genom försvarsdepartementet congressionally riktade Medical Research Program (# W81XWH-10-1-0445), National Institutes of Health (NIH R21 HL110056) och American Heart Association (# 11SDG4890030).

1. Beredning och Sterilisering av Buffertar och ombud Test <ol><li> 150 mM NaCl-buffert: Lös 4,383 g NaCl kristaller i 500 ml nanorent vatten. </li><li> pH-buffertar: Förbered fosfatbuffertar vid pH 5,6, 6,2, 6,8, och 7,4 genom att blanda lämpliga mängder av monobasiskt och dibasiskt natriumfosfat. Om proverna ska testas vid lägre pH-värden (dvs. pH &lt;5,6) sedan en mer lämplig buffert, såsom citratbuffert, bör användas. Buffer recept är lätt tillgängliga, och ett exempel referens har lämnats h...

<ol>
	<li>Alberts, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Biology of the Cell. , (2002).</li><li>Boasson, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Bacteriolysis+by+Lysozyme.">On the Bacteriolysis by Lysozyme.</a> The Journal of Immunology. 34, 281-293 (1938).</li><li>Convertine, A. J., Benoit, D. S., Duvall, C. L., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+novel+endosomolytic+diblock+copolymer+for+siRNA+delivery.">Development of a novel endosomolytic diblock copolymer for siRNA delivery.</a> J. Control. Release. 133, 221-229 (2009).</li><li>Duvall, C. L., Convertine, A. J., Benoit, D. S., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Delivery+of+a+Proapoptotic+Peptide+via+Conjugation+to+a+RAFT+Synthesized+Endosomolytic.">Intracellular Delivery of a Proapoptotic Peptide via Conjugation to a RAFT Synthesized Endosomolytic.</a> 7, 468-476 (2010).</li><li>Varkouhi, A. K., Scholte, M., Storm, G., Haisma, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endosomal+escape+pathways+for+delivery+of+biologicals.">Endosomal escape pathways for delivery of biologicals.</a> Journal of Controlled Release. 151, 220-228 (2011).</li><li>Plank, C., Oberhauser, B., Mechtler, K., Koch, C., Wagner, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+endosome-disruptive+peptides+on+gene+transfer+using+synthetic+virus-like+gene+transfer+systems.">The influence of endosome-disruptive peptides on gene transfer using synthetic virus-like gene transfer systems.</a> Journal of Biological Chemistry. 269, 12918-12924 (1994).</li><li>Ratner, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+Cells+Are+Sensitive+Detectors+of+Bacterial+Pore-forming+Toxins.">Epithelial Cells Are Sensitive Detectors of Bacterial Pore-forming Toxins.</a> Journal of Biological Chemistry. 281, 12994-12998 (2006).</li><li>Saar, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell-penetrating+peptides:+A+comparative+membrane+toxicity+study.">Cell-penetrating peptides: A comparative membrane toxicity study.</a> Analytical Biochemistry. 345, 55-65 (2005).</li><li>Kichler, A., Leborgne, C., Coeytaux, E., Danos, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyethylenimine-mediated+gene+delivery:+a+mechanistic+study.">Polyethylenimine-mediated gene delivery: a mechanistic study.</a> The Journal of Gene Medicine. 3, 135-144 (2001).</li><li>Behr, J. -. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Proton+Sponge:+a+Trick+to+Enter+Cells+the+Viruses+Did+Not+Exploit.">The Proton Sponge: a Trick to Enter Cells the Viruses Did Not Exploit.</a> CHIMIA International Journal for Chemistry. 51, 34-36 (1997).</li><li>Dawson, R. M. C., Elliot, D. C., Elliot, W. H., Jones, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Data for Biochemical Research. , (1986).</li><li>Ernst, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Applied Phlebotomy. , (2005).</li><li>Bulmus, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+pH-responsive+and+glutathione-reactive,+endosomal+membrane-disruptive+polymeric+carrier+for+intracellular+delivery+of+biomolecular+drugs.">A new pH-responsive and glutathione-reactive, endosomal membrane-disruptive polymeric carrier for intracellular delivery of biomolecular drugs.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 93, 105-120 (2003).</li><li>Lackey, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemolytic+Activity+of+pH-Responsive+Polymer-Streptavidin+Bioconjugates.">Hemolytic Activity of pH-Responsive Polymer-Streptavidin Bioconjugates.</a> Bioconjugate Chemistry. 10, 401-405 (1999).</li><li>Murthy, N., Campbell, J., Fausto, N., Hoffman, A. S., Stayton, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinspired+pH-responsive+polymers+for+the+intracellular+delivery+of+biomolecular+drugs.">Bioinspired pH-responsive polymers for the intracellular delivery of biomolecular drugs.</a> Bioconjugate chemistry. 14, 412-419 (2003).</li><li>Murthy, N., Robichaud, J. R., Tirrell, D. A., Stayton, P. S., Hoffman, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+design+and+synthesis+of+polymers+for+eukaryotic+membrane+disruption.">The design and synthesis of polymers for eukaryotic membrane disruption.</a> Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 61, 137-143 (1999).</li><li>Yu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+endosomal+barrier+by+amphotericin+B-loaded+dual+pH-responsive+PDMA-b-PDPA+micelleplexes+for+siRNA+delivery.">Overcoming endosomal barrier by amphotericin B-loaded dual pH-responsive PDMA-b-PDPA micelleplexes for siRNA delivery.</a> ACS nano. 5, 9246-9255 (2011).</li><li>Nelson, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+local+delivery+of+siRNA+from+an+injectable+scaffold.">Sustained local delivery of siRNA from an injectable scaffold.</a> Biomaterials. 33, 1154-1161 (2012).</li><li>Miozzari, G. F., Niederberger, P., H&#252;tter, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Permeabilization+of+microorganisms+by+Triton+X-100.">Permeabilization of microorganisms by Triton X-100.</a> Analytical Biochemistry. 90, 220-233 (1978).</li><li>Chen, H., Zhang, H., McCallum, C. M., Szoka, F. C., Guo, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unsaturated+Cationic+Ortho+Esters+for+Endosome+Permeation+in+Gene+Delivery.">Unsaturated Cationic Ortho Esters for Endosome Permeation in Gene Delivery.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 50, 4269-4278 (2007).</li><li>Roth, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Measurements+and+Rational+Materials+Design+for+Intracellular+Delivery+of+Oligonucleotides.">Quantitative Measurements and Rational Materials Design for Intracellular Delivery of Oligonucleotides.</a> Biotechnology Progress. 24, 23-28 (2008).</li><li>Blumenthal, R., Seth, P., Willingham, M. C., Pastan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-dependent+lysis+of+liposomes+by+adenovirus.">pH-dependent lysis of liposomes by adenovirus.</a> Biochemistry. 25, 2231-2237 (1986).</li><li>Moore, N. M., Sheppard, C. L., Barbour, T. R., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+endosomal+escape+peptides+on+in+vitro+gene+delivery+of+polyethylene+glycol-based+vehicles.">The effect of endosomal escape peptides on in vitro gene delivery of polyethylene glycol-based vehicles.</a> The Journal of Gene Medicine. 10, 1134-1149 (2008).</li><li>Panyam, J., Zhou, W. Z., Prabha, S., Sahoo, S. K., Labhasetwar, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+endo-lysosomal+escape+of+poly(DL-lactide-co-glycolide)+nanoparticles:+implications+for+drug+and+gene+delivery.">Rapid endo-lysosomal escape of poly(DL-lactide-co-glycolide) nanoparticles: implications for drug and gene delivery.</a> The FASEB Journal. 16, 1217-1226 (2002).</li></ol>

pH-responsiva polymerer eller andra medel avsedda för endosomolytic funktion kan vara snabbt och effektivt screenas utifrån lys av röda blodkroppar vid pH-värden som uppstått i endosomen (figur 1, pH 6,8 - tidig endosome, pH 6,2 - sen endosome, pH 5,6 - lysosom). 14-17 pH-beroende hemolys har använts för att screena förmåga transportörer att mediera endosomala frisättning av biomacromolecular terapeutiska (t.ex. peptider, siRNA, ODN, proteiner), och resultaten av denna ana...

Även om det finns många potentiella stor genomslagskraft terapeutiska mål inuti cellen, utgör den intracellulära tillförsel av medel en stor utmaning. Ofta är läkemedel, särskilt biologiska, internaliseras av celler och smugglas in vesiklar som antingen leder till nedbrytning av deras innehåll genom endo-lysosomala vägen, eller pendlade tillbaka ut ur cellen via exocytos. 1 I den senare processen, den inre pH av vesiklarna surgöres till ca 5-6, vilket är det optimala pH för aktivitet av enzymer som fungerar i denna avdelning, såsom lysozym. 2 Nyligen har ett antal material har utvecklats särskilt för att utnyttja försurning av endosomer att underlätta cytosoliskt leverans av sin last. Ett exempel på detta tillvägagångssätt använder syntetiska, polymermicell nanopartiklar vars kärna är zwitterjoniska och laddnings-neutralt vid fysiologiskt pH (dvs 7,4). Emellertid, vid pH 6,0- 6,5, blir polymererna protoneras och förvärva en positiv nettoladdning som destabiliserar micellen kärnan, och de exponerade polymersegmenten interagerar med och störa det endosomala membranet. Denna verksamhet har visat sig främja endosomala flykten av peptid och nukleinsyra-baserade läkemedel, så att de kan komma åt sina cytosoliska mål. Inkluderar &quot;fusogena&quot; peptider eller 3,4 Andra exempel på metoder som utvecklats för att förmedla endosomal flykt som stör membranet barriären proteiner som kan mediera membranfusion eller övergående porbildning i fosfolipid dubbelskiktet. 5 Homopolymerer av anjoniska alkyl akrylsyror såsom poly (propylacrylic syra) är en annan väl studerade strategi, och i dessa polymerer, dikterar protonering tillstånd vidhängande karboxylsyra övergång till ett hydrofobt, membran-störande tillstånd i endo-lysosomala pH-områden. 6,7 En användbar modell för screening endosomolytic beteende är eX vivo pH-beroende hemolys analys. 8 I denna modell system tjänar erytrocyt membran som ett surrogat för lipidbiskiktmembranet som omsluter endo-lysosomala vesikler. Denna generaliserbar modell har använts av andra för att utvärdera endosomolytic beteende cellpenetrerande peptider och andra polymera gen leveranssystem. 8-11 I detta experiment humana röda blodkroppar och material testa är saminkuberas i buffertar vid definierade pH-värden som efterliknar extracellulära (7,4), tidig endosomala (6,8), och sen endo-lysosomala (&lt;6,8) miljöer. Mängden hemoglobin frigörs under inkubationsperioden kvantifieras som ett mått på röda blodkroppar lys, som normaliseras till mängden hemoglobin frigörs i positiva kontrollprover lyserade med en detergent. Från screening ett litet bibliotek av potentiellt endosomolytic testmaterial, kan en dra slutsatsen att prover som producerar ingen hemolys vid pH 7,4, men signifikant förhöjd fållolysis vid pH &lt;6,5, kommer att vara de mest effektiva och cytocompatible kandidater för cytosoliskt drug delivery. Material som passar dessa kriterier skulle förväntas förbli inert och inte urskillningslöst förstör lipiddubbelskikts membran (dvs. som kan orsaka cytotoxicitet) tills att utsättas för en nedgång i den lokala pH-efter internalisering i endo-lysosomala fack. I detta protokoll används erytrocyter isolerade från en human donator och sam-inkuberas vid pH 5,6, 6,2, 6,8 eller 7,4 med experimentella endosomolytic ämnen drug delivery. Intakta erytrocyter pelleteras, och supernatanterna (innehållande hemoglobin frigörs från lyserade erytrocyter) analyseras för karakteristiska absorbans av hemoglobin genom en plattläsare (figur 1).

<table border="1"><tr><td> Namnet av reagenset </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer (tillval) </td></tr><tr><td> BD Vacutainer - K2EDTA vacutainerrör </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-253-145 </td><td> För blodinsamling </td></tr><tr><td> BD Vacutainer blodinsamling Needles, 20,5-gauge </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-665-31 </td><td> För blodinsamling </td></tr><tr><td> BD Vacutainer slanghållare / nål adapter </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-289-953 </td><td> För blodinsamling </td></tr><tr><td> BD Brand Isopropylalkohol Svabbar </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-680-63 </td><td> För blodinsamling </td></tr><tr><td> BD Vacutainer latexfri Tourniquet </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-657-6 </td><td> För blodinsamling </td&gt; </tr><tr><td> Saltsyra (konc.) </td><td> Fisher Scientific </td><td> A144-500 </td><td> För justering av pH av D-PBS. </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8787 </td><td> Positiv kontroll </td></tr><tr><td> Dulbeccos PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 14.190 </td><td></td></tr><tr><td> Nalgene MF75 Steril Engångs Bottle-Top Filtersystem med SFCA Membran </td><td> Fisher Scientific </td><td> 09-740-44A </td><td></td></tr><tr><td> BD 96-brunnsplattor, flatbottnad, vävnadsodling behandlade polystyren </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-772-2C </td><td> För platta behandlingen vid slutet av analysen. </td></tr><tr><td> BD 96-brunnsplattor, rundbottnad, vävnadsodling behandlade polystyren </td><td> Fisher Scientific </td><td> 08-772-17 </td><td> För inkubering av röda blodkroppar med experimentella medel. </td></tr></table&gt;

ex vivo red blood cell hemolysis assay for the evaluation of ph-responsive endosomolytic agents for cytosolic delivery of biomacromolecular drugs

Fosfolipid dubbelskikt som utgör endo-lysosomala vesikler kan utgöra ett hinder för leverans av biologiska läkemedel till intracellulära mål. För att övervinna detta hinder, har ett antal syntetiska läkemedelsbärare konstruerats för att aktivt störa det endosomala membranet och leverera gods in i cytoplasman. Här beskriver vi den hemolys analys, som kan användas som en snabb, hög genomströmning skärm för cytocompatibility och endosomolytic aktivitet av intracellulära läkemedelsavgivningssystem. I hemolys analysen är humana röda blodkroppar och material testa saminkuberas i buffertar vid definierade pH-värden som efterliknar extracellulära, tidig endosomala, och sen endo-lysosomala miljöer. Efter ett centrifugeringssteg för att pelletera intakta röda blodkroppar, är mängden hemoglobin frigjort i mediet spektrofotometriskt uppmätta (405 nm för bästa dynamikområde). Den procentuella röda blodkroppar störningar sedan kvantifieras i förhållande till positiv kontroll SAMPles lyseras med rengöringsmedel. I detta modellsystem erytrocyt membranet fungerar som ett surrogat för lipidbiskiktmembranet som innesluter endo-lysosomala vesiklar. Det önskade resultatet är försumbar hemolys vid fysiologiskt pH (7,4) och robust hemolys i endo-lysosomala pH-område från ca pH 5-6,8.

<html> Typiskt medel som uppvisar ideala pH-beroende hemolytisk beteende har den högsta potentialen för cytosoliskt leverans av läkemedel, nukleinsyror eller andra bioaktiva molekyler. Detta exemplifieras av Agent # 1 såsom skildras i figur 2, som uppvisar minimal hemolys vid pH 7,4, men en kraftig ökning av hemolytisk beteende vid endosomala pH-intervall (&lt;6,5). Vissa medel kan uppvisa en hög grad av hemolytisk beteende vid fysiologiska pH-områden (ombud # 2 vid 40 pg / ml; figur 2),</...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs at JoVE.com

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

En hemolys analys kan användas som en snabb, hög genomströmning skärm av läkemedelsavgivningssystem &quot;cytocompatibility och endosomolytic aktivitet för intracellulär leverans last. Analysen mäter störningar i erytrocytmembran som en funktion av miljön pH.

Ex vivo röda blodkroppar Hemolys analys för utvärdering av pH-responsiva Endosomolytic ombud för cytosoliskt Leverans av Biomacromolecular Droger

Phospholipid bilayers that constitute endo-lysosomal vesicles can pose a barrier to delivery of biologic drugs to intracellular targets. To overcome this ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Ex Vivo Red Blood Cell Hemolysis Assay for the Evaluation of pH-responsive Endosomolytic Agents for Cytosolic Delivery of Biomacromolecular Drugs

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-Ig Based Artificial Antigen Presenting Cells for Efficient ex vivo Expansion of Human CTL

HLA-IG Baserat Konstgjord antigenpresenterande celler för effektiv Ex vivo Utbyggnad av mänskliga CTL

CTL with optimal effector function play critical roles in mediating protection against various intracellular infections and cancer. However, individuals ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introduktion Shear stress i studien av bakteriell vidhäftning

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

A Quantitative Evaluation of Cell Migration by the Phagokinetic Track Motility Assay

En kvantitativ utvärdering av cellmigration genom Phagokinetic Track Motility analys

Cellular motility is an important biological process for both unicellular and multicellular organisms. It is essential for movement of unicellular ...

Antigens Protected Functional Red Blood Cells By The Membrane Grafting Of Compact Hyperbranched Polyglycerols

Antigener skyddade funktionella röda blodkroppar av membranet Ympning av kompakt Hyperförgrenade Polyglyceroler

Red blood cell (RBC) transfusion is vital for the treatment of a number of acute and chronic medical problems such as thalassemia major and sickle cell ...

Methods for Quantitative Detection of Antibody-induced Complement Activation on Red Blood Cells

Metoder för kvantitativ detektion av antikroppsinducerad komplementaktivering på röda blodkroppar

Antibodies against red blood cells (RBCs) can lead to complement activation resulting in an accelerated clearance via complement receptors in the liver ...

High-throughput Quantitative Real-time RT-PCR Assay for Determining Expression Profiles of Types I and III Interferon Subtypes

Hög-throughput kvantitativ realtids-RT-PCR-analys för bestämning av uttryck Profiler av typ I och III Interferon Subtyper

Described in this report is a qRT-PCR assay for the analysis of seventeen human IFN subtypes in a 384-well plate format that incorporates highly specific ...

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate Fc&#947; Receptor-mediated Phagocytosis

Use of a Monocyte Monolayer Assay to Evaluate FcÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Receptor-mediated Phagocytosis

Användning av en monocyt Monolayer analys för att utvärdera Fcy-receptor-medierad fagocytos

Although originally developed for predicting transfusion outcomes of serologically incompatible blood, the monocyte monolayer assay (MMA) is a highly ...

Dextran Enhances the Lentiviral Transduction Efficiency of Murine and Human Primary NK Cells

Dextran effektiviserar Lentiviral transduktion murina och mänskliga primära NK-celler

The efficient transduction of specific genes into natural killer (NK) cells has been a major challenge. Successful transductions are critical to defining ...

A Simple Red Blood Cell Lysis Method for the Establishment of B Lymphoblastoid Cell Lines

En enkel röda blodkroppar Lysis metod för upprättande av B lymfoblastoidcellinjer

A number of methods exist for the transformation of B lymphocytes by the Epstein Barr virus in vitro into immortalized cell lines. We have developed a new ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Test för påvisande av Antigen-specifika T-cell cytolytisk funktion använder en Vaccination modell

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...