Name: biochemical and high throughput microscopic assessment of fat mass in caenorhabditis elegans
Uploaded: 2013-03-30T14:00:00
Duration: 16 min 7 s
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हम चर्चा और पांडुलिपि पढ़ने के लिए माइकल Kacergis तकनीकी सहायता और Lianfeng वू के लिए शुक्रिया अदा करना चाहूँगा. इस काम में एक कैरियर विकास पुरस्कार द्वारा NIH / NIDDK (K08DK087941 आस), / NIH NIDDK प्रशिक्षण अनुदान (5T32DK007028 ECP), एलिसन मेडिकल फाउंडेशन नई विद्वान एजिंग पुरस्कार (आस) में, और चार्ल्स एच से समर्थित किया गया हूड फाउंडेशन बाल स्वास्थ्य अनुसंधान पुरस्कार (आस).

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	<li>Zhang, S. O., Trimble, R., Guo, F., Mak, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+droplets+as+ubiquitous+fat+storage+organelles+in+C.+elegans.">Lipid droplets as ubiquitous fat storage organelles in C. elegans.</a> BMC Cell. 11, 96 (2010).</li><li>Kaletta, T., Hengartner, M. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Finding+function+in+novel+targets:+C.+elegans+as+a+model+organism.">Finding function in novel targets: C. elegans as a model organism.</a> Nature Reviews. Drug Discovery. 5, 387-398 (2006).</li><li>Leung, M. 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लेखक परस्पर विरोधी हितों का खुलासा करने के लिए नहीं है.

मनुष्य और निमेटोड Caenorhabditis एलिगेंस के बीच चयापचय मार्ग के संरक्षण यह मोटापे के अध्ययन के लिए एक शक्तिशाली मॉडल जीव बनाता है. जबकि सी. एलिगेंस adipocytes स्तनधारियों में की तरह वसा भंडारण के लिए समर्पित नहीं है, वे दुकान ट्राइग्लिसराइड्स लिपिड बूंदों 1 में करते हैं और वसा भंडारण और ऊर्जा का उपयोग करें 2,3 की एक ही नियामकों के कई अधिकारी. सी. में वसा के स्तर के लिए परख एलिगेंस, कई तरीकों आसानी और सफलता के स्तर पर अलग से एक प्रस्ताव किया गया है. फ्लोरोसेंट, महत्वपूर्ण 4-7 रंगों के एक बार आम उपयोग हाल ही में प्रश्न में बुलाया गया था, और इन अभिकर्मकों एक मुख्य सी. वसा भंडारण डिपो से अलग डिब्बे धुंधला हो साबित कर दिया 1,8-11 एलिगेंस. लगानेवाला आधारित सूडान काला और तेल लाल O जैसे गैर फ्लोरोसेंट रंजक, जबकि 12-14 कीड़ा में लिपिड बूंदों को उजागर करने में सफल है, एक बड़े गतिशील रेंज fluores रूप quantitation के लिए नहीं हैप्रतिशत 8,13,15 रंजक. इसके अलावा, दोनों फ्लोरोसेंट और गैर फ्लोरोसेंट रंगों के लिए निर्धारण के मौजूदा तरीकों समय लेने वाली हैं और कई कदम फ्रीज पिघलना और / या विषाक्त 1,9,10 रसायनों के उपयोग शामिल है. विशिष्ट BODIPY लेबल लिपिड analogs का उपयोग करने के लिए लिपिड बूंदों को उजागर जब अल्पकालिक 15 लेबल के साथ रहने वाले कीड़े खिलाया करने के लिए सूचित किया गया है. हालांकि इस डाई तेज पर निर्भर करता है और इसलिए सी. द्वारा पक्षपातपूर्ण एलिगेंस और BODIPY फैटी एसिड analogs की हैंडलिंग चयापचय. एक स्थापित लिपिड धुंधला रंगों के लिए वैकल्पिक लेबल मुक्त, सुसंगत विरोधी स्टोक्स रमन (कार) बिखरने या उत्तेजित रमन (एसआरएस) के बिखरने माइक्रोस्कोपी, जो लिपिड अणु की विशेषता कंपन गुणों का लाभ लेने के लिए मोटी दुकानों 10,16 कल्पना है, 17. हालांकि, इस विधि के लिए महंगी विशेष उपकरणों के लिए आवश्यक है, और throughput में सबसे कम है. तेजी से, स्केलेबल analy के लिए एक की जरूरत को पूरातटस्थ लिपिड दुकानों के सी. में सीस एलिगेंस चयापचय अनुसंधान, हम एक उपन्यास परिचय, लगानेवाला आधारित नील लाल लिपिड धुंधला हो जाना अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि. Lipophilic डाई नील लाल वर्णक्रमीय और भौतिक गुणों अपने चरम उत्तेजना उत्सर्जन में एक बदलाव पीले सोने वर्णक्रमीय प्रेरित, यह हरी उत्सर्जन स्पेक्ट्रम में केवल जब एक लिपिड युक्त वातावरण में नहीं है, लेकिन अधिक ध्रुवीय 18 वातावरण में प्रतिदीप्ति के लिए अनुमति देता है 19. इस प्रकार लिपिड बूंदों प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के लिए निर्धारित एक हरे फ्लोरोसेंट प्रोटीन फिल्टर (GFP) के उपयोग के द्वारा सरल धुंधला हो जाना के बाद पता लगाया जा सकता है. आसानी और इस तकनीक का सामर्थ्य यह आदर्श उच्च throughput स्क्रीन के लिए उपयुक्त बनाते हैं. हम भी एक जोड़ी, ट्राइग्लिसराइड्स और ठोस चरण निष्कर्षण और गैस क्रोमैटोग्राफी, मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग phospholipids के जैव रासायनिक दृढ़ संकल्प के लिए कठोर विधि प्रदर्शित करता है. बायोकेमिकल लिपिड माप लाल आधारित नील सी. सूक्ष्म दृढ़ संकल्प के साथ संबद्ध है एलिगेंस पिताटी, और बड़े पैमाने पर सूक्ष्म लिपिड दृढ़ संकल्प के साथ किए गए निष्कर्षों की पुष्टि के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए.

biochemical and high throughput microscopic assessment of fat mass in caenorhabditis elegans

निमेटोड सी. एलिगेंस संरक्षित आनुवंशिक वसा के चयापचय को विनियमित करने के रूप में यह मानव मोटापा और उसके संबंधित विकृतियों संबंधित रास्ते के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण मॉडल के रूप में उभरा है. पिछले कई सी. के दृश्य के लिए विकसित के तरीके एलिगेंस ट्राइग्लिसराइड अमीर मोटी दुकानों को गलत हो सकता है, सेलुलर लिपिड बूंदों के अलावा अन्य डिब्बों को उजागर करने के लिए सिद्ध कर दिया है. अन्य विधियों विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती है, समय लेने वाली हैं, या असंगत परिणाम निकलेगा. हम सी. में तटस्थ लिपिड बूंदों के सही और तेजी से पता लगाने के लिए तेजी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य, लगानेवाला आधारित नील लाल धुंधला विधि परिचय एलिगेंस. 40% isopropanol में एक छोटी नियतन कदम पूरी तरह से नील लाल, है जो फिर जानवरों दाग के लिए प्रयोग किया जाता है पारगम्य जानवरों बनाता है. इस lipophilic डाई के वर्णक्रमीय गुण यह दृढ़ता और चुनिंदा स्पेक्ट्रम पीले, हरे प्रतिदीप्ति के लिए अनुमति देते हैं लिपिड युक्त वातावरण में ही है, लेकिन अधिक नहीं जबध्रुवीय वातावरण. इस प्रकार, लिपिड बूंदों केवल एक संक्षिप्त isopropanol में नील लाल धुंधला हो जाना कदम के बाद एक फ्लोरोसेंट सरल GFP इमेजिंग क्षमता के साथ सुसज्जित खुर्दबीन पर देखे जा सकते हैं. गति, सामर्थ्य, और इस प्रोटोकॉल के reproducibility यह आदर्श उच्च throughput स्क्रीन के लिए उपयुक्त बनाते हैं. हम भी ट्राइग्लिसराइड्स और गैस क्रोमैटोग्राफी जन - स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग कर phospholipids के जैव रासायनिक निर्धारण के लिए एक जोड़ी विधि प्रदर्शित करता है. यह अधिक कठोर प्रोटोकॉल नील लाल सूक्ष्म लिपिड दृढ़ संकल्प से प्राप्त परिणामों की पुष्टि के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए. हम आशा करते हैं कि इन तकनीकों नए मानकों सी. के क्षेत्र में हो जाएगा एलिगेंस चयापचय अनुसंधान.

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Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

हम अध्ययन के लिए मजबूत जैव रासायनिक और सूक्ष्म तरीके प्रस्तुत<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em&gt; लिपिड भंडार. फ्लोरोसेंट लिपिड छोटी बूंद इमेजिंग के लिए एक तेजी से, सरल, प्रक्रिया फिक्सिंग धुंधला lipophilic डाई नील लाल वर्णक्रमीय गुणों का लाभ उठाता है. हम तो ट्राइग्लिसराइड्स और ठोस चरण निष्कर्षण और गैस क्रोमैटोग्राफी, मास स्पेक्ट्रोमेट्री का उपयोग phospholipids के जैव रासायनिक माप उपस्थित थे.

बायोकेमिकल और उच्च Throughput वसा द्रव्यमान का सूक्ष्म आकलन<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em

The nematode C. elegans has emerged as an important  model for the study of conserved genetic pathways regulating fat metabolism as  it relates to human ...

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Biochemical and High Throughput Microscopic Assessment of Fat Mass in Caenorhabditis Elegans

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Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

Isolation and In vitro Activation of Caenorhabditis elegans Sperm

अलगाव और इन विट्रो में सक्रियकरण Caenorhabditis एलिगेंस शुक्राणु

Males and hermaphrodites are the two naturally found sexual forms in the nematode C. elegans. The amoeboid sperm are produced by both males and ...

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

उच्च throughput और प्रतिदीप्त के साथ स्क्रीनिंग biosensing सी. एलिगेंस खींच

High-throughput screening (HTS) is a powerful approach for identifying chemical modulators of biological processes.  However, many compounds identified in ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

समय चूक प्रारंभिक Embryogenesis में माइक्रोस्कोपी Caenorhabditis एलिगेंस

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

मात्रात्मक और स्वचालित उच्च throughput जीनोम चौड़ा में आरएनएआई स्क्रीन के सी. एलिगेंस</em

RNA interference is a powerful method to understand gene function, especially when conducted at a whole-genome scale and in a quantitative context. In C. ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

बुनियादी<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em&gt; तरीके तुल्यकालन और निरीक्षण:

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

में प्रोस्टाग्लैंडीन निष्कर्षण और विश्लेषण<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

पोस्ट-transcriptionally विनियमित जीन का रासायनिक Modulators के लिए उच्च throughput स्क्रीनिंग

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory

की खेती<em&gt; Caenorhabditis एलिगेंस</emप्रयोगशाला में तीन आयामों में&gt;

The use of genetic model organisms such as Caenorhabditis elegans has led to seminal discoveries in biology over the last five decades. Most of what we ...

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

Combined Nucleotide and Protein Extractions in Caenorhabditis elegans

कैनोहैबडिटिस एलिगेंस में संयुक्त न्यूक्लियोटाइड और प्रोटीन निष्कर्षण

A single biological sample holds a plethora of information, and it is now common practice to simultaneously investigate several macromolecules to capture ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

अक्षुण्ण केनोहाब्दितिस एलीगेंस में ऑक्सीजन उपभोग दरों का मापन

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...