Name: evaluation of muscle function of the extensor digitorum longus muscle ex vivo and tibialis anterior muscle in situ in mice
Uploaded: 2013-02-09T14:00:00
Duration: 14 min 36 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Studying the Extensor Digitorum Longus Muscle and Tibialis Anterior Muscle in Mice | Protocol at JoVE.com

وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من المعاهد الوطنية للصحة (AR-49419، DD)، رابطة الضمور العضلي (DD)، والمعاهد الوطنية للصحة منح التدريب T90DK70105 (CH).

1. تقييم خصائص سلبية ومقلص من العضلات فيفو السابقين EDL يتم قياس خصائص مقلص والسلبي للعضلات الجسم الحي EDL السابقين باستخدام أورورا العلمية في المختبر نظام اختبار العضلات. الرجوع إلى الجدول رقم 1 للمواد والمعدات. 1،1 معدات إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تجميع حمام الأنسجة الجهاز عن طريق ضمان oxytube إلى الحمام الأنسجة المياه سترة. إرفاق حمام تجميعها لجهاز العضلات في تصاعد مستمر. ربط خط الغاز إلى oxytube. ربط خطوط توزيع المياه إلى الحمام الأنسجة المياه سترة ووضع صمام إبرة في الصرف حمام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على حمام مائي تعميم وضبط درجة الحرارة إلى 30 ° C 7. 5 السماح PSI (جنيه لكل بوصة مربعة) من 95٪ O CO 2 -5٪ 2 إلى تدفق من خلال oxytube. املئي حوض الاستحمام مع العازلة رينغر. تتوازن المخزن المؤقت مدة لا تقل عن10 دقيقة مع تدفق الغاز ثابت عن طريق ضبط صمام oxytube. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على الصكوك (محفز، وضع مزدوج نظام ذراع، واجهة إشارة). تحميل السيطرة على العضلات الحيوي (DMC) والبرمجيات وفقا للتعليمات الشركة الصانعة. </li></ol> تشريح العضلات 1،2 EDL يجب الموافقة على جميع الدراسات على الحيوانات من قبل رعاية الحيوان واللجنة المؤسسية الاستخدام. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس مع حقن داخل الصفاق من 2.5 ميكروليتر / غرام من وزن الجسم من مخدر كوكتيل (يرجى الرجوع إلى قسم المواد). طوال العملية الجراحية، تم فحص عمق التخدير عن طريق إجراء قرصة أخمص قدميه. يتم إدارتها من الملحق A 10٪ من الجرعة الأولي مخدر عند الحاجة للحفاظ على الحيوانات تحت التخدير. حلق أطرافهم هند. الحفاظ على درجة حرارة الجسم الأساسية عند 37 ° C قبل إجراء تشريح عن طريق وضع الماوس على وسادة التدفئة. ويتم رصد درجة حرارة الجسم عن طريق قياس باستمرار temperat المستقيملدى عودتهم باستخدام المسبار الحراري. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع مستلق على لوحة الماوس تشريح (الشكل 1). تقشر الجلد في الساق لفضح العضلات أطرافهم هند. تأمين الساق على الكتلة باستخدام دبابيس خياطة sylgard اثنين، واحد في القدم والآخر في العضلة الناحلة. وضع مصباح الحرارة فوق الماوس الجسم للحفاظ على درجة حرارة الجسم الأساسية عند 37 ° C. superfuse باستمرار جميع عضلات يتعرض مع العازلة رينغر. استنزاف العازلة الزائدة من خلال خط فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فضح TA القاصي ووتر في الرباط الباسطة تحت stereomicroscope من تشريح الجلد نحو القدم. إزالة بلطف اللفافة التي تغطي العضلات TA. قطع في الرباط الباسطة للافراج عن وتر TA البعيدة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع وتر TA القاصي واستخدامها لقشر قبالة العضلات TA. إزالة بعناية TA العضلات في تمسكه القريبة. وضع قطعة رقيقة من القطن غارقة العازلة رينغر بجوار العضلات على امتصاص النزيف EDL الناجمة عن تمزق الأوعية الدموية للعضلات TA. استخدام سطر فراغ لإزالة الزائدة العازلة والدم. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط عقدة مزدوجة على مربع تليها حلقة عقدة باستخدام الخيط الحرير الخبز في العضلات تقاطع وتر (MTJ) من العضلات في مؤسسة كهرباء لبنان البعيدة (الشكل 2). إجراء شق في الجزء الأعلى من عضلة ذات الرأسين الفخذية لفضح العضلات القريبة EDL. تكرار نفس المجموعة من عقدة (الشكل 2) في MTJ من وتر في مؤسسة كهرباء لبنان القريبة. إرفاق هوك ذراع الرافعة إلى الداني إما أو عقدة عقدة مع القاصي مربع المزدوجة باستخدام سطر خياطة نفسه. قطع خط خياطة المتبقية. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قطع وتر القريبة EDL متفوقة على عقدة الخيط القريبة. ترفع عضلة EDL مع هوك وقطع الأوعية الدموية تحت العضلات. قطع وتر البعيدة EDL أدنى من عقدة الخيط البعيدة لإزالة العضلات EDL من الطرف هند. تغطية الطرف يتعرض هند مع قطعة من القطن غارقة العازلة رينغر. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إرفاق هوك إلى ذراع الرافعة. محاذاة عموديا العضلاتبين قطبين. تأمين خط خياطة البعيدة إلى آخر ثابت. يرفع الحمام الأنسجة العضلية لغمر في المخزن المؤقت رينغر. ضبط التوتر يستريح إلى 1،0 ز باستخدام مزدوج المرحلة ترجمة خشن / ناعم والسماح للعضلات للتوازن لا يقل عن 10 دقيقة. </li></ol> 1.3 قياس خصائص مقلص والسلبي من العضلات EDL استخدام الجدول 2 لإعداد المعلمات في البرنامج DMC لكل من القياسات التالية. تحليل البيانات باستخدام تحليل ديناميكية العضلات (DMA) والبرمجيات. 1.3.1 قياس خصائص مقلص للعضلات EDL <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحفيز العضلات EDL ثلاث مرات ب 150 هرتز مع 60 ثانية على حدة لتحقيق الاستقرار في العضلات 8. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تحفيز العضلات في مؤسسة كهرباء لبنان التوترات يستريح مختلفة لتحديد طول الأمثل (لو). طول الأمثل هو طول العضلات التي تطور التوتر القصوى نشل. السماح للعضلة إلىالاسترخاء لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط التوتر يستريح لاتحاد نقابات العمال. قياس قوة العضلات في تحفيز نشل واحدة. تحديد القوة المطلقة نشل (PT)، والوقت إلى التوتر الذروة (TPT) ونصف الساعة الاسترخاء (½ RT) من حزب العمال. يسمح للعضلات بالاسترخاء لمدة 2 دقيقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ضبط التوتر يستريح لاتحاد نقابات العمال. قياس قوة العضلات ولدت تكززي على ترددات مختلفة التحفيز (50، 80، 100، 120، 150 هرتز و200). تحديد الحد الأقصى المطلق قوة العضلات تكززي (بو) حيث قوة العضلات تصل إلى القصوى. قياس TPT و½ RT من بو 9. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يسمح للعضلات بالاسترخاء لمدة 5 دقائق. ضبط التوتر يستريح لاتحاد نقابات العمال. تطبيق 10 دورات من تقلصات غريب الأطوار مع بقية حد أدنى 2 بين الدورات. حساب خسارة القوة النسبية للبو بعد كل دورة من انكماش غريب الأطوار. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> فصل العضلات EDL من أجهزة وقطع الأوتار في موقع خياطة. تحديد وزن العضلات رطبة وحساب مساحة المقطع عبر العضلات (CSA)6،10. </li></ol> 1.3.2 قياس الخصائص السلبية للعضلة EDL <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تشريح العضلات المقابل EDL ونعلق عليه لجهاز كما هو موضح في القسم 1.2، الخطوات من 2 إلى 7. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الموضوع عضلة EDL في بروتوكول ست خطوات التي تمتد توتر العضلات للو 160٪ بزيادة قدرها 10٪ لو. تحليل 6 الملف الإجهاد والانفعال. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تقييم الملكية لزجة من العضلات EDL عن طريق قياس معدل التأكيد على الاسترخاء (SRR) في اطر زمنية تمتد التالية بعد عقد والعضلات في لو 10٪: من الذروة إلى الذروة بعد 0.1s (بي بي)، من 0.1 إلى 0.2s PP، من 0.2 إلى 0.5s بروبلين، بولي بروبلين من 0.5 إلى 1S و1.5s من 1 إلى ص </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> في نهاية الدراسة، الموت ببطء الماوس عن طريق خلع عنق الرحم و / أو قطع الرأس في حين لا يزال الماوس تحت التخدير. فصل العضلات EDL من أجهزة وقطع الأوتار في موقع خياطة. تحديد وزن العضلات رطبة وحساب العضلات عبر SEctional منطقة (CSA) 6، 10. </li></ol> 2. تقييم خصائص مقلص من العضلات في الموقع TA يتم قياس خصائص مقلص للعضلات TA باستخدام العلمية أورورا في الموقع العضلات نظام الاختبار. الرجوع إلى الجدول رقم 1 للمواد والمعدات. 2،1 معدات إعداد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تسخين المرحلة الحيوان الحرارية التي تسيطر عليها إلى 37 ° C باستخدام تعميم الماء الحمام. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بدوره على الصكوك (محفز، وضع مزدوج نظام ذراع، واجهة إشارة). تحميل البرنامج وفقا لتعليمات DMC الشركة المصنعة. </li></ol> 2.2 إعداد العضلات TA لقياس قوة في الموقع <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الماوس، حلق أطرافهم هند وفضح العضلات TA كما هو موضح في الخطوات من 1 إلى 3 في القسم 1.2. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ربط عقدة مزدوجة مربع حول الرضفة الرباط USIنانوغرام الحرير الخبز وخياطة. ربط عقدة مزدوجة مربع تليها عقدة في حلقة من العضلات MTJ TA البعيدة (الشكل 2)، ربط عقدة مزدوجة مربع آخر ترك ~ مم 10 حلقة من عقدة TA وتر البعيدة باستخدام سطر خياطة نفسه. ضع الثانية عقدة مزدوجة مربع على جانب الحلقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة المسامير من طرف هند ووضع الحيوان عرضة. فضح عضلة ذات الرأسين الفخذية. إجراء شق في خط الوسط لكشف العصب الوركي. ربط عقدة مزدوجة مربع حول الطرف القريب من العصب الوركي. تقليم جانب واحد من خطوط خياطة وقطع العصب متفوقة على عقدة. بلطف، وسحب العصب الوركي نحو الركبة باستخدام سطر خياطة ومسح الأنسجة المحيطة الضام لتحرير ~ 5 مم من طوله. لا تشد الأعصاب أثناء هذا الإجراء وsuperfuse باستمرار العصب مع العازلة المسابقة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد العضلات TA المقابل كما هو موضح في الخطوات من 1 إلى 3. تغطية واحدة من أطرافهم هند يتعرض مع قطعة من ري<html> غارقة في nger العازلة القطن. superfuse باستمرار سواء مع الأطراف الخلفية قبل تحسنت (37 ° C) العازلة رينغر. إزالة الزائدة العازلة من خلال خط فراغ. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع الحيوانات المعرضة على منصة الحيوان. المشبك حامل إرفاق الركبة إلى منصة الحيوانية وتأمين ركبتيه إلى مسمار معدني مزدوج مع عقدة مربع باستخدام خياطة الرباط الرضفة خطوط. دبوس كلا القدمين على الكتلة باستخدام دبابيس sylgard خياطة. تأمين منصة الحيوان على خشبة المسرح الحرارية التي تسيطر عليها. وضع مصباح الحرارة للحفاظ على درجة حرارة الجسم الأساسية الحيوان في C. ° 37 </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأمين حامل قطب كهربائي إلى منصة الحيوانية ووضع العصب الوركي على القطب باستخدام سطر خياطة. الحفاظ على القطب بعيدا عن العضلات أطرافهم هند. قطع وتر TA البعيدة من أطرافهم هند المكشوف في موقع خياطة MTJ. إرفاق وتر TA البعيدة حلقة خياطة لربط ذراع الذراع. تغطية تتعرض العضلات أطرافهم هند مع القطن عازلة على قارع الأجراس في الحارة غارقة. </li></ol>&gt; 2،3 قياس خصائص مقلص للعضلات TA <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام الجدول 2 لتعيين المعلمات في البرنامج DMC. اتبع نفس البروتوكول وصفها في القسم 1.3.1 لتحديد خصائص مقلص للعضلات TA. تحليل البيانات باستخدام برنامج DMA. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد قياس الممتلكات مقلص، فصل وتر TA البعيدة حلقة خياطة من المقياس ربط الذراع. إزالة العضلات TA. تحديد وزن العضلات رطبة وحساب CSA 10. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> قياس الخصائص مقلص للعضلات TA المقابل وفقا لخطوات 1-3 المذكورة أعلاه. الموت ببطء الماوس فقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية في نهاية الدراسة. </li></ol>

<ol>
	<li>Huijing, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+as+a+collagen+fiber+reinforced+composite:+a+review+of+force+transmission+in+muscle+and+whole+limb.">Muscle as a collagen fiber reinforced composite: a review of force transmission in muscle and whole limb.</a> J. Biomech. 32, 329-345 (1999).</li><li>Moss, R. L., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elastic+and+viscous+properties+of+resting+frog+skeletal+muscle.">Elastic and viscous properties of resting frog skeletal muscle.</a> Biophys. J. 17, 213-228 (1977).</li><li>Hoffman, E. P., Brown, R. H., Kunkel, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin:+the+protein+product+of+the+Duchenne+muscular+dystrophy+locus.">Dystrophin: the protein product of the Duchenne muscular dystrophy locus.</a> Cell. 51, 919-928 (1987).</li><li>Petrof, B. J., Shrager, J. B., Stedman, H. H., Kelly, A. M., Sweeney, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dystrophin+protects+the+sarcolemma+from+stresses+developed+during+muscle+contraction.">Dystrophin protects the sarcolemma from stresses developed during muscle contraction.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 3710-3714 (1993).</li><li>Pastoret, C., Sebille, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mdx+mice+show+progressive+weakness+and+muscle+deterioration+with+age.">mdx mice show progressive weakness and muscle deterioration with age.</a> J. Neurol. Sci. 129, 97-105 (1995).</li><li>Hakim, C. H., Grange, R. W., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+passive+mechanical+properties+of+the+extensor+digitorum+longus+muscle+are+compromised+in+2-+to+20-mo-old+mdx+mice.">The passive mechanical properties of the extensor digitorum longus muscle are compromised in 2- to 20-mo-old mdx mice.</a> J. Appl. Physiol. 110, 1656-1663 (2011).</li><li>Segal, S. S., Faulkner, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temperature-dependent+physiological+stability+of+rat+skeletal+muscle+in+vitro.">Temperature-dependent physiological stability of rat skeletal muscle in vitro.</a> Am. J. Physiol. 248, 265-270 (1985).</li><li>Grange, R. W., Gainer, T. G., Marschner, K. M., Talmadge, R. J., Stull, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast-twitch+skeletal+muscles+of+dystrophic+mouse+pups+are+resistant+to+injury+from+acute+mechanical+stress.">Fast-twitch skeletal muscles of dystrophic mouse pups are resistant to injury from acute mechanical stress.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. 283, 1090-1101 (2002).</li><li>Hakim, C. H., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender+differences+in+contractile+and+passive+properties+of+mdx+extensor+digitorum+longus+muscle.">Gender differences in contractile and passive properties of mdx extensor digitorum longus muscle.</a> Muscle Nerve. 45, 250-256 (2012).</li><li>Hakim, C. H., Li, D., Duan, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+murine+skeletal+muscle+function+for+muscle+gene+therapy.">Monitoring murine skeletal muscle function for muscle gene therapy.</a> Methods Mol. Biol. 709, 75-89 (2011).</li></ol>

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

في هذا البروتوكول، وقد بينت لنا المقايسات الفسيولوجية لقياس خصائص مقلص والسلبي في عضلة EDL وخصائص مقلص للعضلات TA. ومصدر القلق الرئيسي في علم وظائف الأعضاء الدراسات العضلات هو الأوكسجين في العضلات المستهدفة. للعضلات الكبيرة (مثل العضلات TA)، ويفضل في نهج الموقع لنشر الأكسجين من المخزن المؤقت رينغر قد لا تصل إلى وسط العضلات في في فحص المختبر. في نهج الموقع لا يزعج العادية إمدادات الدم ونقص الأكسجة المرتبطة بها، يتم تجنب الآثار الاصطناعية. العضلة EDL هي واحدة من العضلات الأكثر استخداما في دراسة علم وظائف الأعضاء. ويمكن تحقيق الأوكسجين الكافي لكامل العضلة في المختبر في نظام بسبب صغر حجم العضلات. علاوة على ذلك، في نظام المختبر يوفر بيئة مغلقة لمعالجة تركيزات الأيونات (كا 2 +، + نا وK +) وكيماويةتراخيص وصول العملاء (ATP والجلوكوز) والتي هي ضرورية لتوليد قوة العضلات الأمثل. هذا يوفر فرصة كبيرة لدراسة تأثير هذه المتغيرات على إنتاج قوة. قياس دقيق لخصائص مقلص والسلبي للعضلات الأطراف أمر بالغ الأهمية لدراسة الهيكل العظمي وظيفة العضلات. غالبا ما تعتبر التغيرات المميزة لهذه الخصائص والسمات المميزة لأمراض العضلات المختلفة. التغييرات في هذه المعايير هي أيضا مؤشرات هامة لتحديد ما إذا كان العلاج التجريبي فعالة أم لا.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> مادة </td><td> الصانع </td><td></td><td> مواصفات والتعليقات </td></tr><tr><td> الأنسجة الجهاز حمام </td><td> Radnoti LLC، CA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td> المياه سترة حمام الأنسجة (القط # 158351-LL)، أكسجين أنبوب المفرق (القط # 160192)، صمام الأنبوب (القط # 120722) </td></tr><tr><td> تعميم حمام مائي </td><td> فيشر العلمية، التايم، MA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td></td></tr><tr><td> مزيج الغاز </td><td> Airgas الوطنية، شارلوت، NC، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td> 95٪ O 2 و 5٪ CO 2 </td></tr><tr><td> في المختبر فحص وظيفة عضلات الجهاز </td><td> أورورا العلمية، أورورا، ON، كندا </td><td></td><td> ويتكون النظام من ومشجعا (نموذج # 701A)، ونظام ذراع وضع مزدوج (نموذج # 300C 305C أو)، واجهة إشارة (نموذج # 604B) واختبار APparatus (نموذج # 800A) لتركيب الجهاز عموديا الأنسجة حمام </td></tr><tr><td> في المختبر فحص وظيفة عضلات البرمجيات </td><td></td><td></td><td> ديناميكية العضلات التحكم (DMC) والبرمجيات وتحليل ديناميكية العضلات بيانات التحكم (DMA) والبرمجيات </td></tr><tr><td> كوكتيل الماوس التخدير مختلطة في كلوريد الصوديوم 0.9٪ </td><td> الرجوع إلى المبادئ التوجيهية المؤسسية </td><td></td><td> الكيتامين (25 ملغ / مل)، زيلازين (2.5 ملغ / مل) وآسيبرومازين (0.5 ملغ / مل). طوال العملية الجراحية، قد تكون هناك حاجة لتكملة 10٪ من الجرعة الأولي للحفاظ على الحيوانات تحت التخدير. </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> العالم آلات دقيقة </td><td> القط # SYLG184 </td><td></td></tr><tr><td> A تشريح زجاجي حسب الطلب وحة </td><td> في منزل تصميم </td><td></td><td> الرجوع إلى الشكل 1 </td></tr><tr><td> مصباح التدفئة </td><td> الموترة إضاءة شركة،بوسطن، MA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td> 15 مصباح واط للحفاظ على الحارة الماوس أثناء تشريح </td></tr><tr><td> رينغر العازلة </td><td> ويتم شراء المواد الكيميائية من العلم فيشر، التايم، MA، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td> تكوين في ملي: 1.2 ناه 2 PO 4 (القط # S369)، 1 MgSO 4 (القط # M63)، 4،83 بوكل (القط # P217) و 137 كلوريد الصوديوم (القط # 217)، 24 NaHCO 3 (القط # S233)، 2 CaCl 2 (القط # C79) و 10 الجلوكوز (القط # D16). حل فردي المواد الكيميائية وخلط في ترتيب المذكورة أعلاه. تخزين في C. ° 4 </td></tr><tr><td> ستيريو المجهر تشريح </td><td> نيكون، ميلفيل، NY، USA </td><td></td><td></td></tr><tr><td> تشريح الأدوات </td><td> أدوات العلوم الجميلة، فوستر سيتي، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td></td><td> الخشنة ملقط، مقص الخشنة، ملقط غرامة (مستقيم و 45 ° زاوية) </td></tr><tr><td> مضفر خياطة الحرير 4-0 # </td><td> SofSilk الأمني ​​الأمريكي سوتوريس، نورواك، CT، الولايات المتحدة الأمريكية </td><td> القط # SP116 </td><td></td></tr><tr><td> A الفولاذ المقاوم للصدأ حسب الطلب هوك </td><td> أجزاء صغيرة، وشركة </td><td></td><td> 2&#39;&#39; طويل S / S 304V (0.18&#39;&#39; قطر) لمحول القوة أو 305C 2.5 بوصة طويلة S / S 304V (0.012&#39;&#39; قطر) لمحول 300C (القط # ASTM A313) </td></tr><tr><td> في الموقع العضلات وظيفة نظام مقايسة </td><td> أورورا العلمية، أورورا، ON، كندا </td><td></td><td> نظام (809B، في أجهزة الماوس الموقع) تتكون من محفز (نموذج # 701B)، ونظام ذراع وضع مزدوج (نموذج # 305C)، واجهة إشارة (نموذج # 604A) وجهاز الصفيحة القدمية الحرارية للرقابة (نموذج # 809A ) </td></tr><tr><td> في المختبر فحص وظيفة عضلات البرمجيات </td><td> أورورا العلمية، أورورا، ON، كندا </td><td></td><td> ديناميكية العضلات التحكم (DMC) والبرمجيات وتحليل ديناميكية العضلات بيانات التحكم (DMA) والبرمجيات </td></tr><tr><td> A TA الفحص حسب الطلب الحيوان منصة </td><td> في منزل تصميم </td><td></td><td> الرجوع إلى الشكل 2 </td></tr><tr><td> A الفولاذ المقاوم للصدأ حسب الطلب هوك </td><td> أجزاء صغيرة، وشركة </td><td> القط # ASTM A313 </td><td> 0،5&#39;&#39; طويلة S / S 304V (0.18&#39;&#39; قطر) </td></tr><tr><td> حسب الطلب أقطاب البلاتين 25G </td><td> Chalgren الشركات، غيلروي، CA </td><td></td><td> هما جندي 0،016 أسلاك البلاتين&#39;&#39; أسلاك سميكة ل24G 2 الكهربائية </td></tr></tbody></table> الجدول 1. المواد والمعدات.

evaluation of muscle function of the extensor digitorum longus muscle ex vivo and tibialis anterior muscle in situ in mice

وتقدم أساسا حركات الجسم حسب الوظيفة الميكانيكية للعضلات الهيكل العظمي. ويتكون الهيكل العظمي والعضلات من حزم العديد من myofibers التي مغمد من الأنسجة الضامة العضلي. كل ليف عضلي يحتوي على العديد من اللييفات العضلية التي تعمل على طول طولي من ليف عضلي. اللييفات العضلية هي جهاز مقلص من العضلات وأنها تتألف من وحدات متكررة تعرف باسم مقلص sarcomeres. وحدة قسيم عضلي يحتوي على خيوط الأكتين والميوسين التي كتبها متباعدة الأقراص Z والبروتين titin. يتم تعريف وظيفة العضلات الهيكلية الميكانيكية من خصائص مقلص والسلبي من العضلات. وتستخدم خصائص مقلص لوصف مقدار القوة المتولدة خلال تقلص العضلات، والوقت من جيل القوة والوقت للاسترخاء العضلات. أي عامل يؤثر على تقلص العضلات (مثل التفاعل بين الأكتين وخيوط الميوسين، التوازن من الكالسيوم، ATP / ADP النسبة، الخ.) يؤثر على prope مقلصrties. خصائص سلبية تشير إلى خصائص المرونة واللزوجة (تصلب واللزوجة) من العضلات في غياب الانكماش. ويتم تحديد هذه الخصائص من خارج الخلية والمكونات الهيكلية داخل الخلايا (مثل titin) والأنسجة الضامة (الكولاجين بشكل رئيسي) 1-2. خصائص مقلص والسلبي جانبان لا ينفصلان من وظيفة العضلات. على سبيل المثال، يتم إنجاز انثناء الكوع من انكماش العضلات في المقصورة الأمامية من الذراع والسلبية وتمتد من العضلات في المقصورة الخلفية للذراع العلوي. لفهم حقا وظيفة العضلات، ينبغي دراسة كل الخصائص مقلص والسلبي. وغالبا ما يثير الشبهة خصائص مقلص و / أو السلبي الميكانيكية للعضلة في أمراض العضلات. وخير مثال هو ضمور العضلات دوشين (DMD)، والعضلات الهزال الشديد المرض الناجم عن نقص dystrophin 3. Dystrophin هو المتواجد هيكل الخليةفي هذا استقرار غشاء الخلية العضلية (غمد الليف العضلي) خلال 4 تقلص العضلات. في غياب dystrophin، تلف غمد الليف العضلي بسبب قوة القص ولدت أثناء الإرسال القوة. تمزق هذا الغشاء يبدأ سلسلة من ردود الفعل التي تؤدي إلى موت الخلايا العضلية وفقدان آلات مقلص. ونتيجة لذلك، يتم تقليل قوة العضلات ويتم استبدال الأنسجة myofibers برصاص تليفي 5. هذا التغيير في وقت لاحق يزيد تصلب العضلات 6. القياس الدقيق لهذه التغيرات توفر مرشدا هاما لتقييم تطور المرض وتحديد الفعالية العلاجية من الجينات رواية / خلية / التدخلات الدوائية. هنا، نقدم طريقتين لتقييم خصائص كل مقلص والسلبية الميكانيكية للأصابع الطويلة الباسطة (EDL) العضلات وخصائص مقلص من العضلات الظنبوبي (TA) الأمامي.

النتائج التالية هي تمثيل من تقاريرنا السابقة 6،9. يتم عرض البيانات كما يعني ± الخطأ القياسي من الوسط. ويبين الجدول 3 خصائص المظهرية من العضلات في مؤسسة كهرباء لبنان BL10 العادية والتي تعاني من نقص dystrophin (MDX) في الفئران 4 إلى 6 أشهر من العمر. ويبين الشكل 4 ممثل خصائص مقلص والسلبي لل EDL العضلات من BL10 وMDX الفئران. ويرد وصف خصائص مقلص للعضلات من قبل مؤسسة كهرباء لبنان على النحو التالي بما في ذلك (القوة المطلقة مقسوما على CSA) محددة قوة نشل (الشكل 4A)، محددة القوة القصوى تكززي (الشكل 4B)، TPT و½ RT القوة المطلقة القصوى تكززي (الشكل 4C وD). ويمكن للTPT ½ RT أيضا حساب من القوة المطلقة نشل. الملف الشخصى الإجهاد والانفعال (4E الشكل) وSRR (4F الشكل) علىإعادة استخدامها لوصف خصائص السلبي للعضلات EDL. غياب dystrophin له تأثير كبير على خصائص مقلص والسلبي للعضلات EDL 6،9. تتضاءل إلى حد كبير نشل محددة وقوات تكززي في العضلات EDL MDX. وTPT هو أسرع بكثير في حين أن RT ½ أبطأ بشكل ملحوظ في العضلات EDL MDX. الملف الشخصى الإجهاد والانفعال يوحي أن يتم زيادة كبيرة تصلب في العضلات EDL MDX. العضلة EDL MDX ينتج أيضا قوة المقاومة بشكل كبير أعلى بكثير (الإجهاد السلبي) قبل الوصول إلى ذروة التوتر، في حين أن الضغوط ما بعد الذروة تنخفض أسرع بكثير. علاوة على ذلك، كان أعلى بكثير SRR في العضلات EDL MDX مقارنة بما كان عليه في العضلات EDL BL10. التحليل الإحصائي ويتم تحليل دلالة إحصائية بين مجموعتين من الطلاب اختبار t. لياليويوصى أهمية tatistical بين مجموعات متعددة، في اتجاه واحد أو اتجاهين تحليل ANOVA تليها تحليل Bonferroni مخصصة آخر باستخدام برنامج SAS (SAS معهد شركة، كاري، NC). ويعتبر فارقا كبيرا عندما p &lt;0.05. الجدول 1. المواد والمعدات. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td class="jove_content_small"> تجربة </td><td class="jove_content_small"> يستريح التوتر (غرام) </td><td class="jove_content_small"> نبض التردد (هرتز) </td><td class="jove_content_small"> نبض العرض (MS) </td><td class="jove_content_small"> مدة التحفيز (MS) </td><td class="jove_content_small"> تمتد طول </td><td class="jove_content_small"> تمتد مدة (MS) </td><td class="jove_content_small"> تمتد معدل </td><td class="jove_content_small"> تعليقات </td></tr><tr><td colspan="9"> 1. تقييم خصائص مقلص والسلبي من الجسم الحي العضلات السابقين EDL </td></tr><tr><td colspan="9"> 1.3.1 قياس خصائص مقلص للعضلات EDL </td></tr><tr><td> 1. تسخن </td><td> 1.0 </td><td> 150 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> ضع العضلات لمدة 60 ثانية بين كل الحوافز. هذه الانقباضات الأولية تكززي استقرار العضلات لقياسات لاحقة. </td></tr><tr><td> 2. الأمثل طول العضلات (لو) </td><td> 0.5، 1.0، 1.5 و 2.0 </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> يسمح للعضلات بالاسترخاء لمدة 30 ثانية بين كل الحوافز. قياس طول العضلات الأمثل باستخدام الفرجار الرقمية. </td></tr><tr><td> 3. واحد التويTCH القوة (PT) </td><td> ضبط التوتر يستريح إلى LO </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> 4. كزازي العضلات القوة </td><td> ضبط التوتر يستريح إلى LO </td><td> 50، 80، 100، 120، 150 و 200 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> يسمح للعضلات بالاسترخاء لمدة 1 دقيقة بين كل الحوافز. تحديد وتيرة القصوى التي تولد قوة مطلقة تكززي (بو). </td></tr><tr><td> 5. غريب الأطوار الانكماش </td><td> ضبط التوتر يستريح إلى LO </td><td> استخدام التردد الذي يولد قوة تكززي الأقصى (بو) </td><td> 0.2 </td><td> 700 </td><td> 10٪ لو </td><td> مشاركة 200 مللي ثانية من مدة التحفيز </td><td> 0،5 لو / ثانية </td><td> تكرار انكماش غريب الأطوار لمدة 10 دورات مع بقية حد أدنى 2 بين الدورات. </td></tr><tr><td> 6. CSA من العضلات EDL </TD&gt; <td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> CSA = (كتلة العضلات (ز) / [1.06 غ / سم 3 × (لو X 0.44)]. 1،06 جم / سم 3 هو كثافة العضلات و 0.44 هو طول الألياف العضلية EDL للو النسبة. </td></tr><tr><td colspan="9"> 1.3.2 قياس الخصائص السلبية للعضلة EDL </td></tr><tr><td> 1. ست خطوات تمتد البروتوكول </td><td> ضبط التوتر يستريح إلى LO </td><td></td><td></td><td></td><td> 10٪ لو </td><td></td><td> 2 سم / ثانية </td><td> تكرار بروتوكول تمتد بزيادة قدرها 10٪ حتى لو تم التوصل 160٪ لو. Alow 1.5 ثانية تمتد بين دورات. </td></tr><tr><td> 2. SRR </td><td> ضبط التوتر يستريح إلى LO </td><td></td><td></td><td></td><td> 10٪ لو </td><td></td><td> 2 سم / ثانية </td><td> ويحسب بقسمة SSR الفرق في الضغط مع رIME المنقضي بين نقطتين زمنيتين في إطار زمني. </td></tr><tr><td colspan="9"> 2.3 قياس خصائص مقلص للعضلات TA </td></tr><tr><td> 1. تسخن </td><td> 4.0 </td><td> 150 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> ضع العضلات لمدة 60 ثانية بين كل الحوافز. </td></tr><tr><td> 2. الأمثل طول العضلات (لو) </td><td> 3.0، 4.0، 5.0، 6.0 و 7.0 </td><td> 1 </td><td> 0.2 </td><td> 300 </td><td></td><td></td><td></td><td> يسمح للعضلات بالاسترخاء لمدة 30 ثانية بين كل الحوافز. قياس طول العضلات الأمثل باستخدام الفرجار الرقمية. </td></tr><tr><td> 3. CSA من العضلات TA </td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td> CSA = (كتلة العضلات (ز) / [1.06 غ / سم 3 × (لو X 0.6)]. 0،6 هو طول الألياف العضلية TA لرا لوتيو. </td></tr></tbody></table> الجدول 2. معلمات لتقييم الخواص الميكانيكية للعضلات وEDL TA. <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> توتر </td><td> العمر (شهر) </td><td> وزن الجسم (ز) </td><td> EDL الوزن (ملغ) </td><td> لو EDL (مم) </td><td> EDL CSA (مم 2) </td></tr><tr><td> BL10 </td><td> 6 </td><td> 32،03 ± 0،57 </td><td> 13،90 ± 0،77 </td><td> 14،09 ± 0.04 </td><td> 2.12 ± 0.12 </td></tr><tr><td> MDX </td><td> 6 </td><td> 35،44 ± 0،42 * </td><td> 16،73 ± 0،42 * </td><td> 13،93 ± 0.05 * </td><td> 2.57 ± 0.07 * </td></tr></tbody></table> الجدول 3. خصائص المظهرية للعضلة EDL. *، القيمة في MDالفئران X يختلف كثيرا عن أن من هم في سن المتطابقة BL10 الفئران. <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig1.jpg" alt="الشكل 1" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig1highres.jpg" fo:content-width="5.5in"/> الشكل 1. رسم تخطيطي للمجلس الماوس تشريح حسب الطلب. ويتكون المجلس من زجاج شبكي تشريح ½ بوصة سميكة وكانت ملفقة في متجر المؤسسية. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/50183/50183fig1large.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية</a> . <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig2.jpg" alt="الشكل 2" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig2highres.jpg" fo:content-width="4in"/> /&gt; الشكل 2. هذه سلسلة من الصور الرقمية التي تبين الخطوات من ربط عقدة مزدوجة مربع تليها عقدة حلقة في MTJ. النجمة، في<html> EDL العضلات؛ السهم، في وتر العضلات القاصية من مؤسسة كهرباء لبنان. <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig3.jpg" alt="الشكل 3" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig3highres.jpg" fo:content-width="6in"/> /&gt; الشكل 3. تم تصميم رسم تخطيطي لمنصة مصنوعة خصيصا لفي الموقع TA العضلات فحص وظيفة. منصة الحيوان وزجاج شبكي الركبة الصلب غير القابل للصدأ حامل لتحميل على جهاز الماوس 809B في الموقع. *، الفولاذ المقاوم للصدأ قضيب (القط # MPR-2.0 ، Siskiyou، المنح باس، OR)؛ #، حامل قطب كهربائي العالمي (القط # MXB، Siskiyou، المنح باس، OR)؛ §، قضيب القطب المرفقات (القط # MPR-3.0، Siskiyou، المنح باس، OR)؛ **، Sylgard كتلة. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/50183/50183fig3large.jpg" target="_blank">اضغط هنا لمشاهدتها بشكل اكبر شخصية</a> . GE = &quot;دائما&quot;&gt; <img src="/files/ftp_upload/50183/50183fig4.jpg" alt="الشكل 4" fo:src="/files/ftp_upload/50183/50183fig4highres.jpg" fo:content-width="4in"/> /&gt; الشكل 4. ممثل النتائج للخصائص مقلص والسلبي من العضلات EDL. خصائص مقلص للعضلات EDL تتميز القوة نشل محددة (A)، وقوة تكززي محددة (B)، ووقت لذروة التوتر (C) والوقت الاسترخاء نصف (D). يتم تقييم خصائص السلبي للعضلات EDL من الإجهاد الشخصي سلالة (E) وSSR لل. * والفئران MDX تختلف اختلافا كبيرا من العمر المتطابقة BL10 الفئران.

Watch this Scientific Journal Video about Studying the Extensor Digitorum Longus Muscle and Tibialis Anterior Muscle in Mice | Protocol at JoVE.com

Studying the Extensor Digitorum Longus Muscle and Tibialis Anterior Muscle in Mice | Protocol (Video) | JoVE

التغييرات في خصائص الطرف العضلات مقلص الميكانيكية والسلبية هي المؤشرات الحيوية الهامة لأمراض العضلات. يصف هذا المخطوط المقايسات الفسيولوجية لقياس هذه الخصائص في الطويلة الباسطة لأصابع الفئران والعضلات الأمامية الظنبوبي.

تقييم وظيفة عضلة من العضلات الباسطة لأصابع الطويلة<em&gt; خارج الجسم</em&gt; العضلات الظنبوبي الأمامي و<em&gt; في الموقع</em&gt; في الفئران

Body  movements are mainly provided by mechanical function of skeletal muscle. Skeletal  muscle is composed of numerous bundles of myofibers that are ...

Research

JoVE Journal

Biology

Evaluation of Muscle Function of the Extensor Digitorum Longus Muscle Ex vivo and Tibialis Anterior Muscle In situ in Mice

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy

In vivo Micro-circulation Measurement in Skeletal Muscle by Intra-vital Microscopy Video (Video) | JoVE

في القياس الصغير تداول المجراة في الهيكل العظمي والعضلات التي البينية الحيوية الميكروسكوب

BACKGROUND: Regulatory factors and detailed physiology of in vivo microcirculation have remained not fully clarified after many different modalities of ...

Procedures for Rat in situ Skeletal Muscle Contractile Properties

Procedures for Rat in situ Skeletal Muscle Contractile Properties Video (Video) | JoVE

إجراءات الجرذ<em&gt; في الموقع</em&gt; خصائص العضلات الهيكلية مقلص

There are many circumstances where it is desirable to obtain the contractile response of skeletal muscle under physiological circumstances: normal ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles Video (Video) | JoVE

فيفو السابقين تقييم من تعب، وانقباض في عضلات الهيكل العظمي تناوب متفرقة

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers Video (Video) | JoVE

تقييم الكالسيوم سباركس السليمة في ألياف العضلات الهيكلية

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Generation of Myospheres From hESCs by Epigenetic Reprogramming

Generation of Myospheres From hESCs by Epigenetic Reprogramming Video (Video) | JoVE

جيل من Myospheres من hESCs بواسطة إعادة برمجة جينية

Generation of a homogeneous and abundant population of skeletal muscle cells from human embryonic stem cells (hESCs) is a requirement for cell-based ...

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method

Detection and Analysis of DNA Damage in Mouse Skeletal Muscle In Situ Using the TUNEL Method Video (Video) | JoVE

كشف وتحليل الحمض النووي من التلف في العضلات الهيكلية ماوس<em&gt; في الموقع</em&gt; استخدام أسلوب TUNEL

Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) deoxyuridine triphosphate (dUTP) nick end labeling (TUNEL) is the method of using the TdT enzyme to covalently ...

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function

Murine Aortic Crush Injury: An Efficient In Vivo Model of Smooth Muscle Cell Proliferation and Endothelial Function Video (Video) | JoVE

الفئران الأرواح سحق إصابة: كفاءة<em&gt; في فيفو</em&gt; نموذج من انتشار الخلايا العضلية السلس والوظيفة البطانية

Arterial reconstruction, whether angioplasty or bypass surgery, involves iatrogenic trauma causing endothelial disruption and vascular smooth muscle cell ...

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry

A Rapid Automated Protocol for Muscle Fiber Population Analysis in Rat Muscle Cross Sections Using Myosin Heavy Chain Immunohistochemistry Video (Video) | JoVE

بروتوكول الآلي السريع لالعضلات تحليل الألياف السكان في الجرذ العضلات المقاطع العرضية عن طريق سلسلة الميوسين الثقيلة المناعية

Quantification of muscle fiber populations provides a deeper insight into the effects of disease, trauma, and various other influences on skeletal muscle ...

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells

In Situ Immunofluorescent Staining of Autophagy in Muscle Stem Cells Video (Video) | JoVE

في الموقع تلطيخ إمونوفلورزنت من البلعمة الذاتية في الخلايا الجذعية العضلات

Increasing evidence points to autophagy as a crucial regulatory process to preserve tissue homeostasis. It is known that autophagy is involved in skeletal ...

Isolation of Human Ventricular Cardiomyocytes from Vibratome-Cut Myocardial Slices

Isolation of Human Ventricular Cardiomyocytes from Vibratome-Cut Myocardial Slices Video (Video) | JoVE

عزل القلب البطيني البشري من شرائح عضلة القلب المقطّع بالهزاز

The isolation of ventricular cardiac myocytes from animal and human hearts is a fundamental method in cardiac research. Animal cardiomyocytes are commonly ...