Name: neonatal subventricular zone electroporation
Uploaded: 2013-02-11T13:00:00
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Ce travail a été soutenu par des subventions du ministère de la Défense (prix de développement d&#39;idées, W81XWH-10-1-0041, AB), CT cellules souches subvention (AB), et un Institut national de la santé NRSA 10668225 (DMF). Le matériel actuel est basé sur le travail soutenu en partie par l&#39;État du Connecticut Connecticut sous la tige subventions Cellulaire Programme de recherche. Son contenu relève de la seule responsabilité des auteurs et ne reflètent pas nécessairement les vues officielles de l&#39;État du Connecticut, le ministère de la Santé publique de l&#39;État du Connecticut ou CT Innovations, Inc Les bailleurs de fonds n&#39;ont joué aucun rôle dans la conception de l&#39;étude, la collecte de données et l&#39;analyse, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit.

Cette procédure est conforme aux exigences du IACUC Yale. Les scientifiques devraient veiller à ce que les lignes directrices du IACUC sont approuvés et suivis en fonction de leurs exigences institutionnelles. 1. Section 1. Préparation de pipettes ADN, Solutions et verre <ol><li> Générer une grande pureté (DO 260/280&gt; 1,80) forte concentration (ug / ul&gt; 2,5) sans endotoxine ADN. </li><li> Préparer 0,9% de solution saline stérile et le filtre à travers un filtre 22 um. </li>...

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	<li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells.">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).</li><li>Imayoshi, I., Sakamoto, M., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+methods+to+identify+and+manipulate+newly+born+neurons+in+the+adult+brain.">Genetic methods to identify and manipulate newly born neurons in the adult brain.</a> Frontiers in Neuroscience. 5, 64 (2011).</li><li>LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+and+improved+tools+for+in+utero+electroporation+studies+of+developing+cerebral+cortex.">New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex.</a> Cereb Cortex. 19, i120-i125 (2009).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103, 865-872 (2001).</li><li>Boutin, C., Diestel, S., Desoeuvre, A., Tiveron, M. C., Cremer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+vivo+electroporation+of+the+postnatal+rodent+forebrain.">Efficient in vivo electroporation of the postnatal rodent forebrain.</a> PloS ONE. 3, e1883 (2008).</li><li>Chesler, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+gene+expression+by+postnatal+electroporation+during+olfactory+interneuron+nurogenesis.">Selective gene expression by postnatal electroporation during olfactory interneuron nurogenesis.</a> PloS ONE. 3, e1517 (2008).</li><li>Platel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterogeneity+of+adult+neural+stem+cells+and+the+emerging+complexity+of+their+niche.">The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche.</a> Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 73, 357-365 (2008).</li><li>Fernandez, M. E., Croce, S., Boutin, C., Cremer, H., Raineteau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+electroporation+of+defined+lateral+ventricular+walls:+a+novel+and+rapid+method+to+study+fate+specification+during+postnatal+forebrain+neurogenesis.">Targeted electroporation of defined lateral ventricular walls: a novel and rapid method to study fate specification during postnatal forebrain neurogenesis.</a> Neural Development. 6, 13 (2011).</li><li>de Chevigny, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-7a+regulation+of+Pax6+controls+spatial+origin+of+forebrain+dopaminergic+neurons.">miR-7a regulation of Pax6 controls spatial origin of forebrain dopaminergic neurons.</a> Nature Neuroscience. 15, 1120-1126 (2012).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Frontiers in Neuroscience. 4, (2010).</li><li>Feliciano, D. M., Quon, J. L., Su, T., Taylor, M. M., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+neurogenesis+generates+heterotopias,+olfactory+micronodules+and+cortical+infiltration+following+single-cell+Tsc1+deletion.">Postnatal neurogenesis generates heterotopias, olfactory micronodules and cortical infiltration following single-cell Tsc1 deletion.</a> Human Molecular Genetics. 21, 799-810 (2012).</li><li>Iguchi, T., Yagi, H., Wang, C. C., Sato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tightly+controlled+conditional+knockdown+system+using+the+Tol2+transposon-mediated+technique.">A tightly controlled conditional knockdown system using the Tol2 transposon-mediated technique.</a> PloS ONE. 7, e33380 (2012).</li></ol>

Ici, nous détaillons la technique de la SVZ électroporation néonatale, une technique permettant de rapidement et vigoureusement étiqueter et de manipuler les cellules souches SVZ et de leur progéniture. Il ya plusieurs avantages que l&#39;électroporation a par rapport à d&#39;autres techniques. Premièrement, étant donné l&#39;étiquetage focale des cellules, on est capable de discerner des cellules autonomes et non-autonomes cellule effets. Deuxièmement, la manipulation génétique en utilisant des systèmes ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> Tube lourd poli borosilicaté </td><td> Instrument Sutter </td><td> BF150-110-10 </td><td></td></tr><tr><td> À deux phases côtés verre Micropipette Puller </td><td> Narishige </td><td> PC-10H </td><td></td></tr><tr><td> Fast Green </td><td> Fischer Scientific </td><td> 0521192205 </td><td></td></tr><tr><td> ECM 830 Square Wave Générateur d&#39;impulsions </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 45-0052 </td><td></td></tr><tr><td> Tweezertrodes </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 45-0488 </td><td></td></tr><tr><td> Source de lumière à fibre optique </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-562-36 </td><td></td></tr><tr><td> Halogène Tungstènelampe </td><td> USHIO America, Inc </td><td> 1002247 </td><td></td></tr><tr><td> Picospritzer II </td><td> Parker Instruments </td><td> 052-0312-900 </td><td></td></tr></tbody></table>

neonatal subventricular zone electroporation

Les cellules souches neurales (NSC) en ligne les ventricules latéraux et postnatales donner lieu à plusieurs types de cellules qui comprennent les neurones, les astrocytes et les cellules épendymaires 1. Comprendre les mécanismes moléculaires responsables de la NSC auto-renouvellement, l&#39;engagement et la différenciation est essentielle pour exploiter leur potentiel unique pour réparer le cerveau et de mieux comprendre les troubles du système nerveux. Les méthodes précédentes pour la manipulation des systèmes de mammifères nécessaire l&#39;effort long et coûteux du génie génétique au niveau de l&#39;animal entier 2. Ainsi, la grande majorité des études ont exploré les fonctions des molécules NSC in vitro ou chez les invertébrés. Ici, nous démontrons la technique simple et rapide à manipuler PNJ néonatales qui est désigné comme zone sous-ventriculaire néonatal (SVZ) électroporation. Des techniques similaires ont été mis au point il ya une décennie à étudier NSCs embryonnaires et ont aidé des études sur cortical le développement 3,4. Plus récemment, elle a été appliquée pour étudier le cerveau antérieur des rongeurs postnatale 5-7. Cette technique conduit à l&#39;étiquetage robuste de SVZ NSC et de leur progéniture. Ainsi, après la naissance SVZ électroporation offre un coût de remplacement et du temps efficace pour NSC ingénierie génétique chez les mammifères.

Néonatales ventriculaire résultats d&#39;électroporation de zone dans l&#39;étiquetage de la quasi-totalité glie radiale contiguë à la dorsale, zone sous-ventriculaire latéral dorsal, latéral et à la suite de la &quot;balayage&quot; déplacement de l&#39;électrode pince (figure 1E). Cependant, l&#39;électroporation peut être adapté à l&#39;exigence de l&#39;expérience respective, mais pas balayer l&#39;électrode et l&#39;utilisation de l&#39;emplacement spécifique et l&#39;orientation ...

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Neonatal Subventricular Zone Electroporation

Nous démontrons une technique peu invasive appelée électroporation zone sous-ventriculaire néonatal. La technique consiste à injecter de l&#39;ADN plasmidique dans les ventricules latéraux de chiots nouveau-nés et application d&#39;un courant électrique à fournir et manipuler génétiquement des cellules souches neurales

Néonatale électroporation zone sous-ventriculaire

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

La zone sous-ventriculaire Fr-face: Coloration Wholemount et Flow épendymaire

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

Recherche

Neurosciences

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

En électroporation in vivo de la rétine de souris en développement

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Souris dans Utero électroporation: contrôlé Transefection Gene spatio-temporelle

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Préparation des tranches aiguës zone sous-ventriculaire pour l&#39;imagerie calcique

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Neonatal Pial Surface Electroporation

Néonatale Pial électroporation de surface

Over the past several years the pial surface has been identified as a germinal niche of importance during embryonic, perinatal and adult neuro- and ...

Subtype-selective Electroporation of Cortical Interneurons

Sous-sélective électroporation corticaux Interneurones

The study of central nervous system (CNS) maturation relies on genetic targeting of neuronal populations. However, the task of restricting the expression ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Tri cellulaire des neurones cellules souches et progénitrices de la souris adulte-ventriculaire Zone et Live-imagerie de la dynamique de leur cycle cellulaire

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Isolement et culture des adultes cellules souches neurales de la Subcallosal Zone Souris

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

L&#39;isolement et la culture des neurones de la moelle épinière chez les souris néonatales

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Continuous Video Electroencephalogram during Hypoxia-Ischemia in Neonatal Mice

Électroencéphalogramme vidéo continu pendant l’hypoxie-ischémie chez les souris néonatales

Hypoxia ischemia is the most common cause of neonatal seizures. Animal models are crucial for understanding the mechanisms and physiology underlying ...