Name: neonatal subventricular zone electroporation
Uploaded: 2013-02-11T13:00:00
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이 작품은 국방부 (아이디어 개발 상, W81XWH-10-1-0041, AB), CT 줄기 세포 기금 (AB) 및 건강 NRSA 10668225 (DMF)의 국립 연구소에서 보조금에 의해 지원되었다. 현재 자료는 부분적으로 코네티컷의 줄기 세포 연구 보조금 프로그램의 코네티컷 주에서 지원 작업에 기반을두고 있습니다. 의 내용이 전적으로 저자의 책임이며 반드시 코네티컷 코네티컷 또는 중부 표준시 혁신의 주 공공 보건부의 국가의 공식 전망을 대표하지 않습니다 주식회사 funders는 데이터 수집을 연구 설계에 역할을 없었다 및 분석, 게시하는 결정, 또는 원고의 준비.

이 절차는 예일 IACUC 요구 사항에 따라 수 있습니다. 과학자들은 IACUC 가이드 라인은 자신의 기관 요구 사항에 따라 승인 및 준수되어 있는지 확인해야합니다. 1. 제 1 항. DNA, 솔루션 및 유리 피펫의 준비 <ol><li> 고순도 (OD 280분의 260&gt; 1.80) 높은 농도 (μg / μl&gt; 2.5) 독소가없는 DNA를 생성 할 수 있습니다. </li><li> 22 μm 필터를 통해 0.9 % 생리 식염수와 멸균 필터를 준비합니다. <...

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	<li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells.">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).</li><li>Imayoshi, I., Sakamoto, M., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+methods+to+identify+and+manipulate+newly+born+neurons+in+the+adult+brain.">Genetic methods to identify and manipulate newly born neurons in the adult brain.</a> Frontiers in Neuroscience. 5, 64 (2011).</li><li>LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+and+improved+tools+for+in+utero+electroporation+studies+of+developing+cerebral+cortex.">New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex.</a> Cereb Cortex. 19, i120-i125 (2009).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103, 865-872 (2001).</li><li>Boutin, C., Diestel, S., Desoeuvre, A., Tiveron, M. C., Cremer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+vivo+electroporation+of+the+postnatal+rodent+forebrain.">Efficient in vivo electroporation of the postnatal rodent forebrain.</a> PloS ONE. 3, e1883 (2008).</li><li>Chesler, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+gene+expression+by+postnatal+electroporation+during+olfactory+interneuron+nurogenesis.">Selective gene expression by postnatal electroporation during olfactory interneuron nurogenesis.</a> PloS ONE. 3, e1517 (2008).</li><li>Platel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterogeneity+of+adult+neural+stem+cells+and+the+emerging+complexity+of+their+niche.">The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche.</a> Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 73, 357-365 (2008).</li><li>Fernandez, M. E., Croce, S., Boutin, C., Cremer, H., Raineteau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+electroporation+of+defined+lateral+ventricular+walls:+a+novel+and+rapid+method+to+study+fate+specification+during+postnatal+forebrain+neurogenesis.">Targeted electroporation of defined lateral ventricular walls: a novel and rapid method to study fate specification during postnatal forebrain neurogenesis.</a> Neural Development. 6, 13 (2011).</li><li>de Chevigny, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-7a+regulation+of+Pax6+controls+spatial+origin+of+forebrain+dopaminergic+neurons.">miR-7a regulation of Pax6 controls spatial origin of forebrain dopaminergic neurons.</a> Nature Neuroscience. 15, 1120-1126 (2012).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Frontiers in Neuroscience. 4, (2010).</li><li>Feliciano, D. M., Quon, J. L., Su, T., Taylor, M. M., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+neurogenesis+generates+heterotopias,+olfactory+micronodules+and+cortical+infiltration+following+single-cell+Tsc1+deletion.">Postnatal neurogenesis generates heterotopias, olfactory micronodules and cortical infiltration following single-cell Tsc1 deletion.</a> Human Molecular Genetics. 21, 799-810 (2012).</li><li>Iguchi, T., Yagi, H., Wang, C. C., Sato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tightly+controlled+conditional+knockdown+system+using+the+Tol2+transposon-mediated+technique.">A tightly controlled conditional knockdown system using the Tol2 transposon-mediated technique.</a> PloS ONE. 7, e33380 (2012).</li></ol>

다음은 세부 신생아 SVZ의 electroporation의 기술, 신속하고 견고 라벨 및 SVZ의 줄기 세포와 자손을 조작 할 수있는 기술을. electroporation 다른 기술에 비해 가지고 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 세포의 초점 라벨에 따라, 하나는 세포 자율적와 비 세포 자율적 인 효과를 판별 할 수 있습니다. inducible 시스템을 사용하여 둘째, 유전자 조작 한 사전이나 신경 통합 후 효과를 비교할 수 있습니다. 또한, 하...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> 중형 연마 붕규산 배관 </td><td> 셔터 악기 </td><td> BF150 - 110-10 </td><td></td></tr><tr><td> 듀얼 스테이지 유리 Micropipette 풀러 </td><td> Narishige </td><td> PC-10H </td><td></td></tr><tr><td> 빠른 그린 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 0521192205 </td><td></td></tr><tr><td> ECM 830 스퀘어 웨이브 펄스 발생기 </td><td> 하버드 장치 </td><td> 45-0052 </td><td></td></tr><tr><td> Tweezertrodes </td><td> 하버드 장치 </td><td> 45-0488 </td><td></td></tr><tr><td> 광섬유 광원 </td><td> 피셔 과학 </td><td> 12-562-36 </td><td></td></tr><tr><td> 텅스텐 할로겐램프 </td><td> 우시오 미국, Inc의 </td><td> 1002247 </td><td></td></tr><tr><td> Picospritzer II </td><td> 파커 악기 </td><td> 052-0312-900 </td><td></td></tr></tbody></table>

neonatal subventricular zone electroporation

신경 줄기 세포 (NSCs)는 라인 출생 후의 측면 심실하고 뉴런, astrocytes, 그리고 ependymal 세포 1 등 여러 세포 유형에 상승을 제공합니다. 분자 NSC 자기 갱신, 노력에 대한 책임 경로와 차별화를 이해하는 것은 활용 뇌를 수리하고 더 나은 중추 신경계 장애를 이해하는 독특한 가능성에 중요합니다. 포유류의 시스템의 조작에 대한 이전 방법은 전체 동물의 2 단계에서 유전 공학의 시간이 소요 비싼 노력이 필요했습니다. 따라서, 연구의 대부분은 체외 또는 무척추 동물의 NSC 분자의 기능을 살펴 보았다. 여기, 우리는 신생아 subventricular 구역 (SVZ) electroporation로 언급됩니다 신생아 NPCs를 조작 할 수있는 간단하고 빠른 방법을 보여줍니다. 비슷한 기술은 배아 NSCs을 공부하는 10 년 전 개발 및 cortica에 대한 연구를 도와 왔으며리터 개발 3,4. 최근이는 출생 후의 쥐 forebrain은 5-7 공부 적용되었습니다. 이 기술 SVZ NSCs과 자손의 강력한 라벨의 결과입니다. 따라서, 출생 후의 SVZ electroporation은 포유류의 NSC 유전 공학을위한 비용 및 시간 효율적인 대안을 제공합니다.

트위터 전극의 &quot;탁&quot;운동 (그림 1E) 다음 등쪽의, 등쪽의 측면, 그리고 측면 subventricular 구역과 인접 거의 모든 요골 glia의 라벨에 신생아 subventricular 영역 electroporation 결과이다. 그러나, electroporation은 각 실험의 요구에 맞는하지만 전극을 샅샅이 및 비디오 상세과 같은 특정 위치와 방향을 사용하지 할 수 있습니다. dorsally 현지화 반경 glia 이러한 안감에서 심실의 측면 부분을 다?...

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Neonatal Subventricular Zone Electroporation

우리는 신생아 subventricular 영역 electroporation라고 최소한 침입 기술을 보여줍니다. 기술은 신생아 새끼의 측면 심실에 플라스미드 DNA를 주입하고 전달하는 전기 전류를 적용 구성되어 있으며, 유전자 신경 줄기 세포를 조작

신생아 Subventricular 지대 Electroporation

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Subventricular 존 엉 - 얼굴 : Wholemount 스테 이닝 및 Ependymal 흐름

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

연구

신경과학

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

개발 마우스 망막의 생체내 Electroporation에

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

마우스 Utero에 Electroporation : 통제 Spatiotemporal 진 Transfection

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

칼슘 이미징에 대한 급성 Subventricular 지대 슬라이스의 작성

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Neonatal Pial Surface Electroporation

신생아 Pial 표면 에레

Over the past several years the pial surface has been identified as a germinal niche of importance during embryonic, perinatal and adult neuro- and ...

Subtype-selective Electroporation of Cortical Interneurons

두피의 interneurons의 하위 유형 선택적 일렉트로

The study of central nervous system (CNS) maturation relies on genetic targeting of neuronal populations. However, the task of restricting the expression ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

셀 성인 마우스 뇌실 영역에서 신경 줄기 및 전구 세포의 정렬과 세포주기 역학의 라이브 이미징

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

마우스 뇌량 밑 영역에서의 분리 및 성인 신경 줄기 세포의 문화

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

신생아 생쥐의 척수 신경 세포 분리 및 배양

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Continuous Video Electroencephalogram during Hypoxia-Ischemia in Neonatal Mice

신생아 쥐의 저산소증-허혈 중 연속 비디오 뇌전도

Hypoxia ischemia is the most common cause of neonatal seizures. Animal models are crucial for understanding the mechanisms and physiology underlying ...