Name: neonatal subventricular zone electroporation
Uploaded: 2013-02-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Neonatal Subventricular Zone Electroporation at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами от Министерства обороны (награда идея развития, W81XWH-10-1-0041, AB), CT стволовых клеток гранта (AB) и Национального института здоровья АЯРБ 10668225 (DMF). Настоящий материал основан на работе частично поддержана штата Коннектикут под сотовый Коннектикут стволовых Программа исследовательских грантов. Его содержание несут исключительно авторы и не обязательно отражают официальную точку зрения штата Коннектикут, Департамент здравоохранения штата Коннектикут или КТ Innovations, Inc спонсоры не играли никакой роли в разработке дизайна исследования, сбор данных и анализа, решение о публикации или подготовки рукописи.

Эта процедура осуществляется в соответствии с требованиями Йельского IACUC. Ученые должны убедиться, что IACUC руководящие принципы были утверждены и затем в соответствии с их институциональными требованиями. 1. Раздел 1. Получение ДНК, решения и стеклянных пипеток <ol><li> Соз...

<ol>
	<li>Kriegstein, A., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+glial+nature+of+embryonic+and+adult+neural+stem+cells.">The glial nature of embryonic and adult neural stem cells.</a> Annual Review of Neuroscience. 32, 149-184 (2009).</li><li>Imayoshi, I., Sakamoto, M., Kageyama, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+methods+to+identify+and+manipulate+newly+born+neurons+in+the+adult+brain.">Genetic methods to identify and manipulate newly born neurons in the adult brain.</a> Frontiers in Neuroscience. 5, 64 (2011).</li><li>LoTurco, J., Manent, J. B., Sidiqi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+and+improved+tools+for+in+utero+electroporation+studies+of+developing+cerebral+cortex.">New and improved tools for in utero electroporation studies of developing cerebral cortex.</a> Cereb Cortex. 19, i120-i125 (2009).</li><li>Tabata, H., Nakajima, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+utero+gene+transfer+system+to+the+developing+mouse+brain+using+electroporation:+visualization+of+neuronal+migration+in+the+developing+cortex.">Efficient in utero gene transfer system to the developing mouse brain using electroporation: visualization of neuronal migration in the developing cortex.</a> Neuroscience. 103, 865-872 (2001).</li><li>Boutin, C., Diestel, S., Desoeuvre, A., Tiveron, M. C., Cremer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+in+vivo+electroporation+of+the+postnatal+rodent+forebrain.">Efficient in vivo electroporation of the postnatal rodent forebrain.</a> PloS ONE. 3, e1883 (2008).</li><li>Chesler, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+gene+expression+by+postnatal+electroporation+during+olfactory+interneuron+nurogenesis.">Selective gene expression by postnatal electroporation during olfactory interneuron nurogenesis.</a> PloS ONE. 3, e1517 (2008).</li><li>Platel, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMDA+receptors+activated+by+subventricular+zone+astrocytic+glutamate+are+critical+for+neuroblast+survival+prior+to+entering+a+synaptic+network.">NMDA receptors activated by subventricular zone astrocytic glutamate are critical for neuroblast survival prior to entering a synaptic network.</a> Neuron. 65, 859-872 (2010).</li><li>Alvarez-Buylla, A., Kohwi, M., Nguyen, T. M., Merkle, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+heterogeneity+of+adult+neural+stem+cells+and+the+emerging+complexity+of+their+niche.">The heterogeneity of adult neural stem cells and the emerging complexity of their niche.</a> Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 73, 357-365 (2008).</li><li>Fernandez, M. E., Croce, S., Boutin, C., Cremer, H., Raineteau, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+electroporation+of+defined+lateral+ventricular+walls:+a+novel+and+rapid+method+to+study+fate+specification+during+postnatal+forebrain+neurogenesis.">Targeted electroporation of defined lateral ventricular walls: a novel and rapid method to study fate specification during postnatal forebrain neurogenesis.</a> Neural Development. 6, 13 (2011).</li><li>de Chevigny, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-7a+regulation+of+Pax6+controls+spatial+origin+of+forebrain+dopaminergic+neurons.">miR-7a regulation of Pax6 controls spatial origin of forebrain dopaminergic neurons.</a> Nature Neuroscience. 15, 1120-1126 (2012).</li><li>Lacar, B., Young, S. Z., Platel, J. C., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+and+recording+subventricular+zone+progenitor+cells+in+live+tissue+of+postnatal+mice.">Imaging and recording subventricular zone progenitor cells in live tissue of postnatal mice.</a> Frontiers in Neuroscience. 4, (2010).</li><li>Feliciano, D. M., Quon, J. L., Su, T., Taylor, M. M., Bordey, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+neurogenesis+generates+heterotopias,+olfactory+micronodules+and+cortical+infiltration+following+single-cell+Tsc1+deletion.">Postnatal neurogenesis generates heterotopias, olfactory micronodules and cortical infiltration following single-cell Tsc1 deletion.</a> Human Molecular Genetics. 21, 799-810 (2012).</li><li>Iguchi, T., Yagi, H., Wang, C. C., Sato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tightly+controlled+conditional+knockdown+system+using+the+Tol2+transposon-mediated+technique.">A tightly controlled conditional knockdown system using the Tol2 transposon-mediated technique.</a> PloS ONE. 7, e33380 (2012).</li></ol>

Здесь мы подробно технику новорожденных электропорации SVZ, технику, быстро и надежно маркировать и манипулировать SVZ стволовых клеток и их потомства. Есть несколько преимуществ, которые электропорации имеет по сравнению с другими методами. Во-первых, учитывая координационного маркиро...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии (по желанию) </td></tr><tr><td> Тяжелые полированные трубы из боросиликатного </td><td> Саттер инструменты </td><td> BF150-110-10 </td><td></td></tr><tr><td> Двухступенчатая стекла микропипетки съемник </td><td> Narishige </td><td> PC-10H </td><td></td></tr><tr><td> Быстрый зеленый </td><td> Фишер Научные </td><td> 0521192205 </td><td></td></tr><tr><td> ECM 830 квадратных волны генератора импульсов </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 45-0052 </td><td></td></tr><tr><td> Tweezertrodes </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 45-0488 </td><td></td></tr><tr><td> Волоконно-оптический источник света </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-562-36 </td><td></td></tr><tr><td> Вольфрамовые галогенныелампа </td><td> USHIO America, Inc </td><td> 1002247 </td><td></td></tr><tr><td> Picospritzer II </td><td> Паркер инструменты </td><td> 052-0312-900 </td><td></td></tr></tbody></table>

neonatal subventricular zone electroporation

Нервные стволовые клетки (НСК) линии послеродового боковых желудочков и приводит к нескольким типам клеток, которые включают нейроны, астроциты и клетки эпендимных 1. Понимание молекулярных путей, ответственных за НСК самообновлению, целеустремленность и дифференциация имеет решающее значение для освоения их уникальные возможности для восстановления мозга и лучше понять расстройства центральной нервной системы. Предыдущие методы манипуляции системах млекопитающих требуется много времени и средств деятельности генной инженерии в целом уровень животного 2. Таким образом, подавляющее большинство исследований изучили функции молекулы НСК в пробирке или в беспозвоночных. Здесь мы покажем, простой и быстрый метод управления новорожденных NPCs, что называют новорожденных субвентрикулярной зону (СВЗ) электропорации. Подобные методы были разработаны десять лет назад для изучения эмбриональных НСК и помогли исследования по corticaл развитие 3,4. Совсем недавно это был применен для изучения послеродовой мозга грызунов 5-7. Этот метод приводит к надежной маркировки SVZ НСК и их потомства. Таким образом, послеродовое SVZ электропорации предоставляет стоимость и время эффективной альтернативой для млекопитающих НСК генной инженерии.

Новорожденных субвентрикулярной зоне электропорации результатов в маркировке почти все радиальные глии смежных с дорсальной, верхних боковых и боковых субвентрикулярной зоне после «зачистки» движения пинцет электрод (рис. 1E). Тем не менее, электропорации могут быть адаптир?...

Watch this Scientific Journal Video about Neonatal Subventricular Zone Electroporation at JoVE.com

Neonatal Subventricular Zone Electroporation

Мы демонстрируем минимально инвазивной техники называют новорожденных субвентрикулярной электропорации зоне. Методика заключается во введении плазмидной ДНК в боковых желудочков у новорожденных щенков и применение электрического тока для доставки и генетически манипулировать нервных стволовых клеток

Новорожденных субвентрикулярной Electroporation зоны

Neural stem cells (NSCs) line the postnatal lateral ventricles and give rise to multiple cell types which include neurons, astrocytes, and ependymal ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

The Subventricular Zone En-face: Wholemount Staining and Ependymal Flow

Субвентрикулярной зоне En-лицо: Wholemount Окрашивание и эпендимальных потока

The walls of the lateral ventricles contain the largest germinal region in the adult mammalian brain. The subventricular zone (SVZ) in these walls is an ...

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

In vivo Electroporation of Developing Mouse Retina

В естественных условиях Электропорация развивающихся Мышь Retina

The functional characterization of genes expressed during mammalian retinal development remains a significant challenge.  Gene targeting to generate ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Мышь В утробе матери Электропорация: Пространственно-временные Контролируемые трансфекции генов

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Preparation of Acute Subventricular Zone Slices for Calcium Imaging

Подготовка Острый субвентрикулярной фрагменты зона для кальция изображений

The subventricular zone (SVZ) is one of the two neurogenic zones in the postnatal brain. The SVZ contains densely packed cells, including neural ...

Neonatal Pial Surface Electroporation

Неонатальный пиальных поверхности Электропорацию

Over the past several years the pial surface has been identified as a germinal niche of importance during embryonic, perinatal and adult neuro- and ...

Subtype-selective Electroporation of Cortical Interneurons

Класс-селективный Электропорация корковых интернейронов

The study of central nervous system (CNS) maturation relies on genetic targeting of neuronal populations. However, the task of restricting the expression ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Сотовый Сортировка нейронных стволовых и прогениторных клеток из взрослых мышей субвентрикулярной зоны и Live-визуализация клеточного цикла динамика

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Isolation and Culture of Adult Neural Stem Cells from the Mouse Subcallosal Zone

Выделение и культуры взрослых нервные стволовые клетки от мыши зоны расположенный под мозолистым телом

Adult neural stem cells (aNSCs) can be used for the regeneration of damaged brain tissue. NSCs have the potential for differentiation and proliferation ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

Изоляция и культура нейронов спинного мозга от неонатальных мышей

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Continuous Video Electroencephalogram during Hypoxia-Ischemia in Neonatal Mice

Непрерывная видеоэлектроэнцефалограмма при гипоксии-ишемии у неонатальных мышей

Hypoxia ischemia is the most common cause of neonatal seizures. Animal models are crucial for understanding the mechanisms and physiology underlying ...