Name: time-lapse imaging of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer
Uploaded: 2013-02-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer at JoVE.com

De auteurs willen Bofan Wu en christelijke Raithel bedanken voor technische bijstand en Michael Rieger voor zijn kennismaking met live-cell imaging. Ondersteund door NCI, NIH RO1CA112176 (PAF), NCI, NIH. R01CA89041-10S1 (PAF), Deutscher Akademischer Austaush Dienst eV A/09/72227 Ref. 316 (REN), Ministerie van Defensie W81XWH-11-1-0074 (REN), WCU (World Class University) programma via de National Research Foundation van Korea gefinancierd door het Ministerie van Onderwijs, Wetenschap en Technologie (R31-10069) (PAF ), NIH IG20 RR025828-01 (Knaagdieren Barrier Facility Equipment) en NIH NCI 5P30CA051008 (Microscopie en Imaging en Animal Gedeelde bronnen).

<html> 1. Algemene Regeling <ol><li> Genereren primaire kweken van preneoplastische mammaire epitheelcellen melkklieren van genetisch gemanipuleerde en controle wild-type muizen. </li><li> Het mogelijk &#39;live-cell beelden elke 15 min met behulp van Volocity beeld acquisitie software (versie 5.3.1, PerkinElmer, Waltham, MA) voor maximaal 5 dagen. </li><li> Direct bekijken time-lapse beelden naar de timing en het mechanisme van epitheliale cellen kolonievorming, incidentie van apoptose, en fasering van morfologische v...

<ol>
	<li>Jones, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+estrogen+signaling+pathways+collaborates+with+loss+of+Brca1+to+promote+development+of+ERalpha-negative+and+ERalpha-positive+mammary+preneoplasia+and+cancer.">Activation of estrogen signaling pathways collaborates with loss of Brca1 to promote development of ERalpha-negative and ERalpha-positive mammary preneoplasia and cancer.</a> Oncogene. 27, 794-802 (2008).</li><li>Burga, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+proliferation+and+differentiation+properties+of+primary+mammary+epithelial+cells+from+BRCA1+mutation+carriers.">Altered proliferation and differentiation properties of primary mammary epithelial cells from BRCA1 mutation carriers.</a> Cancer Res. 69, 1273-1278 (2009).</li><li>Li, M., Wagner, K., Furth, P. A., Ip, M., Asch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+primary+mammary+epithelial+cells+and+transfection+by+viral+and+nonviral+methods.">Preparation of primary mammary epithelial cells and transfection by viral and nonviral methods.</a> Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer. , (2000).</li><li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+stem-cell-driven+regeneration+in+mammals.">Imaging stem-cell-driven regeneration in mammals.</a> Nature. 453, 345-351 (2008).</li><li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+single-cell+imaging+of+mammalian+stem+cells.">Long-term single-cell imaging of mammalian stem cells.</a> Nature Methods. 8, S30-S35 (2011).</li><li>Eilken, H. M., Nishikawa, S. -. I., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+single-cell+imaging+of+blood+generation+from+haemogenic+endothelium.">Continuous single-cell imaging of blood generation from haemogenic endothelium.</a> Nature. 457, 896-900 (2009).</li><li>Kokkaliaris, K. D., Loeffler, D., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+tracking+hematopoiesis+at+the+single-cell+level.">Advances in tracking hematopoiesis at the single-cell level.</a> Current opinion in hematology. , (2012).</li><li>Rieger, M. A., Hoppe, P. S., Smejkal, B. M., Eitelhuber, A. C., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+cytokines+can+instruct+lineage+choice.">Hematopoietic cytokines can instruct lineage choice.</a> Science. 325, 217-218 (2009).</li><li>Rieger, M. A., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+of+lineage+choice+by+hematopoietic+cytokines.">Instruction of lineage choice by hematopoietic cytokines.</a> Cell Cycle. 8, 4019-4020 (2009).</li><li>Heinrich, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+subtype-specific+neurons+from+postnatal+astroglia+of+the+mouse+cerebral+cortex.">Generation of subtype-specific neurons from postnatal astroglia of the mouse cerebral cortex.</a> Nat. Protoc. 6, 214-228 (2011).</li></ol>

Kritische stappen Het is belangrijk dat melkklieren worden geoogst uit muizen van dezelfde leeftijd te controleren voor leeftijdsgerelateerde variabiliteit in mammaire epitheelcellen gedrag. Bij uitplaten van de cellen, moet hetzelfde aantal cellen worden uitgeplaat in elk putje voor elk experiment. Cellen moeten relatief dun als plateren zodat culturen worden niet confluent te snel waardoor het mogelijk meerdere individuele cellen volgen door seriële beelden. Het is essentieel dat de plaat in...

Genetisch gemanipuleerde muismodellen zijn instrumenten te bestuderen en te begrijpen hoe verschillende genetische afwijkingen bijdragen aan het risico op het ontwikkelen van borstkanker. Bijvoorbeeld genetisch gemanipuleerde muizen aangetoond dat de combinatie van drie factoren: verlies van de volledige lengte borstkanker 1, early onset (BRCA1) gen in mammaire epitheelcellen, p53 tumor (TP53) germinale haploinsufficiëntie en mammaire epitheliale cel gerichte upgereguleerd oestrogeen receptor alpha (ERa) expressie resulteert in de ontwikkeling van borstkanker in 100% van BRCA1 floxed (f) 11/f11/Mouse borsttumorvirus (MMTV) -Cre/p53 + / -/tetracycline-operator ( tet-op) -ER/MMTV-reverse tetracycline transactivator (rtTA muizen met 12 maanden in vergelijking met de lagere percentages gerapporteerd in BRCA1 f11/f11/MMTV-Cre/p53 + / - muizen zonder ERa over-expressie (~ 50 - 60%) en BRCA1 f11/f11/MMTV-Cre muizen zonder TP53 haploinsufficiëntie (&lt;5%) 1. Dynamic time-lapse beeldvorming van het gedrag van preneoplastische primaire mammaire epitheelcellen toont verschillen in celgedrag die minder gemakkelijk gewaardeerd statische weefselcoupes. Veranderingen in proliferatie en differentiatie worden waargenomen in primaire borstklieren cellen van menselijke BRCA1 mutatie dragers. 2 Oprichting van single-cell suspensies van primaire borstklier epitheliale cellen van normale en genetisch gemanipuleerde muizen worden gegenereerd door middel van enzymatische dissociatie van operatief verwijderde borstklierweefsel. 3 Time-lapse beelden worden bekeken op mechanisme en de timing van cel kolonie uiterlijk en de incidentie van morfologische veranderingen in cellen met inbegrip van epitheliale-mesenchymale transitie (EMT) en apoptose te beoordelen. Genereren van lot van de cel kaarten, zijn kwantificering van de lengte van de tijd tussen celdelingen (cel levens), en de bepaling van de modellen van de celdeling vergemakkelijkt door het gebruik van single-cell tracking. TimmTracking Tool &#39;s (TTT) is publiekelijk beschikbare software wordt gebruikt om single-lot van de cel kaarten te genereren. Het nut in ophelderen mechanismen van cel lot is vastgesteld 4,5 onderzoeken normale hematopoietische stamcellen ontwikkeling 6-9 en het genereren van neuronen 10.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van de Reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> EpiCult-B Basal Medium Mouse </td><td> StemCell Technologies </td><td> 05610 </td><td></td></tr><tr><td> EpiCult-B proliferatieverdrag Supplementen Mouse </td><td> StemCell Technologies </td><td> 05612 </td><td></td></tr><tr><td> recombinant humane epidermale groeifactor (rhEGF) </td><td> StemCell Technologies </td><td> 02633 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase / Hyaluronidase </td><td> StemCell Technologies </td><td> 07912 </td><td></td></tr><tr><td> Wegwerp Scapels </td><td> Veer </td><td> 2975 # 10 </td><td></td></tr><tr><td> Balanced Salt Hanks &#39;oplossing </td><td> StemCell Technologies </td><td> 37150 </td><td></td></tr><tr><td> Eenmmonium Chloride </td><td> StemCell Technologies </td><td> 07800 </td><td></td></tr><tr><td> Tryspin-EDTA </td><td> StemCell Technologies </td><td> 07901 </td><td></td></tr><tr><td> Dispase </td><td> StemCell Technologies </td><td> 07913 </td><td></td></tr><tr><td> DNase I </td><td> StemCell Technologies </td><td> 07900 </td><td></td></tr><tr><td> 40 urn celzeef </td><td> StemCell Technologies </td><td> 27305 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> StemCell Technologies </td><td> 06100 </td><td></td></tr><tr><td> Penstrep </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td><td></td></tr></tbody></table>

time-lapse imaging of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer

Time-lapse imaging kunnen worden gebruikt om het gedrag van gekweekte primaire preneoplastische mammaire epitheelcellen uit verschillende genetisch gemanipuleerde muizen modellen van borstkanker te vergelijken. Zo kan tijd tussen celdelingen (cel levensduur), apoptotische aantal cellen, evolutie van morfologische veranderingen, en het mechanisme van kolonievorming worden gekwantificeerd en vergeleken cellen die specifieke genetische lesies. Primaire borstklier epitheliale celculturen worden gegenereerd uit melkklieren, zonder voelbare tumor. Klieren zijn zorgvuldig gereseceerd met duidelijke scheiding van aangrenzende spieren, worden lymfeklieren verwijderd, en single-cell suspensies van verrijkte borstklier epitheliale cellen worden gegenereerd door hakken borstweefsel gevolgd door enzymatische dissociatie en filtratie. Eencellige suspensies worden uitgeplaat en direct onder een microscoop in een incubator kamer voor levende cellen imaging. Zestien 650 um x 700 urn velden in een 4x4-configuratie van elk well van een 6-well plaat belicht worden elke 15 minuten gedurende 5 dagen. Time-lapse beelden worden onderzocht rechtstreeks cellulaire gedrag dat mechanisme en de frequentie van kolonievorming cellen kunnen bestaan ​​binnen de eerste 24 uur van het uitplaten van de cellen (aggregatie versus celproliferatie), incidentie van apoptose en fasering van morfologische veranderingen te meten. Single-cell tracking wordt gebruikt om lot van de cel kaarten voor het meten van individuele cel levens en het onderzoek van de celdeling patronen te genereren. Kwantitatieve gegevens worden statistisch geanalyseerd voor de evaluatie significante verschillen in gedrag gecorreleerd met specifieke genetische lesies.

Epitheliale en fibroblast cellen kunnen worden onderscheiden door celmorfologie. Epitheelcellen een kubische vorm (Figuur 1A-B) en vorm celkolonies (Figuur 1A). Fibroblasten, een type stromale cellen, een langwerpige morfologie (figuur 1C). Cellen werden afgerond en drijven bij het ​​begin van imaging (figuur 2A-D). Na bevestiging aan de plaat werden ze plat en toonde een kubische-type weergave (figuur 2E, H).</s...

Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer at JoVE.com

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Time-lapse imaging wordt gebruikt om het gedrag van primaire preneoplastische mammaire epitheelcellen afkomstig van genetisch gemanipuleerde muizen met borstkanker te bepalen of er correlaties tussen specifieke gedragsparameters en verschillende genetische laesies beoordelen.

Time-lapse imaging of Primary preneoplastische uier epitheelcellen afkomstig van de genetisch gemanipuleerde muis modellen van borstkanker

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo bioluminescentie van Tumor Hypoxie Dynamiek van Borstkanker hersenmetastasen in een muismodel

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Experimentele Generatie van Carcinoom-geassocieerde fibroblasten (cafe&#39;s) van Human Borst fibroblasten

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

Leef Imaging van de Drug antwoorden in de tumor micro-omgeving in muismodellen van Kanker van de Borst

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patiënt Derived Cell Cultuur en isolatie van CD133<sup&gt; +</sup&gt; Vermeende Cancer Stem Cells van Melanoom

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Profiling of Estrogen-regulated MicroRNAs in Breast Cancer Cells

Profilering van oestrogeen-gereguleerde MicroRNA in borstkankercellen

Estrogen plays vital roles in mammary gland development and breast cancer progression. It mediates its function by binding to and activating the estrogen ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Methode voor het verkrijgen van Primary eierstokkankercellen Van Solid Exemplaren

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Orthotopische Injectie van borstkankercellen in de uiervet Pad van Muizen tumorgroei te bestuderen.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Tracking the Mammary Architectural Features and Detecting Breast Cancer with Magnetic Resonance Diffusion Tensor Imaging

Het volgen van de Mammary architectonische kenmerken en het opsporen van borstkanker met Magnetic Resonance Diffusion Tensor Imaging

Breast cancer is the most common cause of cancer among women worldwide. Early detection of breast cancer has a critical role in improving the quality of ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

Hoge-frequentie Ultrasound Imaging van de muis cervicale lymfeklieren

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

Een Organotypische High Throughput systeem voor de karakterisering van de Drug gevoeligheid van Primary Multiple Myeloma cellen

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...