Name: time-lapse imaging of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer
Uploaded: 2013-02-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer at JoVE.com

著者らは、生細胞イメージングへの彼の導入のための技術支援とマイケルリーガーためBofanウーとキリスト教Raithelに感謝したいと思います。 NCI、NIH RO1CA112176（PAF）は、NCI、NIHによってサポートされています。 R01CA89041-10S1（PAF）、ドイAkademischer Austaush DienstのeVのA/09/72227のRef。 316（REN）、国防総省W81XWH-11-1から0074（REN）、教育科学技術省（R31-10069）によって資金を供給され、韓国の国立研究財団を通じてWCU（ワールドクラスの大学）プログラム（PAF ）、NIH IG20 RR025828-01（げっ歯類のバリア設備機器）、およびNIH NCI 5P30CA051008（顕微鏡およびイメージング·アニマル共有リソース）。

<html> 1。全体的なスキーム<ol><li>遺伝子組み換えの乳腺から前腫瘍性乳腺上皮細胞の初代培養を生成し、野生型マウスを制御します。 </li><li> 15分毎に最大5日間までVolocity画像取得ソフトウェア（バージョン5.3.1、エルマー、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用して生細胞の画像をキャプチャします。 </li><li>タイミングと上皮細胞のコロニー形成のメカニズム、アポトーシスの発生率、お...

<ol>
	<li>Jones, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+estrogen+signaling+pathways+collaborates+with+loss+of+Brca1+to+promote+development+of+ERalpha-negative+and+ERalpha-positive+mammary+preneoplasia+and+cancer.">Activation of estrogen signaling pathways collaborates with loss of Brca1 to promote development of ERalpha-negative and ERalpha-positive mammary preneoplasia and cancer.</a> Oncogene. 27, 794-802 (2008).</li><li>Burga, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+proliferation+and+differentiation+properties+of+primary+mammary+epithelial+cells+from+BRCA1+mutation+carriers.">Altered proliferation and differentiation properties of primary mammary epithelial cells from BRCA1 mutation carriers.</a> Cancer Res. 69, 1273-1278 (2009).</li><li>Li, M., Wagner, K., Furth, P. A., Ip, M., Asch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+primary+mammary+epithelial+cells+and+transfection+by+viral+and+nonviral+methods.">Preparation of primary mammary epithelial cells and transfection by viral and nonviral methods.</a> Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer. , (2000).</li><li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+stem-cell-driven+regeneration+in+mammals.">Imaging stem-cell-driven regeneration in mammals.</a> Nature. 453, 345-351 (2008).</li><li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+single-cell+imaging+of+mammalian+stem+cells.">Long-term single-cell imaging of mammalian stem cells.</a> Nature Methods. 8, S30-S35 (2011).</li><li>Eilken, H. M., Nishikawa, S. -. I., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+single-cell+imaging+of+blood+generation+from+haemogenic+endothelium.">Continuous single-cell imaging of blood generation from haemogenic endothelium.</a> Nature. 457, 896-900 (2009).</li><li>Kokkaliaris, K. D., Loeffler, D., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+tracking+hematopoiesis+at+the+single-cell+level.">Advances in tracking hematopoiesis at the single-cell level.</a> Current opinion in hematology. , (2012).</li><li>Rieger, M. A., Hoppe, P. S., Smejkal, B. M., Eitelhuber, A. C., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+cytokines+can+instruct+lineage+choice.">Hematopoietic cytokines can instruct lineage choice.</a> Science. 325, 217-218 (2009).</li><li>Rieger, M. A., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+of+lineage+choice+by+hematopoietic+cytokines.">Instruction of lineage choice by hematopoietic cytokines.</a> Cell Cycle. 8, 4019-4020 (2009).</li><li>Heinrich, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+subtype-specific+neurons+from+postnatal+astroglia+of+the+mouse+cerebral+cortex.">Generation of subtype-specific neurons from postnatal astroglia of the mouse cerebral cortex.</a> Nat. Protoc. 6, 214-228 (2011).</li></ol>

重要なステップそれは乳腺が乳腺上皮細胞の挙動の加齢変動を制御するために、同じ年齢のマウスから採取されていることを確認することが重要です。細胞をプレーティングするときに、同じセルの数は、すべての実験のために、各ウェルに播種しなければならない。文化はそれが可能な連続画像を使用して複数のセルを個別にフォローすることが早すぎるコンフルエント...

遺伝子改変マウスモデルは、異なる遺伝的病変は、乳がんの発症リスクに寄与する方法を勉強し、理解するためのツールです。例えば、遺伝子組み換えマウスは3つの要因の組み合わせが示されている：完全長乳がん1、乳腺上皮細胞における早期発症（BRCA1）遺伝子、腫瘍タンパク質p53（TP53）生殖系列ハプロ不全、および乳腺上皮の損失をセル（f）は11/f11/Mouse乳腺腫瘍ウイルス（MMTV）-Cre/p53 + / -/tetracycline-operator（BRCA1フロックス化の100％で乳腺癌の開発においてアップレギュレートエストロゲン受容体α（ERA）式の結果を標的TET-op）が-ER/MMTV-reverseテトラサイクリントランスアクチベーター（BRCA1 f11/f11/MMTV-Cre/p53で報告された低い割合と比較して、生後12ヶ月rtTAマウスが+ - / - （〜50過剰発現時代を持たないマウスTP53 haploinsufなし60％）、BRCA1 f11/f11/MMTV-CreマウスFICIENCY（&lt;5％）。1 前癌一次乳腺上皮細胞の挙動の動的タイムラプスイメージングが少なく簡単に静的な組織切片で高く評価されている細胞の挙動の違いを明らかにする。増殖と分化の変化はヒトBRCA1変異保因者からの主な乳腺細胞で観察されています。正常及び遺伝子改変マウスからプライマリ乳腺上皮細胞の単一細胞懸濁液の2作成は切除乳腺組織の酵素的解離によって生成されます。3タイムラプス画像は、細胞コロニーの外観と上皮間葉移行（EMT）とアポトーシスを含む細胞の形態学的変化の発生のメカニズムとタイミングを評価するために見ている。細胞の運命マップの生成が、細胞分裂（細胞寿命）と、細胞分裂のパターンの決定の間の時間の長さの定量化は、単一セルの追跡の使用によって促進されています。ティムのトラッキングツール（TTT）は、単一セルの運命マップを生成するために使用される公に利用可能にするソフトウェアです。細胞の運命決定のメカニズムの解明にその有用性は、通常の造血幹細胞の発達6-9およびニューロンの生成を調べる4,5確立されています10

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名称 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> 注釈 </td></tr><tr><td> EpiCult-Bの基本培地マウス</td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 05610 </td><td></td></tr><tr><td> EpiCult-Bの増殖サプリメントマウス</td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 05612 </td><td></td></tr><tr><td>組換えヒト上皮成長因子（rhEGF） </td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 02633 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼ/ヒアルロニダーゼ</td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 07912 </td><td></td></tr><tr><td>使い捨てScapels </td><td>フェザー</td><td> 2975＃10 </td><td></td></tr><tr><td>ハンクス平衡塩溶液</td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 37150 </td><td></td></tr><tr><td> Ammonium塩化</td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 07800 </td><td></td></tr><tr><td> Tryspin-EDTA </td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 07901 </td><td></td></tr><tr><td>ディスパーゼ</td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 07913 </td><td></td></tr><tr><td> DNase Iを</td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 07900 </td><td></td></tr><tr><td> 40μmのセルストレーナー</td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 27305 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> StemCellテクノロジーズ</td><td> 06100 </td><td></td></tr><tr><td> PenStrep </td><td>ギブコ</td><td> 15140 </td><td></td></tr></tbody></table>

time-lapse imaging of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer

タイムラプスイメージングは​​、乳がんのさまざまな遺伝子改変マウスモデル由来初代培養前腫瘍性乳腺上皮細胞の挙動を比較するために使用できます。例えば、細胞分裂（細胞寿命）、アポトーシス細胞数、形態学的変化の進化、およびコロニー形成のメカニズムの間の時間を定量することができるし、特定の遺伝子損傷を持つ細胞で比較。プライマリ乳腺上皮細胞培養物は、触知可能な腫瘍なし乳腺から生成されます。腺が慎重に周囲の筋肉から明確に分離することで切除され、リンパ節を除去し、濃縮された乳腺上皮細胞の単一細胞懸濁液は、酵素的解離と濾過に続いミンチ乳腺組織によって生成されます。単細胞懸濁液は、ライブセルイメージングのためのインキュベーターチャンバー内に播種し、顕微鏡下に直接配置されます。各ワットから4x4の構成で16 650ミクロン×700μmのフィールド6ウェルプレートのエルは、5日間の15分ごとに結像される。タイムラプス画像は、直接最初の24セルのめっき時間（集計対細胞増殖）、アポトーシスの発生率、および形態学的変化の位相の中で細胞コロニー形成のメカニズムと周波数を含めることができます携帯電話の行動を測定するために検査されます。単一セルのトラッキングは、個々の細胞の寿命と細胞分裂パターンの調査の測定のための細胞運命のマップを生成するために使用されます。定量的なデータは統計的に特定の遺伝子損傷と相関行動の大きな違いを評価するために分析される。

上皮細胞と線維芽細胞は、細胞の形態によって区別す​​ることができる。上皮細胞は立方形の形状（ 図1A-B）とフォーム細胞コロニー（ 図1A）を持っています。線維芽細胞、間質細胞の種類は、細長い形態（ 図1C）を持っています。 細胞は丸く、イメージングの開始（ 図2A-D）に浮かんでいた?...

Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer at JoVE.com

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

タイムラプスイメージングは​​、特定の行動のパラメータと異なる遺伝的病変の間に相関があるかどうかを判断するために乳癌リスクの遺伝子改変モデルマウス由来の初代前腫瘍性乳腺上皮細胞の挙動を評価するために使用される。

乳がんの遺伝子改変マウスモデル由来の初代前癌乳腺上皮細胞のタイムラプスイメージング

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

マウスモデルにおける乳がんの脳転移の腫瘍の低酸素動態の in vivo生物発光イメージングに

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

ヒト乳腺線維芽細胞からの癌関連線維芽細胞の実験的生成（CAFS）

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

乳癌のマウスモデルにおいて腫瘍微小環境における薬剤応答のイメージングを生きる

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

CD133の患者由来の細胞培養および分離<sup&gt; +</supメラノーマから&gt;推定されるがん幹細胞

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Profiling of Estrogen-regulated MicroRNAs in Breast Cancer Cells

乳癌細胞におけるエストロゲン調節マイクロRNAのプロファイリング

Estrogen plays vital roles in mammary gland development and breast cancer progression. It mediates its function by binding to and activating the estrogen ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

ソリッド検体からの原発性卵巣癌細胞を得る方法

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

腫瘍増殖を研究するためにマウスの乳房脂肪パッド中に乳癌細胞の同所注入。

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Tracking the Mammary Architectural Features and Detecting Breast Cancer with Magnetic Resonance Diffusion Tensor Imaging

乳腺アーキテクチャの特長を追跡し、磁気共鳴拡散テンソルイメージングと乳がんの検出

Breast cancer is the most common cause of cancer among women worldwide. Early detection of breast cancer has a critical role in improving the quality of ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

マウス子宮頸部リンパ節の高周波超音波イメージング

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

一次多発性骨髄腫細胞の薬剤感受性の特徴付けのための器官のハイスループットシステム

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...