Name: time-lapse imaging of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer
Uploaded: 2013-02-08T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Bofan Wu и христианской Raithel для оказания технической помощи и Майкл Rieger для его введения в живой клетке изображений. Поддерживается NCI, NIH RO1CA112176 (СУП), NCI, NIH. R01CA89041-10S1 (СУП), Deutscher Akademischer Austaush Dienst эВ A/09/72227 Ref. 316 (REN), Министерства обороны W81XWH-11-1-0074 (REN), WCU (World Class Университет) программы через Национальный научный фонд Корея финансируется Министерством Образования, Науки и Технологии (R31-10069) (PAF ), NIH IG20 RR025828-01 (грызунов барьер фонда оборудования), и NIH NCI 5P30CA051008 (микроскопии и обработки изображений животных и общих ресурсов).

<html> 1. Общая схема <ol><li> Создание первичных культур предраковых эпителиальные клетки молочной железы из молочных желез генной инженерии и управления мышей дикого типа. </li><li> Захват живых клеток изображения каждые 15 минут, используя Volocity получения изображений программное обеспечение (?...

<ol>
	<li>Jones, L. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+estrogen+signaling+pathways+collaborates+with+loss+of+Brca1+to+promote+development+of+ERalpha-negative+and+ERalpha-positive+mammary+preneoplasia+and+cancer.">Activation of estrogen signaling pathways collaborates with loss of Brca1 to promote development of ERalpha-negative and ERalpha-positive mammary preneoplasia and cancer.</a> Oncogene. 27, 794-802 (2008).</li><li>Burga, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+proliferation+and+differentiation+properties+of+primary+mammary+epithelial+cells+from+BRCA1+mutation+carriers.">Altered proliferation and differentiation properties of primary mammary epithelial cells from BRCA1 mutation carriers.</a> Cancer Res. 69, 1273-1278 (2009).</li><li>Li, M., Wagner, K., Furth, P. A., Ip, M., Asch, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+primary+mammary+epithelial+cells+and+transfection+by+viral+and+nonviral+methods.">Preparation of primary mammary epithelial cells and transfection by viral and nonviral methods.</a> Methods in Mammary Gland Biology and Breast Cancer. , (2000).</li><li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+stem-cell-driven+regeneration+in+mammals.">Imaging stem-cell-driven regeneration in mammals.</a> Nature. 453, 345-351 (2008).</li><li>Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+single-cell+imaging+of+mammalian+stem+cells.">Long-term single-cell imaging of mammalian stem cells.</a> Nature Methods. 8, S30-S35 (2011).</li><li>Eilken, H. M., Nishikawa, S. -. I., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+single-cell+imaging+of+blood+generation+from+haemogenic+endothelium.">Continuous single-cell imaging of blood generation from haemogenic endothelium.</a> Nature. 457, 896-900 (2009).</li><li>Kokkaliaris, K. D., Loeffler, D., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+tracking+hematopoiesis+at+the+single-cell+level.">Advances in tracking hematopoiesis at the single-cell level.</a> Current opinion in hematology. , (2012).</li><li>Rieger, M. A., Hoppe, P. S., Smejkal, B. M., Eitelhuber, A. C., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+cytokines+can+instruct+lineage+choice.">Hematopoietic cytokines can instruct lineage choice.</a> Science. 325, 217-218 (2009).</li><li>Rieger, M. A., Schroeder, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instruction+of+lineage+choice+by+hematopoietic+cytokines.">Instruction of lineage choice by hematopoietic cytokines.</a> Cell Cycle. 8, 4019-4020 (2009).</li><li>Heinrich, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+subtype-specific+neurons+from+postnatal+astroglia+of+the+mouse+cerebral+cortex.">Generation of subtype-specific neurons from postnatal astroglia of the mouse cerebral cortex.</a> Nat. Protoc. 6, 214-228 (2011).</li></ol>

Критические шаги Важно, чтобы молочные железы собирают из мышей того же возраста, для контроля за возрастной изменчивости молочной эпителиальных поведение клетки. При посеве клеток, такое же количество клеток должны быть покрыты в каждую лунку для каждого эксперимента. ?...

Генно-инженерные модели мыши являются инструментами, изучить и понять, как различные генетические повреждения вклад в риск развития рака молочной железы. Например, генетически модифицированных мышах показали, что сочетание трех факторов: потеря полнометражный рака молочной железы 1, раннее начало (BRCA1) ген в эпителиальные клетки молочной железы, опухоли белка р53 (ТР53) зародышевой линии гаплонедостаточность и молочной эпителиальных целевые клетки до регулируемого альфа-рецептора эстрогена (ERA) выражение результатов в развитии рака молочной железы в 100% BRCA1 floxed (F) 11/f11/Mouse молочной Вирус опухоли (MMTV) -Cre/p53 + / -/tetracycline-operator ( тет-ор) -ER/MMTV-reverse тетрациклин трансактиватор (rtTA мышей в возрасте 12 месяцев по сравнению с более низких процентах сообщили в BRCA1 f11/f11/MMTV-Cre/p53 + / - мышей без эпоху чрезмерной экспрессии (~ 50 - 60%) и BRCA1 f11/f11/MMTV-Cre мышей без гена ТР53 haploinsufтивность (&lt;5%) 1. Динамические покадровой визуализации поведения предраковых первичной эпителиальные клетки молочной железы показывает различия в поведении клетки, которые не так легко оценены в статических срезов. Изменения в пролиферации и дифференцировки наблюдается в первичных клеток молочной железы из человеческих носителей мутации BRCA1. 2 Создание одноклеточных суспензий первичных эпителиальные клетки молочной железы из нормальных и генетически модифицированных мышей формируются путем ферментативного диссоциации удаленной ткани молочной железы. 3 замедленной просмотре изображений для оценки механизма и сроков появления клетки колонии и заболеваемости морфологические изменения в клетках, в том числе эпителиальных мезенхимальных перехода (EMT) и апоптоза. Генерация карт судьбы клеток, количественное промежуток времени между клеточных делений (ячейка жизни), и определение моделей клеточного деления облегчена за счет использования одноклеточных слежения. TimmОтслеживание Tool &#39;ы (ТТТ) является общедоступной программного обеспечения, используемого для создания одной ячейки карты судьбы. Его полезность для выяснения механизмов клеточной судьбе было установлено 4,5 изучение нормальных гемопоэтических стволовых клеток, развитие 6-9 и генерации нейронов 10.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> EpiCult-B Базальная Мышь среднего </td><td> StemCell технологий </td><td> 05610 </td><td></td></tr><tr><td> EpiCult-B распространения добавки мышь </td><td> StemCell технологий </td><td> 05612 </td><td></td></tr><tr><td> рекомбинантного человеческого эпидермального фактора роста (rhEGF) </td><td> StemCell технологий </td><td> 02633 </td><td></td></tr><tr><td> Коллагеназы / Гиалуронидаза </td><td> StemCell технологий </td><td> 07912 </td><td></td></tr><tr><td> Одноразовые Scapels </td><td> Перо </td><td> 2975 # 10 </td><td></td></tr><tr><td> Сбалансированный солевой Хэнкса решение </td><td> StemCell технологий </td><td> 37150 </td><td></td></tr><tr><td>mmonium хлорид </td><td> StemCell технологий </td><td> 07800 </td><td></td></tr><tr><td> Tryspin-EDTA </td><td> StemCell технологий </td><td> 07901 </td><td></td></tr><tr><td> Диспазы </td><td> StemCell технологий </td><td> 07913 </td><td></td></tr><tr><td> ДНКазы I </td><td> StemCell технологий </td><td> 07900 </td><td></td></tr><tr><td> 40 мкм фильтр клетке </td><td> StemCell технологий </td><td> 27305 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> StemCell технологий </td><td> 06100 </td><td></td></tr><tr><td> PenStrep </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td><td></td></tr></tbody></table>

time-lapse imaging of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer

Время изображений в заданный промежуток может быть использован для сравнения поведения культурного первичной предраковых эпителиальные клетки молочной железы, полученных из различных генно-инженерных мышей модели рака молочной железы. Например, время между клеточных делений (ячейка жизни), апоптозе числа клеток, эволюцию морфологических изменений, и механизм образования колоний может быть определена количественно и по сравнению с клетками, несущими специфических генетических поражений. Первичный молочной эпителиальных клеточных культур создаются из молочных желез без ощутимой опухоли. Железы тщательно резекции с четким разделением от соседних мышц, лимфатических узлах удаляют, и одно-клеточные суспензии обогащенных молочных эпителиальные клетки порождаются измельчения ткани молочных желез следует ферментативного разложения и фильтрации. Single-клеточной суспензии высевали и помещаются непосредственно под микроскопом в камере инкубатора для живых клеток изображений. Шестнадцать 650 мкм х 700 мкм поля в конфигурации 4x4 друг от WELL из 6-луночный планшет загружаются через каждые 15 мин в течение 5 дней. Покадровый изображения рассматриваются непосредственно измерить сотовой поведения, которое может включать в себя механизм и частоты образования клеток колонии в течение первых 24 ч посеве клеток (агрегации по сравнению с клеточной пролиферации), частота апоптоза, и постепенно морфологических изменений. Single-клетки слежения используется для создания клеточной судьбы карт для измерения индивидуальной жизни клетки и исследование моделей клеточного деления. Количественные данные статистически проанализированы на предмет существенных различий в поведении связаны с определенными генетическими повреждениями.

Эпителиальные клетки фибробластов и можно отличить по морфологии клеток. Эпителиальные клетки имеют форму шестигранника (рис. 1А-B) и формы клеточных колоний (рис. 1А). Фибробласты, типа стромальных клеток, имеют удлиненную морфологию (рис. 1С). К?...

Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer at JoVE.com

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Время изображений в заданный промежуток используется для оценки поведения первичной предраковых молочной эпителиальных клеток, полученных из генетически модифицированных мышей моделей риска рака молочной железы, чтобы определить, есть ли корреляция между конкретных поведенческих параметров и различных генетических поражений.

Время изображений в заданный промежуток первичной предраковых эпителиальные клетки молочной железы, полученных из генно-инженерных мышей модели рака молочной железы

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

В естественных условиях Биолюминесценция изображения опухоли Гипоксия Динамика груди метастазы рака мозга у мышей

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts (CAFs) from Human Mammary Fibroblasts

Experimental Generation of Carcinoma-Associated Fibroblasts CAFs from Human Mammary Fibroblasts

Экспериментальные Генерация Карцинома-Associated Фибробласты (CAFS) из молочной железы человека Фибробласты

Carcinomas are complex tissues comprised of neoplastic cells and a non-cancerous compartment referred to as the 'stroma'. The stroma consists of ...

Live Imaging of Drug Responses in the Tumor Microenvironment in Mouse Models of Breast Cancer

Жить изображений на наркотики Ответы на микроокружение опухоли в мышиных моделях рака молочной железы

The tumor microenvironment plays a pivotal role in tumor initiation, progression, metastasis, and the response to anti-cancer therapies. Three-dimensional ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Пациент Производные культуре клеток и выделение CD133<sup&gt; +</sup&gt; Предполагаемые раковых стволовых клеток от меланомы

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

Profiling of Estrogen-regulated MicroRNAs in Breast Cancer Cells

Профилирование Эстроген-регулируемых микроРНК в клетках рака молочной железы

Estrogen plays vital roles in mammary gland development and breast cancer progression. It mediates its function by binding to and activating the estrogen ...

Method for Obtaining Primary Ovarian Cancer Cells From Solid Specimens

Способ получения первичных клеток рака яичников от твердых образцов

Reliable tools for investigating ovarian cancer initiation and progression are urgently needed. While the use of ovarian cancer cell lines remains a ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mammary Fat Pad of Mice to Study Tumor Growth.

Ортотопическая инъекции клеток рака молочной железы в молочной жировой ткани мышей для изучения роста опухоли.

Breast cancer growth can be studied in mice using a plethora of models. Genetic manipulation of breast cancer cells may provide insights into the ...

Tracking the Mammary Architectural Features and Detecting Breast Cancer with Magnetic Resonance Diffusion Tensor Imaging

Отслеживание молочной архитектурных особенностей и выявление рака молочной железы с магнитно-резонансной тензора диффузии томография

Breast cancer is the most common cause of cancer among women worldwide. Early detection of breast cancer has a critical role in improving the quality of ...

High-frequency Ultrasound Imaging of Mouse Cervical Lymph Nodes

Высокочастотный ультразвуковой визуализации мыши шейных лимфатических узлов

High-frequency ultrasound (HFUS) is widely employed as a non-invasive method for imaging internal anatomic structures in experimental small animal ...

An Organotypic High Throughput System for Characterization of Drug Sensitivity of Primary Multiple Myeloma Cells

Органотипической Высокая пропускная система для характеризации наркотиками чувствительности первичных клетки множественной миеломы

In this work we describe a novel approach that combines ex vivo drug sensitivity assays and digital image analysis to estimate chemosensitivity and ...