Name: in vitro organoid culture of primary mouse colon tumors
Uploaded: 2013-05-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי מענקים לYMS מהמכונים הלאומי לבריאות (CA148828), האוניברסיטה של ​​מרכז מישיגן העיכול פפטיד, ומחקר ג&#39;פרי א קולבי סרטן מעי גס ואת קרנות טום יו הזיכרון של המרכז לסרטן של אוניברסיטת מישיגן.

1. בידוד גידול במעי גס ודיסוציאציה הסלולרי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יכול להיות מבודד מכל גידולים במעי מודל סרטן מעי גס או ספורדי מושרה טיפול. העכברים צריכים להיות מורדמים עם CO 2. נקודתיים נאספות אז, סמוקות קר מלוח פוספט שנאגרו (PBS) ונפתחו lo...

<ol>
	<li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+expansion+of+epithelial+organoids+from+human+colon,+adenoma,+adenocarcinoma,+and+Barrett's+epithelium.">Long-term expansion of epithelial organoids from human colon, adenoma, adenocarcinoma, and Barrett's epithelium.</a> Gastroenterology. 141, 1762-1772 (2011).</li><li>Creamer, B., Shorter, R. G., Bamforth, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+turnover+and+shedding+of+epithelial+cells.+I.+The+turnover+in+the+gastro-intestinal+tract.">The turnover and shedding of epithelial cells. I. The turnover in the gastro-intestinal tract.</a> Gut. 2, 110-118 (1961).</li><li>Crosnier, C., Stamataki, D., Lewis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organizing+cell+renewal+in+the+intestine:+stem+cells,+signals+and+combinatorial+control.">Organizing cell renewal in the intestine: stem cells, signals and combinatorial control.</a> Nat. Rev. Genet. 7, 349-359 (2006).</li><li>Medema, J. P., Vermeulen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+stem+cells+in+intestinal+homeostasis+and+cancer.">Microenvironmental regulation of stem cells in intestinal homeostasis and cancer.</a> Nature. 474, 318-326 (2011).</li><li>Korinek, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+epithelial+stem-cell+compartments+in+the+small+intestine+of+mice+lacking+Tcf-4.">Depletion of epithelial stem-cell compartments in the small intestine of mice lacking Tcf-4.</a> Nat. Genet. 19, 379-383 (1998).</li><li>Pinto, D., Gregorieff, A., Begthel, H., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Canonical+Wnt+signals+are+essential+for+homeostasis+of+the+intestinal+epithelium.">Canonical Wnt signals are essential for homeostasis of the intestinal epithelium.</a> Genes Dev. 17, 1709-1713 (2003).</li><li>Kim, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitogenic+influence+of+human+R-spondin1+on+the+intestinal+epithelium.">Mitogenic influence of human R-spondin1 on the intestinal epithelium.</a> Science. 309, 1256-1259 (2005).</li><li>Reya, T., Clevers, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+signalling+in+stem+cells+and+cancer.">Wnt signalling in stem cells and cancer.</a> Nature. 434, 843-850 (2005).</li><li>Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+statistics,+2012.">Cancer statistics, 2012.</a> CA Cancer J. Clin. 62, 10-29 (2012).</li><li>Sesink, A. L., Termont, D. S., Kleibeuker, J. H., Vander Meer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+meat+and+colon+cancer:+the+cytotoxic+and+hyperproliferative+effects+of+dietary+heme.">Red meat and colon cancer: the cytotoxic and hyperproliferative effects of dietary heme.</a> Cancer Res. 59, 5704-5709 (1999).</li><li>Fearon, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+genetics+of+colorectal+cancer.">Molecular genetics of colorectal cancer.</a> Annu. Rev. Pathol. 6, 479-507 (2011).</li><li>Nishisho, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+of+chromosome+5q21+genes+in+FAP+and+colorectal+cancer+patients.">Mutations of chromosome 5q21 genes in FAP and colorectal cancer patients.</a> Science. 253, 665-669 (1991).</li><li>Xue, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia-inducible+factor-2alpha+activation+promotes+colorectal+cancer+progression+by+dysregulating+iron+homeostasis.">Hypoxia-inducible factor-2alpha activation promotes colorectal cancer progression by dysregulating iron homeostasis.</a> Cancer Res. 72, 2285-2293 (2012).</li><li>Liu, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+AXIN2+cause+colorectal+cancer+with+defective+mismatch+repair+by+activating+beta-catenin/TCF+signalling.">Mutations in AXIN2 cause colorectal cancer with defective mismatch repair by activating beta-catenin/TCF signalling.</a> Nat. Genet. 26, 146-147 (2000).</li><li>Morin, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+beta-catenin-Tcf+signaling+in+colon+cancer+by+mutations+in+beta-catenin+or+APC.">Activation of beta-catenin-Tcf signaling in colon cancer by mutations in beta-catenin or APC.</a> Science. 275, 1787-1790 (1997).</li><li>Brattain, M. G., Fine, W. D., Khaled, F. M., Thompson, J., Brattain, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+of+malignant+cells+from+a+human+colonic+carcinoma.">Heterogeneity of malignant cells from a human colonic carcinoma.</a> Cancer Res. 41, 1751-1756 (1981).</li><li>Leibovitz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Classification+of+human+colorectal+adenocarcinoma+cell+lines.">Classification of human colorectal adenocarcinoma cell lines.</a> Cancer Res. 36, 4562-4569 (1976).</li><li>Willson, J. K., Bittner, G. N., Oberley, T. D., Meisner, L. F., Weese, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture+of+human+colon+adenomas+and+carcinomas.">Cell culture of human colon adenomas and carcinomas.</a> Cancer Res. 47, 2704-2713 (1987).</li><li>Brattain, M. G., Strobel-Stevens, J., Fine, D., Webb, M., Sarrif, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+mouse+colonic+carcinoma+cell+lines+with+different+metastatic+properties.">Establishment of mouse colonic carcinoma cell lines with different metastatic properties.</a> Cancer Res. 40, 2142-2146 (1980).</li><li>Ikubo, A., Aoki, Y., Nagai, E., Suzuki, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+metastatic+variant+of+a+mouse+colon+carcinoma+cell+line,+LM17+and+its+response+to+GM-CSF+gene+therapy.">Highly metastatic variant of a mouse colon carcinoma cell line, LM17 and its response to GM-CSF gene therapy.</a> Clin. Exp. Metastasis. 17, 849-855 (1999).</li><li>Basant, S. K., Rinesh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+Of+Animal+Cell+Culture.">Principles Of Animal Cell Culture.</a> Student Compendium. Textbook Student Edition. 6, 61-96 (2008).</li><li>Vachon, P. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+state-selective+roles+of+p38+isoforms+in+human+intestinal+epithelial+cell+anoikis.">Differentiation state-selective roles of p38 isoforms in human intestinal epithelial cell anoikis.</a> Gastroenterology. 123, 1980-1991 (2002).</li><li>Darido, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+claudin-7+regulation+by+Tcf-4+and+Sox-9+disrupts+the+polarity+and+increases+the+tumorigenicity+of+colorectal+cancer+cells.">Defective claudin-7 regulation by Tcf-4 and Sox-9 disrupts the polarity and increases the tumorigenicity of colorectal cancer cells.</a> Cancer Res. 68, 4258-4268 (2008).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+Lgr5+stem+cells+build+crypt-villus+structures+in+vitro+without+a+mesenchymal+niche.">Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche.</a> Nature. 459, 262-265 (2009).</li><li>Yui, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+engraftment+of+colon+epithelium+expanded+in+vitro+from+a+single+adult+Lgr5(+)+stem+cell.">Functional engraftment of colon epithelium expanded in vitro from a single adult Lgr5(+) stem cell.</a> Nat. Med. 18, 618-623 (2012).</li><li>Anderson, E. R., Xue, X., Shah, Y. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+hypoxia-inducible+factor-2alpha+(HIF-2alpha)+is+critical+for+efficient+erythropoiesis.">Intestinal hypoxia-inducible factor-2alpha (HIF-2alpha) is critical for efficient erythropoiesis.</a> J. Biol. Chem. 286, 19533-19540 (2011).</li><li>Sato, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paneth+cells+constitute+the+niche+for+Lgr5+stem+cells+in+intestinal+crypts.">Paneth cells constitute the niche for Lgr5 stem cells in intestinal crypts.</a> Nature. 469, 415-418 (2011).</li><li>Kondo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retaining+cell-cell+contact+enables+preparation+and+culture+of+spheroids+composed+of+pure+primary+cancer+cells+from+colorectal+cancer.">Retaining cell-cell contact enables preparation and culture of spheroids composed of pure primary cancer cells from colorectal cancer.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 6235-6240 (2011).</li><li>Clevers, H., Nusse, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/beta-catenin+signaling+and+disease.">Wnt/beta-catenin signaling and disease.</a> Cell. 149, 1192-1205 (2012).</li></ol>

הפרוצדורות שתוארו בפרוטוקול זה תאפשר לבידוד והתרבות של גידולים במעי גס עכבריים ראשוניים. הפרוטוקול מותאם מעבודת הזרע נעשתה על ידי ד&quot;ר קבוצת Clevers 1,24,27. אנו מותאמים זמן העיכול וריכוז collagenase לקבל תשואה טובה יותר של organoids הסרטניים. השלבים הקריטיים כוללים עיכול תא...

תאי אפיתל במעי להתרבות ולהתהפך בקצב בלתי רגיל, outpacing כל רקמות אחרות בגוף חוליות 2,3. את התאים המתחלקים, כולל תאי גזע מעיים (ISC) ותאי מעבר-הגברה להתמיין גם הפרשה (גביע, פנט וenteroendocrine) תאים או enterocytes 3. ISC ממוקם בבסיס קריפטה. תאי פנט לרדת לעומקו של מאורות והם האריכו ימים, ואילו משפחות אחרות להעביר כלפי מעלה לסיסים 3,4. כאן התאים נחשפים לתוכן המעיים, כולל חיידקים ולשפוך מהקצוות סיסי באמצעות מנגנון אפופטוטיים-Induced anoikis. אמנם חסר סיסי המעי הגס ותאי פנט, המנגנון לשמירה על הומאוסטזיס דומה 4. מסלול איתות Wnt היה מעורב במשחק תפקיד מכריע בהתפשטות מעיים וISC תחזוקה 4. מחיקה של הדואר גורם שעתוק TCF4, מפעיל במורד הזרם של איתות Wnt, מוביל לאובדן של תאי גזע במעי ולאחר מכן פירוק של הרקמה 5. בדומה לכך, ביטוי מהונדס של DKK1 מעכבי Wnt מפחית את התפשטות אפיתל וכלה את שושלות תאי הפרשה 6. לעומת זאת, ביטוי יתר של אגוניסט Wnt R-spondin-1 פרוליפרציה חזקה ומהירה של תאי הקריפטה מעיים 7. לאור החשיבות של איתות Wnt להומאוסטזיס מעיים, מוטציות מסלול Wnt הם נצפו לעתים קרובות בסרטן מעי גס 8. סרטן המעי הגס הוא הגורם שלישי למוות מהסרטן בארצות הברית 9. הצריכה תזונתית עודפת עם בשר אדום ואלכוהול, פעילות גופנית מופחתת, ועוברת בירושה ומוטציות סומטיות נחשבות לגורמי סיכון לסרטן מעי גס 10,11. Coli (APC) גן polyposis adenomatous, גורם איתות Wnt מפתח, הוא מוטציה ברוב של הרשות הפלסטיניתtients עם משפחתי, סדיר, וסרטן מעי גס קוליטיס הקשורים 12,13. מוטציות של גורמים אחרים שהיו מעורבים במסלול איתות Wnt כולל Axin2 וβ-catenin הם נצפו גם בסרטן מעי גס 14,15. עם זאת, המנגנון המדויק והטיפול יעיל לטיפול בסרטן המעי הגס הם עדיין חסרים. כדי להקל על החקירה של המנגנונים המולקולריים לסרטן מעי גס, שורות תאי סרטן מעי גס אנושיות המייצגות את השלבים השונים של התקדמות הסרטן שונים משפיר לסוג תא אגרסיבי כבר הוקם 16-18. שורות תאי סרטן מעי גס גרורתי עכבר עם מאפיינים שונים זמינות גם 19,20. עם זאת, תאים ראשוניים או תרבויות organoid עדיפים על שורות תאים שינו כי הם מחקים באופן הדוק במצב vivo ולייצר יותר רלוונטית מבחינה פיזיולוגית נתונים 21. רוב שורות תאים שמקורם מעי גס, סרטן לגדול כmonolayer מחוברת לצלחת או כהשעיות תא, lackinגרם של נטייה הפסגה-basolateral והדוקים צמתים בין תאים. כמו כן, תאי אפיתל במעי רגילים וגידול in vivo לעבור צורה ספונטנית של anoikis מכונה אפופטוזיס כמו התאים המובחנים להגיע לטיפים והסיסיים הם לשפוך 22. תכונות אלה קשה לסכם בשורות תאים, אבל הם חשובים בתהליך ההתפתחות של סרטן מעי גס 23. תכונות אלה נשמרות בorganoids הראשוני. בנוסף, תרבויות organoid הסרטניים לספק מערכת יעילה להערכת תפקודים אוטונומיים של גנים סרטניים בהשוואה במחקרי vivo. מניפולציה גנטית in vivo של המעי היא תהליך גוזל זמן בעיקר באמצעות יצירת מהונדס ו / או עכברים בנוקאאוט באמצעות נהגי מעי ספציפיים. עם זאת, את organoids הסרטניים הם בקלות נוחה למניפולציות גנטיות נגיפיות בתיווך ובכך כלי נהדר להערכת מנגנונים מולקולריים מדויקים. תרבויות hav organoid סרטניים במעי העיקרידואר הוכח כטכניקה אפשרית ורבת עוצמה. תרבית תאי מעי העיקרית יכולה להקים organoids מעיים פונקציונלי עם קבר ובעל מבנה סיסים במבחנה ממבוגר יחיד Lgr5 + תאי גזע 24. ניתן להשתיל organoids אלה וengrafted לרקמת מעי פגום להתחדשות 25. הסתגלות נוספת של תנאי התרבות עשתה organoids אפיתל דומה ממעי גס ובמעי הדק עכבר אנושי ומעי גס אפשרי 1. לתרבות העיקרית נורמלית מעי גס האפיתל, מדיום התרבות בסיסית, כמו גם גורמי גדילה כולל EGF, Noggin, R-spondin וWnt3a הם חיוניים, ואילו מדיום התרבות בסיסי וEGF מספיק לגידול organoids גידול במעי עכבר העיקרי 1. כאן אנו מתארים פרוטוקול מפורט לבודד, תרבות, וליצור organoids גידול במעי הגס.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name of Reagent/Material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Basement Membrane Matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td>5 mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type IV</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004188</td>
			<td>375 U/mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17105-041</td>
			<td>1.8 U/mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM/F12</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>12634010</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epidermal Growth Factor (EGF), Murine, Natural</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>53003-018</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 Supplement</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17502-048</td>
			<td>100 x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>17504-044</td>
			<td>50 x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax-I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-079</td>
			<td>100x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Acetylcysteine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9165-5G</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco's Modified Eagle Medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11965-092</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PicoPureTM RNA Isolation Kit</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>KIT0204</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro organoid culture of primary mouse colon tumors

כמה שורות תאי סרטן מעי גס אנושיות ועכבריות כבר הוקמו, יושרה פיזיולוגית של גידולים במעי גס, כגון מספר שכבות של תאים הבזליים, קוטביות-apical, יכולת להבחין וanoikis אינה נשמרת בשורות תאים שמקורם בסרטן מעי גס. המחקר הנוכחי מדגים שיטה לorganoids culturing העיקרי עכבר הסרטניים במעי הגס המותאמים מסאטו T et al. 1, השומר על תכונות הפיזיולוגיות חשובות של גידולים במעי גס. שיטה זו מורכבת מאוסף עכבר מעי גס גידול רקמות, מעי גס הנורמלית הסמוכה האפיתל דיסוציאציה, מעי גס גידול עיכול תאים לתאים בודדים, הטבעת תאים סרטניים במעי הגס לmatrigel, והתרבות סלקטיבית המבוסס על העיקרון שתאים סרטניים לשמור על צמיחה בהגבלת תנאים תזונתיים בהשוואה למצב נורמלי תאי האפיתל. את organoids הגידול הראשוני אם בודדו מעכברים מהונדסים גנטי לספק מערכת שימושית מאוד להעריך funct אוטונומי גידוליון של גנים ספציפיים. יתר על כן, את organoids הסרטניים ניתן למניפולציה גנטית על ידי וירוס המדיטציה מסירת גן; מסלולי איתות ולכן מעורבים בגידול במעי הגס יכולים להיות גם נחקרו בהרחבה על ידי ביטוי יתר או מציאה. תרבות organoids גידול הראשונית מספקת אמצעי רלוונטי ואפשרי פיסיולוגיים ללמוד את המנגנונים ושיטות טיפוליות לגידול במעי גס.

מהלך הזמן של היווצרות organoid גידול במעי גס מדקות APC בן שלושת חודשים / + עכבר מוצג באיור 1. ביום 0, תאים בודדים יכולים להיבחן כמה שעות לאחר ציפוי (איור 1 א). ליום 1 ביום, שרדו תאי האפיתל גידול במעי הגס עם גרעינים עקשן יכול להיבחן. ביום 3, בגודל ?...

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors at JoVE.com

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

שיטה פשוטה להקמת organoid גידול במעי העכברי העיקרי מתוארת. שיטה זו מנצלת את התכונה שתאים סרטניים במעי הגס לשרוד ולגדול לתוך organoids בתקשורת המכילות גורמי צמיחה מוגבלים, ואילו מעי גס נורמלי אפיתל לא.

בתרבות Organoid מבחנה של גידולים במעי גס עכבר העיקרי

Several  human and murine colon cancer cell lines have been established, physiologic  integrity of colon tumors such as multiple cell layers, basal-apical ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vitro Organoid Culture of Primary Mouse Colon Tumors

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

הקמה התפשטות של גידולים רטינובלסטומה האדם עכברים החיסון לקויה

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

הערכה של ספיגת nanoparticle ב גידולים בזמן אמת באמצעות הדמיה Intravital

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Skin Punch Biopsy Explant Culture for Derivation of Primary Human Fibroblasts

תרבות explant עור אגרוף ביופסיה לגזירה של fibroblasts אדם היסודי

Tissues and cell lines derived from an individual with disease are ideal sources to study disease-related cellular phenotypes. Patient-derived fibroblasts ...

Primary Culture of Human Vestibular Schwannomas

העיקרית של תרבות האנושית שיווי המשקל schwannomas

Vestibular schwannomas (VSs) represent Schwann cell (SC) tumors of the vestibular nerve, compromising 10% of all intracranial neoplasms. VSs occur in ...

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Ex Vivo Treatment Response of Primary Tumors and/or Associated Metastases for Preclinical and Clinical Development of Therapeutics

Ex Vivo טיפול תגובה של גידולים ראשוניים ו / או הקשורים גרורות לפרה קלינית וקליני של Therapeutics

The molecular analysis of established cancer cell lines has been the mainstay of cancer research for the past several decades. Cell culture provides both ...

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

In vitro Functional Characterization of Mouse Colorectal Afferent Endings

באפיון פונקציונלי מבחנה של עכבר המעי הגס מביא Endings

This video demonstrates in detail an in vitro single-fiber electrophysiological recording protocol using a mouse colorectum-nerve preparation. The ...

Clinicopathological Analysis of miRNA Expression in Breast Cancer Tissues by Using miRNA In Situ Hybridization

Clinicopathological Analysis of miRNA Expression in Breast Cancer Tissues by Using miRNA In Situ Hybridization

ניתוח Clinicopathological ביטוי מירנה שד רקמות סרטן על ידי שימוש מירנה<em&gt; באתרו</em&gt; כלאה

In this article, we describe a detailed protocol for miRNA detection in breast cancer tissue using in situ hybridization with a digoxigenin-labelled LNA ...

Isolation and Culture of Primary Endothelial Cells from Canine Arteries and Veins

בידוד והתרבות של תאי האנדותל ראשיים מן העורקים וורידים לכלבים

Cardiovascular disease is studied in both human and veterinary medicine. Endothelial cells have been used extensively as an in vitro model to study ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced נפיחות מעיים Organoids: An<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay עבור הערכת תגובה לתרופה בחולי סיסטיק פיברוזיס

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

Dissection and Explant Culture of Murine Allantois for the In Vitro Analysis of Allantoic Attachment

דיסקציה והתרבות Explant של Allantois מאתר לניתוח במבחנה של קובץ מצורף Allantoic

The placenta is essential for the growth and development of mammalian embryos. For this reason, numerous genetic alterations and likely also environmental ...