Name: the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis
Uploaded: 2013-02-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis at JoVE.com

Ce travail a été soutenu par des subventions de fonctionnement aux BAV de la maladie de Crohn et la colite Foundation of Canada (CCFC) et les Instituts de recherche en santé du Canada (IRSC). Go a été financée par une bourse d&#39;études supérieures des IRSC. BAV sont les enfants souffrant de troubles intestinaux et du foie (ENFANT) Président de la Fondation de la recherche sur les MII de pédiatrie et la Chaire de recherche du Canada en gastroentérologie pédiatrique.

1. Préparation de l&#39;inoculum et Citrobacter rodentium gavage de souris <ol><li> Préparer et passer à l&#39;autoclave Luria Bertani (LB). </li><li> Obtenir viable C. rodentium à partir d&#39;un stock de glycerol congelé et sans stries sur gélose LB à l&#39;aide d&#39;une anse stérile inoculation ou de pointe de la pipette. Incuber à 37 ° C pendant la nuit. Inoculer 3 ml de bouillon LB stérile dans un tube de culture faucon avec des colonies de la plaque de LB en utilisant une boucle d&#...

<ol>
	<li>Nell, S., Seurbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 564-577 (2010).</li><li>Cario, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+Receptors+in+Inflammatory+Bowel+Diseases:+A+Decade+Later.">Toll-like Receptors in Inflammatory Bowel Diseases: A Decade Later.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 16 (9), 1583-1597 (2010).</li><li>Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease.">Animal Models of Inflammatory Bowel Disease.</a> Annals New York Academy of Sciences. , 1027-38 (2006).</li><li>Mundy, R., MacDonald, T. 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P., Clare, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+B+lymphocytes+and+CD4++T+cells+in+immunity+to+infection+by+the+attaching+and+effacing+pathogen+Citrobacter+rodentium.">Central role for B lymphocytes and CD4+ T cells in immunity to infection by the attaching and effacing pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 71 (9), 5077-5086 (2003).</li><li>Ahmed, I., Chandrakesan, P., Tawfik, O., Xia, L., Anant, S., Umar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+Roles+of+Notch+and+Wnt/&#946;-Catenin+Pathways+in+the+Regulation+of+Hyperplasia+and/or+Colitis+in+Response+to+Bacterial+Infection.">Critical Roles of Notch and Wnt/&#946;-Catenin Pathways in the Regulation of Hyperplasia and/or Colitis in Response to Bacterial Infection.</a> Infection &amp; Immunity. 80 (9), 3107-3121 (2012).</li></ol>

Citrobacter rodentium infection constitue un modèle précieux pour l&#39;étude de deux maladies infectieuses et de la colite chez la souris. Ce modèle unique permet de caractériser des réponses de l&#39;hôte, ainsi que les propriétés pathogènes de bactéries. Les étapes décrites dans ce protocole détail l&#39;utilisation réussie de ce modèle. Il ya plusieurs étapes critiques de ce protocole à garder à l&#39;esprit lors de l&#39;induction de colite et de l&#39;analys...

L&#39;infection par des bactéries pathogènes entériques déclenche gastro-intestinal (GI) l&#39;inflammation, ainsi que pathologie intestinale et la physiopathologie, y compris la diarrhée intestinale et dysfonction de la barrière épithéliale. Les mécanismes de virulence des bactéries pathogènes qui colonisent le tractus gastro-intestinal de leurs hôtes, ainsi que les réponses spécifiques de l&#39;hôte qui défendent contre de telles infections sont mal comprises, mais les progrès récents dans la modélisation des infections entériques bactériennes ont commencé à nous aider dans notre compréhension de ces processus. Les bactéries entériques ont également été associés à des maladies inflammatoires de l&#39;intestin (MICI). Maladie de Crohn Le MII (CD) et UC sont des maladies complexes d&#39;étiologie inconnue, caractérisée par une inflammation intestinale chronique et des lésions tissulaires. De nombreux modèles murins d&#39;inflammation intestinale existent, d&#39;une inflammation spontanée des souches génétiquement modifiés, tels que l&#39;IL10 - / - souris, aux défis chimiques avec des composés tels que le sulfate de dextrane sodique (DSS) et dinitrobenzene sulfonique (DNBS) 1. Il a été émis l&#39;hypothèse que les réponses inadaptées chroniques inflammatoires présentes chez les patients MICI se développer en individus génétiquement sensibles à l&#39;exposition anormale du système immunitaire intestinal muqueuse de bactéries entériques 2, donc l&#39;étude des modèles de colite infectieuse offre également un potentiel important pour la définition de l&#39;hôte potentiellement pathogène . réponses à des bactéries entériques Citrobacter rodentium colite induite est l&#39;un des rares modèles de colite infectieuse qui a été bien caractérisés 1,3, ce qui permet l&#39;analyse des réponses de l&#39;hôte aux bactéries entériques et de la compréhension de nouveaux mécanismes potentiels de la pathogenèse de MICI, une étape essentielle dans le développement de nouveaux traitements préventifs et thérapeutiques. C. rodentium est une gram négatif attachant et effaçant (A / E), murin pathogène bactérien spécifique qui est étroitement liée à l&#39;humain importantentéropathogène pathogènes E. coli (EPEC) et entérohémorragique E. coli (EHEC) 3-8. La famille d&#39;un des agents pathogènes / E intimement joindre à la membrane de la cellule hôte apicale de l&#39;épithélium du caecum et du côlon, la formation d&#39;un non-invasive piédestal structure en forme de la cellule hôte. Provocation par voie orale avec C. rodentium de 10 8 -10 9 organismes produisant un modèle robuste d&#39;une colite infectieuse caractérisée par une hyperplasie du côlon ou de l&#39;allongement des cryptes, infiltration mononucléaire cellules immunitaires et l&#39;épuisement des cellules caliciformes 3,4. Le site initial de la colonisation, quelques heures après la provocation, est le patch du caecum, suivie par une progression dans le côlon distal 2 à 3 jours après l&#39;infection 3. Dans souches de souris immunocompétentes, l&#39;élimination de l&#39;agent pathogène est atteinte 3 à 4 semaines après l&#39;infection 1,3,4. Cependant, de nombreuses souches génétiquement modifiés, c.-à-gène déficient ou KO (- / -) des souris, ont été trouvés pour afficher augsed susceptibilité à l&#39;infection causant des dommages exagérés et / ou d&#39;une infection chronique et l&#39;inflammation 9-14. L&#39;utilisation de ce modèle de colite infectieuse chez ces souches huitièmes de finale, beaucoup manquent innées protéines de signalisation, a été indispensable pour révéler plusieurs protéines de l&#39;hôte faisant partie intégrante de la résolution de l&#39;infection et de l&#39;inflammation intestinale.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom de réactif / Matériel </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Luria Broth </td><td> ABM </td><td> G247 </td><td> Ajouter 25 g de poudre de LB pour 1L d&#39;eau. Autoclave avant d&#39;utiliser. </td></tr><tr><td> Plaque de fond carrée avec grille </td><td> Pêcheur </td><td> 08 à 757-11A </td><td></td></tr><tr><td> Tube de culture Falcon </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> Ampoule à pointe aiguille de gavage gastrique </td><td> Outils Fine Science </td><td> 18060-20 </td><td></td></tr><tr><td> Seringue de 1 ml </td><td> BD Biosciences </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 kDa FITC-dextran </td><td> Sigma </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> Acide citrique </td><td> Sigma </td><td> C7129 &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> Le citrate de sodium </td><td> Pêcheur </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> Dextrose </td><td> Pêcheur </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> Acide citrate dextrose </td><td></td><td></td><td> 20 mM d&#39;acide ctiric, 110 mM de citrate de sodium, 5 mM de dextrose </td></tr><tr><td> Noir Plaque 96 puits </td><td> Pêcheur </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> Perles en métal (5 mm) </td><td> Qiagen </td><td> 69989 </td><td></td></tr><tr><td> Formol à 10% </td><td> Pêcheur </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> Flacon de 5 ml </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> Hématoxyline </td><td> Pêcheur </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> Eosine </td><td> Pêcheur </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> Xylène </td><td> Pêcheur </td><td&gt; HC700-1GAL </td><td></td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Sigma </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Cuve de coloration Coplin </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> Tampon citrate de sodium </td><td></td><td></td><td> 10 mM de citrate de sodium, 0,05% Tween 20, pH 6,0 </td></tr><tr><td> Stylo Pap </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de chèvre </td><td> Sigma </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> Albumine de sérum bovin (BSA) </td><td> Pêcheur </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;azoture de sodium </td><td> Sigma </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> Tampon de blocage </td><td></td><td></td><td> 2% de sérum de chèvre, 1% BSA, 0,1% de Triton X-100, 0,05% Tween 20, 0,05% de sodiumazide, PBS 0,01 M, pH 7,2, mélanger et conserver à 4 ° C. </td></tr><tr><td> Tampon de dilution d&#39;anticorps </td><td></td><td></td><td> 0,1% de Triton X-100, 0,1% de BSA, 0,05% d&#39;azoture de sodium, 0,04% d&#39;EDTA </td></tr><tr><td> Tampon de blocage tampon de dilution et d&#39;anticorps pour tir </td><td></td><td></td><td> Mêmes recettes que ci-dessus, mais sans addition de détergents (Triton X-100 et Tween 20) </td></tr><tr><td> Prolongez réactif Antifade or avec DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P-36931 </td><td></td></tr><tr><td> Lamelles de </td><td> Pêcheur </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> Incubation de table shaker </td><td> Barnstead Lab Line </td><td> Max Q4000 </td><td></td></tr><tr><td> Fluorimètre </td><td> Perkin Elmer </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> Centrifugeuse réfrigérée </td><td> Beckman Coulter </td><td> Microfuge 22R</td><td></td></tr><tr><td> Bateau à vapeur </td><td> Black &amp; Decker </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microscope à fluorescence </td><td> Zeiss </td><td> Axio Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis

Ce protocole décrit les étapes nécessaires pour produire un modèle robuste d&#39;une maladie infectieuse et la colite, ainsi que les méthodes utilisées pour caractériser l&#39;infection Citrobacter rodentium chez la souris. C. rodentium est une gram négatif, murin pathogène spécifique bactérienne qui est étroitement liée à l&#39;importance clinique humaine entéropathogène pathogènes E. coli entérohémorragique et E. coli. Lors de l&#39;infection à C. rodentium, souris immunocompétentes souffrent de la perte de poids modeste et transitoire et de la diarrhée. Histologiquement, l&#39;allongement crypte intestinale, l&#39;infiltration de cellules immunitaires, et l&#39;épuisement des cellules caliciformes sont observées. Garde d&#39;infection est atteinte après 3 à 4 semaines. Mesure de l&#39;intégrité barrière épithéliale intestinale, la charge bactérienne, et les dommages histologiques à différents moments après l&#39;infection, permettent la caractérisation des souches de souris sensibles à l&#39;infection. Le mécanisme de virulences par des bactéries pathogènes qui colonisent le tractus intestinal de leurs hôtes, ainsi que les réponses spécifiques de l&#39;hôte qui défendent contre de telles infections sont mal compris. Par conséquent, le C. rodentium modèle d&#39;infection bactérienne entérique constitue un outil précieux pour aider à la compréhension de ces processus. Les bactéries entériques ont également été associés à des maladies inflammatoires de l&#39;intestin (MICI). Il a été émis l&#39;hypothèse que les réponses inflammatoires chroniques inadaptés observés chez les patients MICI se développer en individus génétiquement sensibles après une exposition anormale du système immunitaire intestinal des muqueuses à des bactéries entériques. Par conséquent, l&#39;étude des modèles de colite infectieuse offre un potentiel important pour la définition potentiellement pathogènes réponse de l&#39;hôte aux bactéries entériques. C. rodentium colite induite est un modèle du genre rare qui permet l&#39;analyse des réponses de l&#39;hôte aux bactéries entériques, approfondir notre compréhension des mécanismes potentiels de la pathogenèse du commerce international;essentiel dans le développement de nouveaux traitements préventifs et thérapeutiques.

Au cours d&#39;une expérience d&#39;infection standard, les souris sont infectées avec environ 2,5 x 10 8 UFC par gavage de 100 pi C pendant une nuit rodentium culture. L&#39;infection des souris C57BL / 6 avec C. rodentium résultats dans la perte de poids modeste et transitoire et de la diarrhée. Bien que rare avec souris C57BL / 6, les animaux peuvent tomber malades et nécessitent l&#39;euthanasie. Par conséquent, les souris doivent être surveillés pour le degré de perte ...

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The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium infection constitue un modèle précieux pour l&#39;étude des infections bactériennes entériques ainsi que l&#39;hôte réponses immunitaires et la colite chez la souris. Ce protocole décrit la mesure du intégrité de la barrière, la charge de pathogènes et les dommages histologiques permettant la caractérisation approfondie des contributions pathogène et de l&#39;hôte à la colite infectieuse murin.

La<em&gt; Citrobacter rodentium</emModèle de souris&gt;: Étudier Contributions des agents pathogènes et l&#39;hôte de la colite infectieuse

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

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