Name: the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis
Uploaded: 2013-02-19T13:00:00
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यह काम Crohn है और कनाडा की बृहदांत्रशोथ फाउंडेशन (CCFC) और स्वास्थ्य अनुसंधान (CIHR) के लिए कनाडा के संस्थानों से ऑपरेटिंग BAV अनुदान द्वारा समर्थित किया गया. जीबी CIHR से स्नातक छात्रवृत्ति द्वारा वित्त पोषित किया गया था. BAV आंतों और लीवर (बाल) बाल चिकित्सा IBD और बाल चिकित्सा गैस्ट्रोएंटरोलॉजी में कनाडा अनुसंधान चेयर रिसर्च फाउंडेशन चेयर विकार के साथ बच्चे है.

1. Citrobacter rodentium inoculum और चूहे की मौखिक नलिका - पोषण की तैयारी <ol><li> तैयार है और आटोक्लेव Luria Bertani शोरबा (पौंड). </li><li> व्यवहार्य सी. Obtain एक जमे हुए ग्लिसरॉल स्टॉक और लकीर से लेग अगर एक बाँझ inoculating पाश या विंदुक टिप का उप?...

<ol>
	<li>Nell, S., Seurbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 564-577 (2010).</li><li>Cario, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+Receptors+in+Inflammatory+Bowel+Diseases:+A+Decade+Later.">Toll-like Receptors in Inflammatory Bowel Diseases: A Decade Later.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 16 (9), 1583-1597 (2010).</li><li>Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease.">Animal Models of Inflammatory Bowel Disease.</a> Annals New York Academy of Sciences. , 1027-38 (2006).</li><li>Mundy, R., MacDonald, T. 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Citrobacter rodentium संक्रमण दोनों संक्रामक रोग और चूहों में बृहदांत्रशोथ के अध्ययन के लिए एक मूल्यवान मॉडल प्रदान करता है. यह अनूठा मॉडल दोनों मेजबान प्रतिक्रियाओं, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से बैक्टीरि...

अंत्र बैक्टीरियल रोगज़नक़ों द्वारा संक्रमण गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल (GI) सूजन, साथ ही आंतों विकृति और pathophysiology दस्त और आंतों उपकला बाधा शिथिलता सहित, चलाता है. डाह तंत्र है जिसके द्वारा बैक्टीरियल रोगज़नक़ों उनके मेजबान के रूप में के रूप में अच्छी तरह से विशिष्ट मेजबान प्रतिक्रिया है कि इस तरह के संक्रमण के खिलाफ की रक्षा के सैनिक पथ उपनिवेश खराब समझ रहे हैं, लेकिन हाल के अग्रिमों अंत्र जीवाणु संक्रमण के मॉडलिंग में इन प्रक्रियाओं के बारे में हमारी समझ के लिए सहायता करने के लिए शुरू कर दिया है. आंत्र जीवाणु भी सूजन आंत्र रोग (IBDs) से जोड़ा गया है. IBDs है Crohn रोग (सीडी) और UC अज्ञात एटियलजि के जटिल रोगों, पुरानी आंतों में सूजन और ऊतकों को नुकसान द्वारा विशेषता हैं. / - IL10 के रूप में आनुवंशिक रूप से संशोधित उपभेदों में सहज सूजन से आंतों में सूजन के कई माउस मॉडल मौजूद हैं, चूहों, dextran सोडियम (DSS) सल्फेट और घ के रूप में इस तरह के यौगिकों, के साथ चुनौतियों का सामना करने के लिए रासायनिकinitrobenzene सल्फोनिक एसिड (गैर - बैंकिंग पर्यवेक्षण विभाग) 1. यह धारणा रही है कि maladaptive IBD रोगियों में जीर्ण सूजन मौजूद प्रतिक्रियाओं आंतों mucosal प्रतिरक्षा प्रणाली के असामान्य अंत्र बैक्टीरिया के लिए जोखिम 2, इसलिए संक्रामक बृहदांत्रशोथ के मॉडल का अध्ययन भी संभावित रोगजनक मेजबान को परिभाषित करने के लिए महत्वपूर्ण क्षमता प्रदान करता है पर आनुवंशिक रूप से अतिसंवेदनशील व्यक्तियों में विकसित अंत्र बैक्टीरिया के लिए प्रतिक्रियाओं Citrobacter rodentium प्रेरित बृहदांत्रशोथ एक संक्रामक बृहदांत्रशोथ के दुर्लभ मॉडल है कि अच्छी तरह से किया गया है 1,3 विशेषता है, अंत्र बैक्टीरिया और IBD रोगजनन के संभावित तंत्र के आगे समझने के लिए मेजबान प्रतिक्रियाओं का विश्लेषण के लिए अनुमति देता है, एक आवश्यक कदम उपन्यास preventative और चिकित्सीय उपचार के विकास में. सी. rodentium एक ग्राम नकारात्मक संलग्न और शर्मीला (ए / ई), murine विशिष्ट जीवाणु रोगज़नक़ कि निकट महत्वपूर्ण मानव से संबंधित हैरोगज़नक़ों enteropathogenic ई. (EPEC) कोलाई और enterohaemorrhagic ई. कोलाई (EHEC) 3-8. ए / ई रोगजनकों के परिवार के परिचित cecal और colonic उपकला के शिखर मेजबान कोशिका झिल्ली को देते हैं, एक गैर इनवेसिव मेजबान सेल पर कुरसी की तरह संरचना बनाने. सी. के साथ ओरल चुनौती 10 9 8 -10 जीवों के rodentium संक्रामक बृहदांत्रशोथ के एक मजबूत मॉडल colonic या तहखाने, mononuclear प्रतिरक्षा सेल घुसपैठ और जाम सेल रिक्तीकरण 3,4 hyperplasia बढ़ाव द्वारा विशेषता पैदा करता है. उपनिवेशवाद की प्रारंभिक साइट, चुनौती के कुछ घंटे बाद, पैच पर cecal है, बाहर का बृहदान्त्र 3 संक्रमण के बाद 2 से 3 दिनों के लिए प्रगति के द्वारा पीछा किया. असुरक्षित माउस उपभेदों में रोगज़नक़ की निकासी 1,3,4 संक्रमण के बाद 3 से 4 सप्ताह में हासिल की है. हालांकि, कई उपभेदों आनुवंशिक रूप से संशोधित, यानी जीन की कमी या पीटा चूहों (- / -), increa प्रदर्शित करने के लिए मिल गया हैअतिरंजित क्षति और / या पुराने संक्रमण और सूजन 9-14 को संक्रमण के लिए संवेदनशीलता sed. इन पीटा उपभेदों में इस संक्रामक बृहदांत्रशोथ मॉडल का प्रयोग, कई जन्मजात संकेत प्रोटीन की कमी, कई मेजबान आंत्र संक्रमण और सूजन के संकल्प का अभिन्न अंग प्रोटीन खुलासा में अनिवार्य कर दिया गया है.

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक / सामग्री के नाम </td><td> कंपनी </td><td> कुल संख्या </td><td> टिप्पणियां </td></tr><tr><td> Luria रसा </td><td> एबीएम </td><td> G247 </td><td> 1L पानी के पौंड पाउडर के 25 ग्राम जोड़ें. उपयोग करने से पहले आटोक्लेव. </td></tr><tr><td> ग्रिड के साथ स्क्वायर नीचे की थाली </td><td> मछुआ </td><td> 08-757-11A </td><td></td></tr><tr><td> फाल्कन संस्कृति ट्यूब </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> बल्ब गैस्ट्रिक नलिका - पोषण सुई इत्तला दे दी </td><td> ललित विज्ञान उपकरण </td><td> 18060-20 </td><td></td></tr><tr><td> 1 मिलीलीटर सिरिंज </td><td> बी.डी. बायोसाइंसेज </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 FITC dextran केडीए </td><td> सिग्मा </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> साइट्रिक अम्ल जो नीबू में पाया जाता है </td><td> सिग्मा </td><td> C7129 &lt;/ P&gt; <td></td></tr><tr><td> सोडियम साइट्रेट </td><td> मछुआ </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> द्रक्षौज </td><td> मछुआ </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> एसिड साइट्रेट dextrose </td><td></td><td></td><td> 20 मिमी ctiric एसिड, 110 मिमी सोडियम साइट्रेट, 5 मिमी dextrose </td></tr><tr><td> काले 96-अच्छी तरह से थाली </td><td> मछुआ </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> धातु मोती (5 मिमी) </td><td> क्विएज़न </td><td> 69989 </td><td></td></tr><tr><td> 10 formalin% </td><td> मछुआ </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> 5 मिलीग्राम शीशी </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> Hematoxylin </td><td> मछुआ </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> लाल भामसान रंग </td><td> मछुआ </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> Xylene </td><td> मछुआ </td><td&gt; HC700 1GAL </td><td></td></tr><tr><td> 20 Tween </td><td> सिग्मा </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Coplin धुंधला हो जार </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम साइट्रेट बफर </td><td></td><td></td><td> 10 मिमी सोडियम साइट्रेट, 0,05% के बीच 20, 6.0 पीएच </td></tr><tr><td> पैप कलम </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> बकरी सीरम </td><td> सिग्मा </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> गोजातीय सीरम albumin (BSA) </td><td> मछुआ </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> X-100 ट्राइटन </td><td> सिग्मा </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम azide </td><td> सिग्मा </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> बफर अवरुद्ध </td><td></td><td></td><td> बकरी सीरम 2%, 1% BSA, 0.1% ट्राइटन X-100, 0.05% बीच 20, 0.05% सोडियमazide, 0.01 एम PBS, पीएच 7.2, मिश्रण और 4 बजे दुकान डिग्री सेल्सियस </td></tr><tr><td> एंटीबॉडी कमजोर पड़ने बफर </td><td></td><td></td><td> 0.1% ट्राइटन X-100, 0.1% 0,05% सोडियम, बीएसए, 0,04% EDTA </td></tr><tr><td> Tir लिए अवरुद्ध बफर और एंटीबॉडी कमजोर पड़ने बफर </td><td></td><td></td><td> ऊपर के रूप में, लेकिन डिटर्जेंट के अलावा (ट्राइटन X-100 और 20 के बीच) के बिना ही व्यंजनों </td></tr><tr><td> DAPI के साथ गोल्ड Antifade अभिकर्मक लम्बा </td><td> Invitrogen </td><td> पी 36,931 </td><td></td></tr><tr><td> Coverslips </td><td> मछुआ </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> Benchtop ऊष्मायन हिलनेवाला </td><td> Barnstead लैब रेखा </td><td> Q4000 अधिकतम </td><td></td></tr><tr><td> Fluorometer </td><td> Perkin Elmer </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> प्रशीतित अपकेंद्रित्र </td><td> Beckman कल्टर </td><td> Microfuge 22R</td><td></td></tr><tr><td> स्टीमर </td><td> ब्लैक एंड डेकर </td><td></td><td></td></tr><tr><td> प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी </td><td> Zeiss </td><td> Axio Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis

इस प्रोटोकॉल संक्रामक रोग और कोलाइटिस के एक मजबूत मॉडल का निर्माण करने के लिए आवश्यक कदम है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से करने के लिए चूहों में Citrobacter rodentium संक्रमण विशेषताएँ तरीकों का इस्तेमाल किया रूपरेखा सी.. rodentium एक ग्राम नकारात्मक, murine विशिष्ट जीवाणु रोगज़नक़ कि निकट चिकित्सकीय महत्वपूर्ण मानव रोगज़नक़ों enteropathogenic ई. से संबंधित है enterohemorrhagic और ई. कोलाई कोलाई. सी. के साथ संक्रमण होने पर rodentium, असुरक्षित चूहों मामूली और क्षणिक वजन घटाने और दस्त से पीड़ित हैं. Histologically, आंतों तहखाना बढ़ाव, प्रतिरक्षा सेल घुसपैठ, और जाम सेल रिक्तीकरण मनाया जाता है. संक्रमण की निकासी 3 से 4 सप्ताह के बाद हासिल की है. आंतों उपकला बाधा अखंडता, जीवाणु लोड, संक्रमण के बाद अलग - अलग समय बिंदुओं पर और histological क्षति के मापन, माउस संक्रमण के लिए अतिसंवेदनशील उपभेदों के लक्षण वर्णन अनुमति देते हैं. डाह तंत्रजो बैक्टीरियल रोगज़नक़ों अपने मेजबान के रूप में के रूप में अच्छी तरह से विशिष्ट मेजबान प्रतिक्रिया है कि इस तरह के संक्रमण के खिलाफ की रक्षा के आंत्र पथ उपनिवेश खराब समझ रहे हैं. इसलिए सी. आंतों का जीवाणु संक्रमण के rodentium मॉडल इन प्रक्रियाओं के बारे में हमारी समझ में सहायता करने के लिए एक मूल्यवान उपकरण के रूप में कार्य करता है. आंत्र जीवाणु भी सूजन आंत्र रोग (IBDs) से जोड़ा गया है. यह धारणा रही है कि maladaptive IBD रोगियों में जीर्ण सूजन देखा प्रतिक्रियाओं आंतों mucosal प्रतिरक्षा प्रणाली के असामान्य अंत्र बैक्टीरिया के लिए जोखिम के बाद आनुवंशिक रूप से अतिसंवेदनशील व्यक्तियों में विकसित. इसलिए, संक्रामक बृहदांत्रशोथ के मॉडल का अध्ययन संभावित परिभाषित अंत्र बैक्टीरिया रोगजनक मेजबान प्रतिक्रियाओं के लिए महत्वपूर्ण क्षमता प्रदान करता है सी.. rodentium प्रेरित बृहदांत्रशोथ कि अंत्र बैक्टीरिया को मेजबान प्रतिक्रियाओं के विश्लेषण के लिए अनुमति देता है, IBD रोगजनन के संभावित तंत्र के बारे में हमारी समझ को आगे बढ़ाने के एक ऐसे दुर्लभ मॉडल है;उपन्यास preventative और चिकित्सीय उपचार के विकास में आवश्यक है.

एक मानक संक्रमण प्रयोग के दौरान, चूहों लगभग 2.5 x 10 8 CFU के साथ 100 μl रातोंरात सी. नलिका - पोषण के माध्यम से संक्रमित होते हैं rodentium संस्कृति. सी. साथ C57BL / 6 चूहों के संक्रमण मामूली और क्षणिक वजन घटाने और ?...

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The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium संक्रमण अंत्र बैक्टीरिया संक्रमण का अध्ययन के रूप में के रूप में अच्छी तरह से चूहों में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और कोलाइटिस की मेजबानी के लिए एक मूल्यवान मॉडल प्रदान करता है. यह प्रोटोकॉल बाधा अखंडता, रोगज़नक़ लोड और histological क्षति murine संक्रामक बृहदांत्रशोथ रोगज़नक़ और मेजबान योगदान की पूरी तरह से लक्षण वर्णन के लिए अनुमति देता है की माप की रूपरेखा.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; माउस मॉडल: अध्ययन संक्रामक बृहदांत्रशोथ पैथोजन और मेजबान योगदान

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

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