Name: the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis
Uploaded: 2013-02-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами для операционных BAV от Крона и колит фонда Канады (CCFC) и Канадского института исследований в области здравоохранения (CIHR). ГБ была профинансирована выпускников аспирантуры с CIHR. BAV это дети с кишечными и заболеваний печени (CHILD) Председатель Фонда исследований в педиатрии IBD и Канада заведующая кафедрой в детской гастроэнтерологии.

1. Подготовка Citrobacter rodentium посевной и желудочный зонд мышей <ol><li> Подготовка и стерилизации Лурия Bertani бульон (LB). </li><li> Получение жизнеспособного C. rodentium из замороженного запаса глицерина и подряд на LB агаром с помощью стерильного посева петлю или пипетки. Инкубировать при 37 ° С...

<ol>
	<li>Nell, S., Seurbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 564-577 (2010).</li><li>Cario, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+Receptors+in+Inflammatory+Bowel+Diseases:+A+Decade+Later.">Toll-like Receptors in Inflammatory Bowel Diseases: A Decade Later.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 16 (9), 1583-1597 (2010).</li><li>Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease.">Animal Models of Inflammatory Bowel Disease.</a> Annals New York Academy of Sciences. , 1027-38 (2006).</li><li>Mundy, R., MacDonald, T. T., Dougan, G., Frankel, G., Wiles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrobacter+rodentium+of+mice+and+man.">Citrobacter rodentium of mice and man.</a> Cellular Microbiology. 7, 1697-1706 (2005).</li><li>Luperchio, S., Schauer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+of+Citrobacter+rodentium+and+transmissible+murine+colonic+hyperplasia.">Molecular pathogenesis of Citrobacter rodentium and transmissible murine colonic hyperplasia.</a> Microbes and Infection. 3 (4), 333-340 (2001).</li><li>Bergstrom, K. S., Sham, H. P., Zarepour, M., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+host+responses+to+enteric+bacterial+pathogens:+a+balancing+act+between+resistance+and+tolerance.">Innate host responses to enteric bacterial pathogens: a balancing act between resistance and tolerance.</a> Cellular Microbiology. 14, 475-484 (2012).</li><li>MacDonald, T. T., Frankel, G., Dougan, G., Goncalves, N. S., Simmons, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+defences+to+Citrobacter+rodentium.">Host defences to Citrobacter rodentium.</a> International Journal of Medical Microbiology. 293, 87-93 (2003).</li><li>Borenshtein, D., McBee, M. E., Schauer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+the+Citrobacter+rodentium+infection+model+in+laboratory+mice.">Utility of the Citrobacter rodentium infection model in laboratory mice.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24, 32-37 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Rosenberger, C. M., Bergstrom, K. S. B., Valdez, Y., Huang, J. T., Khan, M. A., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+2+plays+a+critical+role+in+maintaining+mucosal+integrity+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">Toll-like receptor 2 plays a critical role in maintaining mucosal integrity during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10, 388-403 (2008).</li><li>Dennis, A., Kudo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p50+subunit+of+NF-&#954;B+is+critical+for+in+vivo+clearance+of+the+non-invasive+enteric+pathogen+Citrobacter+rodentium.">The p50 subunit of NF-&#954;B is critical for in vivo clearance of the non-invasive enteric pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 76 (11), 4978-4988 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Bergstrom, K. S. B., Huang, J. T., Man, C., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+signalling+plays+a+critical+role+in+host+defence+by+controlling+pathogen+burden+and+promoting+epithelial+cell+homeostasis+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">MyD88 signalling plays a critical role in host defence by controlling pathogen burden and promoting epithelial cell homeostasis during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10 (3), 618-631 (2008).</li><li>Lebeis, S. L., Bommarius, B., Parkos, C. A., Sherman, M. A., Kalman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR+signaling+mediated+by+MyD88+is+required+for+a+protective+innate+immune+response+by+neutrophils+to+Citrobacter+rodentium.">TLR signaling mediated by MyD88 is required for a protective innate immune response by neutrophils to Citrobacter rodentium.</a> Journal of Immunology. 179 (1), 566-577 (2007).</li><li>Bry, L., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+T+cell+dependent+serum+antibody,+but+not+the+gut-associated+lymphoid+tissue,+for+surviving+acute+mucosal+infection+with+Citrobacter+rodentium,+an+attaching+and+effacing+pathogen.">Critical role of T cell dependent serum antibody, but not the gut-associated lymphoid tissue, for surviving acute mucosal infection with Citrobacter rodentium, an attaching and effacing pathogen.</a> Journal of Immunology. 172 (1), 433-441 (2004).</li><li>Simmons, C. P., Clare, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+B+lymphocytes+and+CD4++T+cells+in+immunity+to+infection+by+the+attaching+and+effacing+pathogen+Citrobacter+rodentium.">Central role for B lymphocytes and CD4+ T cells in immunity to infection by the attaching and effacing pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 71 (9), 5077-5086 (2003).</li><li>Ahmed, I., Chandrakesan, P., Tawfik, O., Xia, L., Anant, S., Umar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+Roles+of+Notch+and+Wnt/&#946;-Catenin+Pathways+in+the+Regulation+of+Hyperplasia+and/or+Colitis+in+Response+to+Bacterial+Infection.">Critical Roles of Notch and Wnt/&#946;-Catenin Pathways in the Regulation of Hyperplasia and/or Colitis in Response to Bacterial Infection.</a> Infection &amp; Immunity. 80 (9), 3107-3121 (2012).</li></ol>

Citrobacter rodentium инфекции предоставляет ценную модель для изучения как инфекционные болезни и колитов у мышей. Эта уникальная модель позволяет для характеристики как хозяин ответы, а также патогенных свойств бактерий. Действия, описанные в этом протоколе подробно успешного использов...

Заражение кишечными бактериальными патогенами вызывает желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) воспаления, а также кишечной патологии и патофизиологии, в том числе диарея и кишечные эпителиальные дисфункции барьера. Вирулентности механизмы, с помощью которых патогенные бактерии колонизировать желудочно-кишечного тракта их хозяев, а также конкретные ответы хоста, защититься от таких инфекций, плохо понимается, однако последние достижения в области моделирования кишечных бактериальных инфекций начали помогать нашему пониманию этих процессов. Кишечные бактерии также были связаны с Воспалительные заболевания кишечника (IBDs). Болезнь IBDs Крона (БК) и UC являются сложными заболеваниями неизвестной этиологии, характеризующееся хроническим кишечным воспалением и повреждением тканей. Многие модели мыши кишечного воспаления существуют, от спонтанного воспаления у генетически модифицированные штаммы, такие как IL10 - / - мышей, химических проблем с соединениями, такими как декстран сульфат натрия (DSS) и гinitrobenzene кислоты (DNBS) 1. Она была выдвинута гипотеза о том, что неадекватные хронических воспалительных реакций присутствует у пациентов IBD развиваются у генетически предрасположенных лиц по ненормального воздействия на слизистой кишечника иммунной системы кишечных бактерий 2, поэтому исследование модели инфекционного колита также имеет значительный потенциал для определения потенциально патогенных хоста . ответы на кишечные бактерии Citrobacter rodentium индуцированный колит является одним из самых редких моделей инфекционных колитах, которые были охарактеризованы 1,3, что позволяет при анализе ответов на множество кишечных бактерий и дальнейшего понимания возможных механизмов патогенеза IBD; важным шагом В разработке новых профилактических и лечебных процедур. C. rodentium является грамотрицательные крепления и скромный (A / E), мышиный конкретных бактериальных патогенов, которые тесно связаны с важными человекапатогенных энтеропатогенных E. палочка (EPEC) и энтерогеморрагическая E. палочка (EHEC) 3-8. Семейство / E патогенных тесно приложить к апикальной мембране клетки-хозяина из слепой кишки и ободочной эпителия, образуя неинвазивной пьедестал подобные структуры на клетке-хозяине. Устные проблема с C. rodentium из 10 8 -10 9 организмов создает надежную модель инфекционного колита характеризуется толстой гиперплазии или удлинение склепы, мононуклеарными иммунной клеточной инфильтрации и бокаловидных клеток истощения 3,4. Начальный участок колонизации, за несколько часов после заражения, находится в слепой патч, затем прогрессии дистального отдела толстой кишки от 2 до 3 дней после заражения 3. В иммунокомпетентных линий мышей, оформление возбудителя осуществляется от 3 ​​до 4 недель после заражения 1,3,4. Тем не менее, многие генетически модифицированные штаммы, т.е. ген недостаточной или нокаут (- / -) мышей, были найдены просмотров increaСЭД восприимчивость к инфекции в результате преувеличенного ущерба и / или хронической инфекцией и воспалением 9-14. Использование этой модели инфекционного колита в этих нокаутом штаммов, многие не хватает врожденной сигнальных белков, был незаменимым в выявлении нескольких белков, принимающих неотъемлемой разрешения кишечной инфекции и воспаления.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название Реагенты / Материал </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Лурия Бульон </td><td> ПРО </td><td> G247 </td><td> Добавить 25 г порошка LB 1л воды. Автоклаве перед использованием. </td></tr><tr><td> Площадь нижней плиты с сеткой </td><td> Рыбак </td><td> 08-757-11A </td><td></td></tr><tr><td> Сокол культуры трубы </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> Лампа наконечником желудка через зонд иглы </td><td> Средства изобразительных наук </td><td> 18060-20 </td><td></td></tr><tr><td> 1 мл шприца </td><td> BD Biosciences </td><td> 309659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 кДа FITC-декстрана </td><td> Сигма </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> Лимонная кислота </td><td> Сигма </td><td> C7129 &lt;/ TD&gt; <td></td></tr><tr><td> Цитрат натрия </td><td> Рыбак </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> Декстроза </td><td> Рыбак </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> Кислота цитрат декстрозы </td><td></td><td></td><td> 20 мМ ctiric кислоты, 110 мМ цитрат натрия, 5 мМ декстрозы </td></tr><tr><td> Черные 96-луночный планшет </td><td> Рыбак </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> Металлические бусины (5 мм) </td><td> Qiagen </td><td> 69989 </td><td></td></tr><tr><td> 10% формалине </td><td> Рыбак </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> 5 мл флаконе </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> Гематоксилин </td><td> Рыбак </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> Эозин </td><td> Рыбак </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> Ксилол </td><td> Рыбак </td><tD&gt; HC700-1GAL </td><td></td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Сигма </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Коплин окрашивания банке </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> Буфер цитрат натрия </td><td></td><td></td><td> 10 мМ цитрат натрия, 0,05% твин-20, рН 6,0 </td></tr><tr><td> Пап пера </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> Коза сыворотке </td><td> Сигма </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> Бычьего сывороточного альбумина (БСА) </td><td> Рыбак </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Сигма </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> Азид натрия </td><td> Сигма </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> Блокировка буфера </td><td></td><td></td><td> 2% козьей сыворотки, 1% BSA, 0,1% тритона X-100, 0,05% Твин-20, 0,05% натрияазид, 0,01 М PBS, рН 7,2, смешать и хранить при 4 ° C. </td></tr><tr><td> Буфер антител разбавления </td><td></td><td></td><td> 0,1% тритона Х-100, 0,1% BSA, 0,05% азида натрия, 0,04% ЭДТА </td></tr><tr><td> Блокировка буфера и буфера для разведения антител для книжек </td><td></td><td></td><td> То же рецептам, что и выше, но без добавления моющих средств (тритон Х-100 и Твин 20) </td></tr><tr><td> Продлить Золотой реагентов Antifade с DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P-36931 </td><td></td></tr><tr><td> Покровные </td><td> Рыбак </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> Настольная инкубационный шейкер </td><td> Barnstead Лаборатории линии </td><td> Макс Q4000 </td><td></td></tr><tr><td> Флуорометр </td><td> Perkin Elmer </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> Центрифуга с охлаждением </td><td> Beckman Coulter </td><td> Микроцентрифуге 22R</td><td></td></tr><tr><td> Пароход </td><td> Черное &amp; Decker </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Флуоресцентный микроскоп </td><td> Zeiss </td><td> Axio Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis

Этот протокол описывает шаги, необходимые для создания надежной модели инфекционного заболевания и колитах, а также методы, используемые для характеристики Citrobacter rodentium инфекции у мышей. C. rodentium представляет собой грамотрицательные, мышиный конкретных бактериальных патогенов, которые тесно связаны с клинически значимых патогенов человека энтеропатогенных E. палочки и Энтерогеморрагическая E. палочки. После инфицирования C. rodentium, иммунокомпетентных мышей страдают от скромных и переходные потери веса и диареи. Гистологически, кишечных удлинение склеп, иммунной клеточной инфильтрации и истощения бокаловидных клеток не наблюдается. Оформление инфекции достигается после 3 до 4 недель. Измерение кишечного эпителия целостности барьера, бактериальной нагрузки, и гистологическое повреждение в различные моменты времени после заражения, позволяющие характеристика штаммов мыши восприимчивы к инфекции. Механизм вирулентностис помощью которых патогенные бактерии колонизировать желудочно-кишечного тракта их хозяев, а также конкретные ответы хоста, защититься от таких инфекций мало изучены. Поэтому C. rodentium модели кишечной бактериальной инфекции служит ценным инструментом, чтобы помочь в нашем понимании этих процессов. Кишечные бактерии также были связаны с Воспалительные заболевания кишечника (IBDs). Она была выдвинута гипотеза о том, что неадекватные хронические воспалительные реакции наблюдаются у пациентов IBD развиваются у генетически предрасположенных лиц после ненормального воздействия на слизистой кишечника иммунной системы кишечных бактерий. Таким образом, изучение моделей инфекционного колита имеет значительный потенциал для определения потенциально патогенных ответы принимающей кишечных бактерий. C. rodentium индуцированный колит является одним из таких редких моделей, что позволяет проводить анализ принимающих ответы на кишечные бактерии, углубления нашего понимания возможных механизмов патогенеза IBD;важную роль в разработке новых профилактических и лечебных процедур.

Во время стандартного эксперимента инфекции, мышей, инфицированных примерно 2,5 х 10 8 КОЕ через желудочный зонд 100 мкл в течение ночи C. rodentium культуры. Заражение мышей C57BL / 6 с C. rodentium результаты скромны и переходные потери веса и диареи. Хотя редкое явление с C57BL / 6 мышей, живо...

Watch this Scientific Journal Video about The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis at JoVE.com

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium инфекции предоставляет ценную модель для изучения кишечных бактериальных инфекций, а также иммунный ответ и колита у мышей. Этот протокол описывает измерение барьер целостности, патогенов и гистологическое повреждение позволяет тщательно характеристика возбудителя и принимающих вклады в мышиной инфекционных колитах.

<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mouse Model: изучение патогенности и Хост Взносы в инфекционным колитом

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Использование оптической ловушки для изучения хост-Возбудитель Взаимодействие для динамических изображений Живая сотовый

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Использование EpiAirway модель Характеризуя Долгосрочные хост-возбудителя Взаимодействия

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions

Сравнительный подход к характеризации Пейзаж хозяин-патоген белок-белковых взаимодействий

Significant efforts were gathered to generate  large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is  instrumental to understand the ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

Комплексное 4D визуализация<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Инфекции у мышей

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Использование химии Нажмите для оценки влияния вирусной инфекции на клетки-хозяина синтеза РНК

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Мышь Модель для патогенных микроорганизмов, вызванной хроническим воспалением на локальном и системном сайтов

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Responses

Экспериментальная Заражение<em&gt; листерий</em&gt; В качестве модели для изучения хоста интерферон гамма ответов

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Ex Vivo курица первичной Bursal клеточной культуры модель для изучения патогенеза вирус инфекционного Bursal

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Using a Bacterial Pathogen to Probe for Cellular and Organismic-level Host Responses

Использование бактериальных патогенов чтобы зонд для сотовых и организмический уровне принимающей ответов

There are a variety of strategies bacterial pathogens employ to survive and proliferate once inside the eukaryotic cell. The so-called 'cytosolic' ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Оценка хост возбудитель ответы и эффективность вакцины в мышей

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...