Name: the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis
Uploaded: 2013-02-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis at JoVE.com

Detta arbete stöddes av driftsbidrag till BAV från Crohns och kolit Foundation of Canada (CCFC) och den kanadensiska Institutes for Health Research (CIHR). S har finansierats av en examen utbildningsbidrag från CIHR. BAV är barnen med tarm och leversjukdomar (barn) Stiftelsen ordförande i pediatrisk IBD forskning och Kanada forskning ordförande i pediatrisk gastroenterologi.

1. Beredning av Citrobacter rodentium ymp och oral sondmatning av möss <ol><li> Förbered och autoklav Luria Bertani buljong (LB). </li><li> Skaffa livskraftig C. rodentium från en frusen glycerol lager och strimma på LB-agarplatta med en steril ympa slinga eller pipettspets. Inkubera vid 37 ° C över natten. Inokulera 3 ml steril LB-buljong i en falk odlingsrör med kolonier från LB-platta med användning av en ympning slinga eller pipettspets. Beredning av inokulat bör göras med användning ...

<ol>
	<li>Nell, S., Seurbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8, 564-577 (2010).</li><li>Cario, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+Receptors+in+Inflammatory+Bowel+Diseases:+A+Decade+Later.">Toll-like Receptors in Inflammatory Bowel Diseases: A Decade Later.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 16 (9), 1583-1597 (2010).</li><li>Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+of+Inflammatory+Bowel+Disease.">Animal Models of Inflammatory Bowel Disease.</a> Annals New York Academy of Sciences. , 1027-38 (2006).</li><li>Mundy, R., MacDonald, T. T., Dougan, G., Frankel, G., Wiles, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Citrobacter+rodentium+of+mice+and+man.">Citrobacter rodentium of mice and man.</a> Cellular Microbiology. 7, 1697-1706 (2005).</li><li>Luperchio, S., Schauer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+of+Citrobacter+rodentium+and+transmissible+murine+colonic+hyperplasia.">Molecular pathogenesis of Citrobacter rodentium and transmissible murine colonic hyperplasia.</a> Microbes and Infection. 3 (4), 333-340 (2001).</li><li>Bergstrom, K. S., Sham, H. P., Zarepour, M., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+host+responses+to+enteric+bacterial+pathogens:+a+balancing+act+between+resistance+and+tolerance.">Innate host responses to enteric bacterial pathogens: a balancing act between resistance and tolerance.</a> Cellular Microbiology. 14, 475-484 (2012).</li><li>MacDonald, T. T., Frankel, G., Dougan, G., Goncalves, N. S., Simmons, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+defences+to+Citrobacter+rodentium.">Host defences to Citrobacter rodentium.</a> International Journal of Medical Microbiology. 293, 87-93 (2003).</li><li>Borenshtein, D., McBee, M. E., Schauer, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Utility+of+the+Citrobacter+rodentium+infection+model+in+laboratory+mice.">Utility of the Citrobacter rodentium infection model in laboratory mice.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24, 32-37 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Rosenberger, C. M., Bergstrom, K. S. B., Valdez, Y., Huang, J. T., Khan, M. A., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll-like+receptor+2+plays+a+critical+role+in+maintaining+mucosal+integrity+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">Toll-like receptor 2 plays a critical role in maintaining mucosal integrity during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10, 388-403 (2008).</li><li>Dennis, A., Kudo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+p50+subunit+of+NF-&#954;B+is+critical+for+in+vivo+clearance+of+the+non-invasive+enteric+pathogen+Citrobacter+rodentium.">The p50 subunit of NF-&#954;B is critical for in vivo clearance of the non-invasive enteric pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 76 (11), 4978-4988 (2008).</li><li>Gibson, D. L., Ma, C., Bergstrom, K. S. B., Huang, J. T., Man, C., Vallance, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MyD88+signalling+plays+a+critical+role+in+host+defence+by+controlling+pathogen+burden+and+promoting+epithelial+cell+homeostasis+during+Citrobacter+rodentium-induced+colitis.">MyD88 signalling plays a critical role in host defence by controlling pathogen burden and promoting epithelial cell homeostasis during Citrobacter rodentium-induced colitis.</a> Cellular Microbiology. 10 (3), 618-631 (2008).</li><li>Lebeis, S. L., Bommarius, B., Parkos, C. A., Sherman, M. A., Kalman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TLR+signaling+mediated+by+MyD88+is+required+for+a+protective+innate+immune+response+by+neutrophils+to+Citrobacter+rodentium.">TLR signaling mediated by MyD88 is required for a protective innate immune response by neutrophils to Citrobacter rodentium.</a> Journal of Immunology. 179 (1), 566-577 (2007).</li><li>Bry, L., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+T+cell+dependent+serum+antibody,+but+not+the+gut-associated+lymphoid+tissue,+for+surviving+acute+mucosal+infection+with+Citrobacter+rodentium,+an+attaching+and+effacing+pathogen.">Critical role of T cell dependent serum antibody, but not the gut-associated lymphoid tissue, for surviving acute mucosal infection with Citrobacter rodentium, an attaching and effacing pathogen.</a> Journal of Immunology. 172 (1), 433-441 (2004).</li><li>Simmons, C. P., Clare, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+role+for+B+lymphocytes+and+CD4++T+cells+in+immunity+to+infection+by+the+attaching+and+effacing+pathogen+Citrobacter+rodentium.">Central role for B lymphocytes and CD4+ T cells in immunity to infection by the attaching and effacing pathogen Citrobacter rodentium.</a> Infection &amp; Immunity. 71 (9), 5077-5086 (2003).</li><li>Ahmed, I., Chandrakesan, P., Tawfik, O., Xia, L., Anant, S., Umar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+Roles+of+Notch+and+Wnt/&#946;-Catenin+Pathways+in+the+Regulation+of+Hyperplasia+and/or+Colitis+in+Response+to+Bacterial+Infection.">Critical Roles of Notch and Wnt/&#946;-Catenin Pathways in the Regulation of Hyperplasia and/or Colitis in Response to Bacterial Infection.</a> Infection &amp; Immunity. 80 (9), 3107-3121 (2012).</li></ol>

Citrobacter rodentium infektion ger en värdefull modell för studier av både infektionssjukdomar och kolit i möss. Denna unika modell gör det möjligt att karakterisera både värd svar, liksom egenskaper patogena bakterier. Stegen som beskrivs i detta protokoll detalj framgångsrik användning av denna modell. Det finns flera viktiga steg i detta protokoll för att tänka på när framkalla kolit och analysera svaren. Först, framställning av en färsk över natten C. rode...

Infektion av enteriska bakteriella patogener utlöser gastrointestinala (GI) inflammation, liksom intestinal patologi och patofysiologi, inklusive diarré och intestinal epitelial barriär dysfunktion. Virulens mekanismer genom vilka bakteriella patogener koloniserar mag-tarmkanalen av sina värdar, samt särskilda svar värd som försvarar mot sådana infektioner är dåligt förstådda, har dock de senaste framstegen inom modellering av enterala bakterieinfektioner börjat hjälpa vår förståelse av dessa processer. Tarmbakterier har också kopplats till inflammatoriska tarmsjukdomar (IBDs). Den IBDs Crohns sjukdom (CD) och UC är komplexa sjukdomar med okänd etiologi, som kännetecknas av kronisk tarminflammation och vävnadsskada. Många musmodeller av tarminflammation existerar, från spontan inflammation i genetiskt modifierade stammar, såsom IL10 - / - möss, kemiska utmaningar med föreningar, såsom dextran natriumsulfat (DSS) och dinitrobenzene sulfonsyra (DNBS) 1. Det har hypoteser om att de maladaptiva kroniska inflammatoriska reaktioner som finns i IBD-patienter utvecklas genetiskt känsliga individer vid onormal exponering av tarmens slemhinna immunsystemet tarmbakterier 2, alltså studiet av modeller för smittsamma kolit erbjuder också en betydande potential för att definiera potentiellt patogena värd . svar på tarmbakterier Citrobacter rodentium inducerad kolit är en av de sällsynta modeller av smittsam kolit som har väl karakteriserade 1,3, vilket möjliggör analys av värd svar på tarmbakterier och ytterligare förståelse av potentiella mekanismer för IBD patogenes, ett viktigt steg att utveckla nya förebyggande och terapeutiska behandlingar. C. rodentium är en gramnegativ fästa och utplåna (A / E), mus specifik bakteriell patogen som är nära relaterad till den viktiga mänskligapatogener enteropatogen E. coli (EPEC) och Enterohemorragisk E. coli (EHEC) 3-8. Familjen av A / E patogener fäster intimt till den apikala värdcellmembranet av cekala och kolon epitel, bildar en icke-invasiv piedestal-liknande struktur på värdcellen. Oral utmaning med C. rodentium av 10 8 -10 9 organismer producerar en robust modell av smittsam kolit kännetecknas av kolon hyperplasi eller förlängning av kryptor, mononukleär immunceller infiltration och bägare cellbristen 3,4. Den initiala platsen för kolonisering, några timmar efter utmaningen, är vid den cekala plåstret, följt av progression till den distala kolon 2 till 3 dagar efter infektion 3. Hos immunkompetenta musstammar är clearance av patogenen uppnått 3 till 4 veckor efter infektion 1,3,4. Emellertid, många genetiskt modifierade stammar, dvs genen bristfällig eller knockout (- / -) möss har, befunnits visa increased mottaglighet för infektion resulterar i överdriven skada och / eller kronisk infektion och inflammation 9-14. Användning av denna smittsamma kolit modell i dessa knockout stammar, många saknar medfödda signalerande proteiner, har varit oumbärlig för att avslöja flera värdproteiner integrerad lösning av intestinal infektion och inflammation.

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn på reagens / material </td><td> Företag </td><td> Katalognummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Luria-buljong </td><td> ABM </td><td> G247 </td><td> Tillsätt 25 g LB pulver till 1L vatten. Autoklav före användning. </td></tr><tr><td> Fyrkantig bottenplatta med galler </td><td> Fisher </td><td> 08-757-11A </td><td></td></tr><tr><td> Falcon odlingsrör </td><td> Sarstedt </td><td> 62.515.006 </td><td></td></tr><tr><td> Glödlampa tippas magsond nål </td><td> Fine Science Tools </td><td> 18.060-20 </td><td></td></tr><tr><td> 1 ml spruta </td><td> BD Biosciences </td><td> 309.659 </td><td></td></tr><tr><td> 4 kDa FITC-dextran </td><td> Sigma </td><td> FD-4 </td><td></td></tr><tr><td> Citronsyra </td><td> Sigma </td><td> C7129 &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> Natriumcitrat </td><td> Fisher </td><td> S279-500 </td><td></td></tr><tr><td> Dextros </td><td> Fisher </td><td> D16.1 </td><td></td></tr><tr><td> Syracitrat dextros </td><td></td><td></td><td> 20 mM ctiric syra, 110 mM natriumcitrat, 5 mM dextros </td></tr><tr><td> Svart 96-brunnars platta </td><td> Fisher </td><td> 07-200-762 </td><td></td></tr><tr><td> Metallkulor (5 mm) </td><td> Qiagen </td><td> 69.989 </td><td></td></tr><tr><td> 10% formalin </td><td> Fisher </td><td> 5F93-4 </td><td></td></tr><tr><td> 5 ml injektionsflaska </td><td> DiaMed </td><td> STK3205 </td><td></td></tr><tr><td> Hematoxylin </td><td> Fisher </td><td> H345-23 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin </td><td> Fisher </td><td> E511-100 </td><td></td></tr><tr><td> Xylen </td><td> Fisher </td><td&gt; HC700-1GAL </td><td></td></tr><tr><td> Tween 20 </td><td> Sigma </td><td> P5927 </td><td></td></tr><tr><td> Coplin färgning burk </td><td> VWR </td><td> 47751-792 </td><td></td></tr><tr><td> Natriumcitratbuffert </td><td></td><td></td><td> 10 mM natriumcitrat, 0,05% Tween 20, pH 6,0 </td></tr><tr><td> Pap penna </td><td> Cedarlane </td><td> Mu22 </td><td></td></tr><tr><td> Getserum </td><td> Sigma </td><td> G902-3 </td><td></td></tr><tr><td> Bovint serumalbumin (BSA) </td><td> Fisher </td><td> BP1600-100 </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> T8532 </td><td></td></tr><tr><td> Natriumazid </td><td> Sigma </td><td> SZ002 </td><td></td></tr><tr><td> Blockerande buffert </td><td></td><td></td><td> 2% getserum, 1% BSA, 0,1% Triton X-100, 0,05% Tween 20, 0,05% natriumazid, 0,01 M PBS, pH 7,2, blanda och förvara vid 4 ° C. </td></tr><tr><td> Antikropp utspädningsbuffert </td><td></td><td></td><td> 0,1% Triton X-100, 0,1% BSA, 0,05% natriumazid, 0,04% EDTA </td></tr><tr><td> Blockerande buffert och antikropp spädningsbuffert för tir </td><td></td><td></td><td> Samma recept som ovan, men utan tillsats av detergenter (Triton X-100 och Tween 20) </td></tr><tr><td> Förlänga guld antifad Reagens med DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P-36.931 </td><td></td></tr><tr><td> Täckglas </td><td> Fisher </td><td> 12.54SE </td><td></td></tr><tr><td> Bänk inkubation shaker </td><td> Barnstead Lab Linje </td><td> Max Q4000 </td><td></td></tr><tr><td> Fluorometer </td><td> Perkin Elmer </td><td> Victor2D </td><td></td></tr><tr><td> Kylcentrifug </td><td> Beckman Coulter </td><td> Microfuge 22R</td><td></td></tr><tr><td> Steamer </td><td> Black &amp; Decker </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Fluorescensmikroskop </td><td> Zeiss </td><td> Axio Image.Z1 </td><td></td></tr></tbody></table>

the citrobacter rodentium mouse model: studying pathogen and host contributions to infectious colitis

Detta protokoll beskriver de steg som krävs för att producera en robust modell för infektionssjukdomar och kolit samt de metoder som används för att karakterisera Citrobacter rodentium infektion hos möss. C. rodentium är en gramnegativ, mus specifik bakteriell patogen som är nära relaterad till kliniskt viktig mänsklig patogener enteropatogen E. coli och enterohemorragisk E. coli. Vid infektion med C. rodentium, immunkompetenta möss lider blygsam och övergående viktminskning och diarré. Histologiskt är intestinala krypta töjning, immunceller infiltration och bägare cellbristen observeras. Clearance av infektion uppnås efter 3 till 4 veckor. Mätning av intestinal epitelial barriär integritet, bakteriell belastning, och histologisk skada vid olika tidpunkter efter infektion, tillåta karakterisering av musstammar som är mottagliga för infektion. Virulensen Mekanismens genom vilken bakteriella patogener kolonisera tarmkanalen hos sina värdar, liksom specifika svar värd som försvarar mot sådana infektioner är dåligt förstådd. Därför C. rodentium modell av enterisk bakterieinfektion fungerar som ett värdefullt verktyg för att underlätta förståelsen av dessa processer. Tarmbakterier har också kopplats till inflammatoriska tarmsjukdomar (IBDs). Det har antagits att de maladaptiva kroniska inflammatoriska svar som ses i IBD-patienter utvecklas i genetiskt mottagliga individer efter onormal exponering av det intestinala mukosala immunsystemet tarmbakterier. Därför erbjuder studiet av modeller för smittsamma kolit betydande potential för att definiera potentiellt svar patogena värd för tarmbakterier. C. rodentium inducerad kolit är en sådan sällsynt modell som gör det möjligt att analysera värd svar på tarmbakterier, främja vår förståelse av potentiella mekanismer för IBD patogenes,väsentlig för utvecklingen av nya förebyggande och terapeutiska behandlingar.

Under en vanlig infektion experiment möss infekterade med ungefär 2,5 x 10 8 CFU genom sondmatning av 100 ^ natten C. rodentium kultur. Infektion av C57BL / 6 möss med C. rodentium leder blygsam och övergående viktminskning och diarré. Även om en sällsynt företeelse med C57BL / 6 möss, kan djur blir sjuka och behöver euthanization. Därför bör möss övervakas med avseende graden av viktminskning och symtom på ångest som piloerect päls och krökt kroppshållning, för att fas...

Watch this Scientific Journal Video about The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis at JoVE.com

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Citrobacter rodentium infektion ger en värdefull modell för att studera enteriska bakterieinfektioner samt värd immunsvar och kolit hos möss. Detta protokoll beskriver mätning av barriären integritet, patogener belastning och histologisk skada som möjliggör en grundlig karaktärisering av patogen och värd bidrag till murin smittsam kolit.

Den<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Mus Modell: Studera patogen och värd Bidrag till infektiös kolit

This protocol  outlines the steps required to produce a robust model of infectious disease and  colitis, as well as the methods used to characterize ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Citrobacter rodentium Mouse Model: Studying Pathogen and Host Contributions to Infectious Colitis

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Användning av en optisk fälla för studier av Host-patogen interaktioner för Dynamic levande cell imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Use of the EpiAirway Model for Characterizing Long-term Host-pathogen Interactions

Användning av EpiAirway modell för att karakterisera Långfristiga Värd-patogen interaktioner

Nontypeable Haemophilus influenzae  (NTHi) are human-adapted Gram-negative bacteria that can cause recurrent and chronic infections of the respiratory ...

A Comparative Approach to Characterize the Landscape of Host-Pathogen Protein-Protein Interactions

En komparativ metod för att karakterisera Landskap av värdpatogen Protein-protein interaktioner

Significant efforts were gathered to generate  large-scale comprehensive protein-protein interaction network maps. This is  instrumental to understand the ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodalitet Imaging av<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infektioner hos möss

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

Using Click Chemistry to Measure the Effect of Viral Infection on Host-Cell RNA Synthesis

Använda klicka kemi för att mäta effekten av virusinfektion på Host-cell RNA-syntes

Many RNA viruses have evolved the ability to inhibit host cell transcription as a means to circumvent cellular defenses. For the study of these viruses, ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

En musmodell för patogen-inducerad Kronisk inflammation vid lokala och system webbplatser

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Responses

Experimentell infektion med<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Som modell för att studera värd Interferon-y Responses

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

En Ex Vivo kyckling primära Bursal-cellkultur modell att studera Bursal infektionssjukdom Virus patogenes

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...

Using a Bacterial Pathogen to Probe for Cellular and Organismic-level Host Responses

Med en bakterie patogen att sonden för cellulär och organismnivå-nivå värd Svaren

There are a variety of strategies bacterial pathogens employ to survive and proliferate once inside the eukaryotic cell. The so-called 'cytosolic' ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Utvärdering av värd-patogen svaren och vaccinets effekt hos möss

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...