Name: separation of mouse embryonic facial ectoderm and mesenchyme
Uploaded: 2013-04-12T13:00:00
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लेखकों के लिए Irene चोई 1 छवि और मदद और चर्चा के लिए प्रयोगशाला के अन्य सदस्यों में भ्रूण सिर illustrating के लिए धन्यवाद देना चाहूंगा. यह काम NIH अनुदान DE012728 (TW) द्वारा समर्थित है

1. Dispase द्वितीय तैयार करें <ol><li> ताजा HEPES-buffered खारा (HBS) (50 मिमी HEPES / KOH पीएच 7.4, 150 मिमी NaCl) तैयार 16.8 मिलीलीटर Ultrapure एच 2 ओ में 2 मिलीलीटर 0.5 एम / HEPES KOH पीएच 7.4 और 1.2 मिलीग्राम 2.5 एम NaCl जोड़ें </li><li> 10 मिग्रा / मिली Dispase द्वितीय बनाओ. वजन 0.2...

<ol>
	<li>Wilkie, A. O., Morriss-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+craniofacial+development+and+malformation.">Genetics of craniofacial development and malformation.</a> Nat. Rev. Genet. 2, 458-468 (2001).</li><li>Gritli-Linde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+2+-+The+Etiopathogenesis+of+cleft+lip+and+cleft+palate:+usefulness+and+caveats+of+mouse+models.">Chapter 2 - The Etiopathogenesis of cleft lip and cleft palate: usefulness and caveats of mouse models.</a> Current Topics in Developmental Biology. 84, 37-138 (2008).</li><li>Schutte, B. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+and+factors+of+orofacial+clefts.">The many faces and factors of orofacial clefts.</a> Human Molecular Genetics. 8, 1-7 (1999).</li><li>Chai, Y., Maxson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+craniofacial+morphogenesis.">Recent advances in craniofacial morphogenesis.</a> Dev. Dyn. 235, 2353-2375 (2006).</li><li>Jiang, R., Bush, J. O., Lidral, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+upper+lip:+Morphogenetic+and+molecular+mechanisms.">Development of the upper lip: Morphogenetic and molecular mechanisms.</a> Dev. Dyn. 235, 1152-1166 (2006).</li><li>Reid, B. S., Yang, H., Melvin, V. S., Taketo, M. M., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectodermal+WNT/&#946;-catenin+signaling+shapes+the+mouse+face.">Ectodermal WNT/&#946;-catenin signaling shapes the mouse face.</a> Developmental Biology. 349, 261-269 (2011).</li><li>Feng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+analysis+of+gene+expression+during+growth+and+fusion+of+the+mouse+facial+prominences.">Spatial and temporal analysis of gene expression during growth and fusion of the mouse facial prominences.</a> PLoS ONE. 4, e8066 (2009).</li><li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks.">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat. Genet. 37 (11), 1181-1186 (2005).</li><li>Nagai, T., Aruga, J., Takada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+mouse+Zic1,+Zic2,+and+Zic3+gene+suggests+an+essential+role+for+Zic+genes+in+body+pattern+formation.">The expression of the mouse Zic1, Zic2, and Zic3 gene suggests an essential role for Zic genes in body pattern formation.</a> Developmental Biology. 182, 299-313 (1997).</li><li>Britsch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+Sox10+is+a+key+regulator+of+peripheral+glial+development.">The transcription factor Sox10 is a key regulator of peripheral glial development.</a> Genes Dev. 15 (1), 66-78 (2001).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल के लिए एक सीधा करने के लिए भ्रूण माउस चेहरे बाहरी झिल्ली और mesenchyme एक प्रारंभिक Dispase द्वितीय उपचार कदम के आधार पर अलग तरीका प्रदान करता है. पिछले अध्ययनों में, हम Dispase द्वितीय उपचार के लिए पहले चे...

<table>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <td>Dispase II (neutral protease, grade II)</td>
 <td>Roche</td>
 <td>4942078001</td>
 <td>Make 10 mg/ml Dispase II stock solution in HBS. Aliquot and store at -20 &deg;C . </td>
 </tr>
 <td>RNAlater</td>
 <td>Ambion</td>
 <td>AM7021</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
</table>

separation of mouse embryonic facial ectoderm and mesenchyme

Orofacial clefts सबसे अक्सर craniofacial दोष है, जो हज़ार newborns दुनिया भर में 1,2 में 1.5 को प्रभावित कर रहे हैं. Orofacial clefting असामान्य चेहरे का विकास 3 के कारण होता है. मानव और माउस, प्रारंभिक और चेहरे के विकास patterning में ऊतक के कई छोटे कलियों, चेहरे 4,5 prominences पर निर्भर करता है. बनती ललाट नाक प्रक्रियाओं (FNP), दाढ़ की हड्डी prominences (MXP) और जबड़े prominences (एमडी): चेहरा छह मुख्य prominences से ली गई है. ये prominences mesenchyme की सूजन है कि एक overlying उपकला में encased हैं से मिलकर. कई प्रजातियों में अध्ययनों से पता चला है कि चेहरे की बाहरी झिल्ली और mesenchyme बीच crosstalk संकेत 6 चेहरे को आकार देने के लिए महत्वपूर्ण है. फिर भी, इन संकेत रिले में शामिल जीन से संबंधित यंत्रवत विवरण की कमी कर रहे हैं. जीन की अभिव्यक्ति के लिए एक व्यापक समझ हासिल करने के लिए एक तरीका है, प्रतिलेखन बाध्यकारी कारक, और chromatin के निशान develo के साथ जुड़ेपिंग चेहरे बाहरी झिल्ली और mesenchyme करने के लिए अलग और अलग ऊतक डिब्बों विशेषताएँ है. यहाँ हम भ्रूण (ई) दिन 10.5, माउस चेहरे गठन कि prominences के विलय से पहले में एक महत्वपूर्ण विकास मंच में चेहरे की बाहरी झिल्ली और mesenchyme को अलग करने के लिए एक विधि उपस्थित थे. हमारे विधि दृष्टिकोण से अनुकूलित है हम पहले विदारक चेहरे 7 prominences के लिए इस्तेमाल किया है. इस पहले के अध्ययन में हम सहज C57BL कार्यरत था / इस तनाव के रूप में 6 चूहों आनुवांशिकी, जीनोमिक्स और चेहरे आकारिकी 8 के लिए एक मानक बन गया है. यहाँ, हालांकि, उपलब्ध ऊतक के अधिक सीमित मात्रा के कारण, हम outbred तनाव सीडी-1 है कि खरीद करने के लिए सस्ता है, खेती - किसानी के लिए और अधिक मजबूत का उपयोग किया है, और कूड़े के प्रति अधिक (12-18) किसी भी जन्मजात से भ्रूण का उत्पादन प्रवृत्त माउस तनाव 8. भ्रूण अलगाव के बाद, तटस्थ protease Dispase द्वितीय पूरे भ्रूण का इलाज करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. फिर, चेहरे prominences टुकड़े करनाएड बाहर, और चेहरे की बाहरी झिल्ली mesenchyme से अलग हो गया था. इस विधि दोनों चेहरे बाहरी झिल्ली और mesenchyme बरकरार रहता है. इस पद्धति का उपयोग के नमूने प्राप्त प्रोटीन का पता लगाने, chromatin immunoprecipitation (चिप) परख, माइक्रोएरे अध्ययन, और शाही सेना seq सहित तकनीक के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

Dispase द्वितीय उपचार के बाद भ्रूण की बाहरी झिल्ली को ढीला हो जाता है. चेहरे prominences विच्छेदन (2A चित्रा) के बाद बरकरार होना चाहिए. पृथक चेहरे बाहरी झिल्ली स्पष्ट और mesenchyme ऊतक (चित्रा 2B) के मुक्त है. प्रो?...

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Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme

भ्रूण चेहरे बाहरी झिल्ली और mesenchyme की जुदाई के लिए एक प्रोटोकॉल में वर्णित है. हम Dispase द्वितीय का उपयोग करने के लिए पूरे भ्रूण पहले इलाज, पूरे चेहरे prominences बाहर टुकड़े करना, और फिर चेहरे बाहरी झिल्ली और mesenchyme अलग.

माउस भ्रूणीय चेहरे बाहरी झिल्ली और mesenchyme के पृथक्करण

 Orofacial clefts are the most frequent  craniofacial defects, which affect 1.5 in 1,000 newborns worldwide1,2. Orofacial clefting is caused by abnormal ...

Research

JoVE Journal

Biology

Electrophoretic Separation of Proteins

प्रोटीन के electrophoretic पृथक्करण

Electrophoresis is used to separate complex mixtures of proteins (e.g., from cells, subcellular fractions, column fractions, or immunoprecipitates), to ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

अलगाव और माउस भ्रूणीय कीटाणु कक्ष की व्युत्पत्ति

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Vivo इमेजिंग और डिम्बग्रंथि के कैंसर के एक Orthotopic माउस मॉडल में चिकित्सीय उपचार में

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

Adenovirus की मध्यस्थता संवर्धित प्राथमिक माउस भ्रूणीय Fibroblasts में संकेतन अणुओं के आनुवंशिक हटाना

The ability to genetically remove specific components of various cell signalling cascades has been an integral tool in modern signal transduction ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

और भ्रूण माउस किडनी की nephrogenic क्षेत्र से कक्ष के अलगाव और संस्कृति

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

फ्लोरोसेंट प्रोटीन के Polarized में स्थानान्तरण Xenopus WNT सिगनल उत्तर में बाह्य त्वक स्तर

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

Electroporation of Craniofacial Mesenchyme

Craniofacial mesenchyme की electroporation

Electroporation is an efficient method of delivering DNA and other charged macromolecules into tissues at precise time points and in precise locations. ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

माउस भ्रूण fibroblast कोशिकाओं संवर्धन मानव भ्रूण और प्रेरित pluripotent स्टेम सेल के लिए उपयुक्त की तैयारी

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

के लिए एक प्रणाली<em&gt; पूर्व vivo</emभ्रूण अग्न्याशय&gt; संवर्धन

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

An Explant Assay for Assessing Cellular Behavior of the Cranial Mesenchyme

कपाल mesenchyme की सेलुलर व्यवहार का आकलन के लिए एक Explant परख

The central nervous system is derived from the neural plate that undergoes a series of complex morphogenetic movements resulting in formation of the ...