Name: separation of mouse embryonic facial ectoderm and mesenchyme
Uploaded: 2013-04-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme at JoVE.com

著者らは、胚の図1におけるヘッドやヘルプや議論のための研究室の他のメンバーを説明するためのアイリーン·チョイに感謝したいと思います。この作品は、NIHの助成金DE012728（TW）でサポートされています

1。ディスパーゼIIを調製<ol><li>新鮮なHepes緩衝生理食塩水（HBS）（50mMのHEPES / KOH pH7.4の150mMのNaCl）を準備します。 16.8ミリリットル純H 2 Oに2ミリリットル、0.5M HEPES / KOH pH7.4及び1.2ミリリットル2.5 M NaClを追加</li><li> 10 mg / mlのディスパーゼIIを作る。 0.2グラムディスパーゼII（Roche社、カタログ番号4942078001）を計量し、20ミリリットルHBSに溶解する。長期保存のために-20℃で、個々のエ...

<ol>
	<li>Wilkie, A. O., Morriss-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+craniofacial+development+and+malformation.">Genetics of craniofacial development and malformation.</a> Nat. Rev. Genet. 2, 458-468 (2001).</li><li>Gritli-Linde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+2+-+The+Etiopathogenesis+of+cleft+lip+and+cleft+palate:+usefulness+and+caveats+of+mouse+models.">Chapter 2 - The Etiopathogenesis of cleft lip and cleft palate: usefulness and caveats of mouse models.</a> Current Topics in Developmental Biology. 84, 37-138 (2008).</li><li>Schutte, B. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+and+factors+of+orofacial+clefts.">The many faces and factors of orofacial clefts.</a> Human Molecular Genetics. 8, 1-7 (1999).</li><li>Chai, Y., Maxson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+craniofacial+morphogenesis.">Recent advances in craniofacial morphogenesis.</a> Dev. Dyn. 235, 2353-2375 (2006).</li><li>Jiang, R., Bush, J. O., Lidral, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+upper+lip:+Morphogenetic+and+molecular+mechanisms.">Development of the upper lip: Morphogenetic and molecular mechanisms.</a> Dev. Dyn. 235, 1152-1166 (2006).</li><li>Reid, B. S., Yang, H., Melvin, V. S., Taketo, M. M., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectodermal+WNT/&#946;-catenin+signaling+shapes+the+mouse+face.">Ectodermal WNT/&#946;-catenin signaling shapes the mouse face.</a> Developmental Biology. 349, 261-269 (2011).</li><li>Feng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+analysis+of+gene+expression+during+growth+and+fusion+of+the+mouse+facial+prominences.">Spatial and temporal analysis of gene expression during growth and fusion of the mouse facial prominences.</a> PLoS ONE. 4, e8066 (2009).</li><li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks.">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat. Genet. 37 (11), 1181-1186 (2005).</li><li>Nagai, T., Aruga, J., Takada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+mouse+Zic1,+Zic2,+and+Zic3+gene+suggests+an+essential+role+for+Zic+genes+in+body+pattern+formation.">The expression of the mouse Zic1, Zic2, and Zic3 gene suggests an essential role for Zic genes in body pattern formation.</a> Developmental Biology. 182, 299-313 (1997).</li><li>Britsch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+Sox10+is+a+key+regulator+of+peripheral+glial+development.">The transcription factor Sox10 is a key regulator of peripheral glial development.</a> Genes Dev. 15 (1), 66-78 (2001).</li></ol>

このプロトコルは、初期ディスパーゼIIの処理工程に基づいてマウス胎児顔面外胚葉と間充織を分離するための簡単​​な方法を提供します。以前の研究で、我々はディスパーゼIIの治療の前に顔のプロミネンスの解剖を行ったが、我々は一貫して間充織は &quot;スティッキー&quot;と操作することがより困難になることを発見した。私たちの新しいプロトコルは、この問題を回避できます。ピ?...

<table>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <td>Dispase II (neutral protease, grade II)</td>
 <td>Roche</td>
 <td>4942078001</td>
 <td>Make 10 mg/ml Dispase II stock solution in HBS. Aliquot and store at -20 &deg;C . </td>
 </tr>
 <td>RNAlater</td>
 <td>Ambion</td>
 <td>AM7021</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
</table>

separation of mouse embryonic facial ectoderm and mesenchyme

口腔顔面裂は、世界中の千新生児1,2で1.5に影響を与える最も頻繁に顔面の欠陥である。口腔顔面分裂文形成が異常な顔の開発3によって引き起こされます。ヒトとマウスでは、顔の初期成長とパターン形成は、組織のいくつかの小さな芽、4,5顔面プロミネンスに依存しています。ペアの前頭鼻プロセス（FNP）、上顎プロミネンス（MXP）及び下顎プロミネンス（MDP）：顔が6メインプロミネンスから派生しています。これらのプロミネンスは、上面を覆う上皮に収められて間葉の腫れで構成されています。複数の種における研究では、顔の外胚葉と間充織間のシグナリングのクロストークが面6を形成するための重要であることが示されている。しかし、これらのシグナル伝達に関与する遺伝子のリレーに関する機序の詳細は不足している。一遺伝子発現の包括的な理解を得るための方法、結合転写因子、およびdeveloに関連付けられたクロマチンマーク顔面外胚葉と間充織にpingを実行すると、分離された組織区分を隔離し、特徴付けることである。 ここでは、胎生（E）は10.5、プロミネンスの融合の前にマウスの顔の形成に重要な発達段階で顔の外胚葉と間充織を分離するための方法を提示します。本手法は、我々が以前に顔のプロミネンス7を解剖に使用してきたアプローチから適応されている。この株は遺伝学、ゲノミクスおよび顔面形態8のための標準となっているように、この以前の研究では、近交系のC57BL / 6マウスを採用していた。ここでは、しかし、可能な組織のより数量限定のため、弊社では一切の近交系より腹あたり近交系のCD-1購入したほうが安い株を、畜産のためのより堅牢で、より多くの胚を生成する傾向がある（12-18）を利用してきたマウス系統8。胚の分離に続いて、中性プロテアーゼディスパーゼIIは、全胚を治療するために使用されていました。その後、顔のプロミネンスは解剖されたED出て、顔の外胚葉が間葉から分離した。この方法は、顔の外胚葉と間充織の両方をそのまま保持します。この方法論を用いて得られた試​​料は、タンパク質検出、クロマチン免疫沈降（ChIP）アッセイ、マイクロアレイ研究、およびRNA-seqを含む技術に使用することができます。

ディスパーゼIIの治療後、胚の外胚葉が緩んでいる傾向にある。顔のプロミネンスは解剖（ 図2A）した後、無傷でなければなりません。隔離された顔の外胚葉は、はっきりと間葉組織（ 図2B）は無料です。プロトコルの有効性を決定するために、我々は前脳についてアッセイし、交差汚染を検出するZic3 9、外胚葉特定CDH1 5と逆転写PCRを用いた間葉系特...

Watch this Scientific Journal Video about Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme at JoVE.com

Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme

胚顔面外胚葉と間充織を分離するためのプロトコルが記載されている。我々は、最初の全体の胚を扱う全体フェイシャルプロミネンスを解剖してから、顔の外胚葉と間充織を分離するためにディスパーゼIIを使用。

マウス胚性外胚葉顔と間葉の分離

 Orofacial clefts are the most frequent  craniofacial defects, which affect 1.5 in 1,000 newborns worldwide1,2. Orofacial clefting is caused by abnormal ...

Research

JoVE Journal

Biology

Electrophoretic Separation of Proteins

タンパク質の電気泳動分離

Electrophoresis is used to separate complex mixtures of proteins (e.g., from cells, subcellular fractions, column fractions, or immunoprecipitates), to ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

マウスES胚細胞の単離と導出

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

生体イメージングおよび卵巣癌の同所性マウスモデルにおける治療的処置の

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

培養一次マウス胚線維芽細胞におけるシグナル伝達分子のアデノウイルス媒介遺伝子除去

The ability to genetically remove specific components of various cell signalling cascades has been an integral tool in modern signal transduction ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

マウス胎児の腎臓の腎性帯からの細胞の単離と培養

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

の蛍光タンパク質の偏転アフリカツメガエルWntシグナルへの対応に>外胚葉

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

Electroporation of Craniofacial Mesenchyme

顔面間葉のエレクトロポレーション

Electroporation is an efficient method of delivering DNA and other charged macromolecules into tissues at precise time points and in precise locations. ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

培養ヒト胚および誘導多能性幹細胞に適したマウス胚性線維芽細胞の調製

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

のためのシステム<em&gt; ex vivoで</em胚膵臓&gt;培養

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

An Explant Assay for Assessing Cellular Behavior of the Cranial Mesenchyme

頭蓋間葉の細胞挙動を評価するための外植片アッセイ

The central nervous system is derived from the neural plate that undergoes a series of complex morphogenetic movements resulting in formation of the ...