Name: separation of mouse embryonic facial ectoderm and mesenchyme
Uploaded: 2013-04-12T13:00:00
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저자는 그림 1과 도움과 토론 연구소의 다른 회원 배아 헤드를 도시에 아이린 최 감사드립니다. 이 작품은 NIH 보조금 DE012728 (TW)에 의해 지원됩니다

1. Dispase II 준비 <ol><li> 준비 신선한 Hepes 버퍼 식염 (HBS) (50 밀리미터 Hepes / 코 산도 7.4, 150 MM NaCl).에게 16.8 ML Ultrapure H 2 O.으로 2 ML 0.5 M Hepes / 코 산도 7.4 및 1.2 ML 2.5 M NaCl을 추가 </li><li> 10 MG / ML Dispase II하십시오. 0.2 g Dispase II를 (로슈, 고양이 # 4942078001) 무게 20 ML HBS에 용해. 장기 저장을 위해 -20 ° C에서 각각 Eppendorf 튜브 및 저장소에 1.0 ML의 aliquots를 준비합니다. </li><li> 사용하기 전에 PBS에...

<ol>
	<li>Wilkie, A. O., Morriss-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+craniofacial+development+and+malformation.">Genetics of craniofacial development and malformation.</a> Nat. Rev. Genet. 2, 458-468 (2001).</li><li>Gritli-Linde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+2+-+The+Etiopathogenesis+of+cleft+lip+and+cleft+palate:+usefulness+and+caveats+of+mouse+models.">Chapter 2 - The Etiopathogenesis of cleft lip and cleft palate: usefulness and caveats of mouse models.</a> Current Topics in Developmental Biology. 84, 37-138 (2008).</li><li>Schutte, B. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+and+factors+of+orofacial+clefts.">The many faces and factors of orofacial clefts.</a> Human Molecular Genetics. 8, 1-7 (1999).</li><li>Chai, Y., Maxson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+craniofacial+morphogenesis.">Recent advances in craniofacial morphogenesis.</a> Dev. Dyn. 235, 2353-2375 (2006).</li><li>Jiang, R., Bush, J. O., Lidral, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+upper+lip:+Morphogenetic+and+molecular+mechanisms.">Development of the upper lip: Morphogenetic and molecular mechanisms.</a> Dev. Dyn. 235, 1152-1166 (2006).</li><li>Reid, B. S., Yang, H., Melvin, V. S., Taketo, M. M., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectodermal+WNT/&#946;-catenin+signaling+shapes+the+mouse+face.">Ectodermal WNT/&#946;-catenin signaling shapes the mouse face.</a> Developmental Biology. 349, 261-269 (2011).</li><li>Feng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+analysis+of+gene+expression+during+growth+and+fusion+of+the+mouse+facial+prominences.">Spatial and temporal analysis of gene expression during growth and fusion of the mouse facial prominences.</a> PLoS ONE. 4, e8066 (2009).</li><li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks.">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat. Genet. 37 (11), 1181-1186 (2005).</li><li>Nagai, T., Aruga, J., Takada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+mouse+Zic1,+Zic2,+and+Zic3+gene+suggests+an+essential+role+for+Zic+genes+in+body+pattern+formation.">The expression of the mouse Zic1, Zic2, and Zic3 gene suggests an essential role for Zic genes in body pattern formation.</a> Developmental Biology. 182, 299-313 (1997).</li><li>Britsch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+Sox10+is+a+key+regulator+of+peripheral+glial+development.">The transcription factor Sox10 is a key regulator of peripheral glial development.</a> Genes Dev. 15 (1), 66-78 (2001).</li></ol>

이 프로토콜은 초기 Dispase II 치료 단계에 따라 배아 마우스 얼굴 외배엽과 mesenchyme을 분리 할 수​​있는 간단한 방법을 제공합니다. 이전 연구에서, 우리는 이전 Dispase II 치료에 얼굴 프로미넌스 prominences의 절개를 수행했지만, 우리는 지속적으로 mesenchyme는 &quot;끈적&quot;과 조작이 더 어려워지고있는 것으로 나타났습니다. 새로운 프로토콜은이 문제를 방지합니다. 조합 Dispase II 아래로 pipetting과...

<table>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <td>Dispase II (neutral protease, grade II)</td>
 <td>Roche</td>
 <td>4942078001</td>
 <td>Make 10 mg/ml Dispase II stock solution in HBS. Aliquot and store at -20 &deg;C . </td>
 </tr>
 <td>RNAlater</td>
 <td>Ambion</td>
 <td>AM7021</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
</table>

separation of mouse embryonic facial ectoderm and mesenchyme

Orofacial 갈라진 틈은 1,000 신생아 세계 1,2에서 1.5에 영향을 미치는 가장 자주 craniofacial 결함입니다. Orofacial clefting는 이상 얼굴의 개발 3로 인해 발생합니다. 얼굴의 인간과 마우스, 초기 성장 및 패턴에서 조직의 몇몇 작은 꽃 봉오리, 4,5 얼굴 프로미넌스 prominences에 의존하고 있습니다. 이점 정면 코 프로세스 (FNP), 턱의 프로미넌스 prominences (MxP)와 mandibular의 프로미넌스 prominences (MDP) : 얼굴은 여섯 가지 주요 프로미넌스 prominences에서 파생됩니다. 이러한 프로미넌스 prominences는 놓인 상피으로 쌌다 아르 mesenchyme의 swellings로 구성되어 있습니다. 여러 종의 연구는 얼굴 외배엽과 mesenchyme 사이의 누화 신호를하면 얼굴 6 형성에 중요합니다 것으로 나타났습니다. 그러나,이 신호를 릴레이에 참여 유전자에 관한 기계론의 내용은 부족합니다. 하나의 유전자 표현의 포괄적 인 이해를 얻을 수있는 방법 구속력이 전사 인자 및 develo과 관련된 염색질 마크핑 얼굴 외배엽과 mesenchyme은 분리 조직 구획을 분리하고 특성화하는 것입니다. 여기 배아 일 (E) 10.5 프로미넌스 prominences의 융합을 앞에 마우스 얼굴 형성에 중요한 발달 단계에서 얼굴 외배엽과 mesenchyme를 분리하기위한 방법을 제시한다. 우리의 방법은 우리가 이전에 얼굴 프로미넌스 prominences에게 7 해부에 사용했던 방법에서 구성된다. 이 이전 연구에서 우리는 근친 C57BL을 고용 한 /이 변형 등 6 마우스 유전학, 유전체학 및 얼굴 형태 8에 대한 표준이되었습니다. 여기하지만 가능한 조직의 더 한정된 수량으로 인해, 우리는 축산에 대해보다 강력한를 구입 저렴 outbred CD-1 변형을 활용, 모든 근친보다 쓰레기 당 더 많은 배아 (12-18)를 생산 돌봐 있습니다 마우스 변형 8. 배아 분리 후, 중성 단백 분해 효소 Dispase II는 전체 배아을 치료하는 데 사용되었습니다. 그런 다음 얼굴 프로미넌스 prominences가 해부했다에드 아웃, 그리고 얼굴 외배엽은 mesenchyme에서​​ 분리되었다. 이 방법은 얼굴 외배엽과 mesenchyme 모두 그대로 유지합니다. 이 방법을 사용하여 얻은 샘플은 단백질 감지, 염색질 immunoprecipitation (칩) 분석, microarray 연구 및 RNA-seq 등의 기술을 사용할 수 있습니다.

Dispase II 치료 후, 배아의 외배엽이 늘어 경향이있다. 얼굴 프로미넌스 prominences는 절개 (그림 2A) 후 그대로 있어야합니다. 격리 된 얼굴 외배엽는 명확하고 mesenchyme 조직 (그림 2B)은 무료입니다. 프로토콜의 효능을 결정하기 위해 우리는 forebrain에 대한 assayed 교차 오염을 감지 할 수 Zic3 9 ectodermal 특정 cdh1 5 역 transcriptase PCR을 사용하여 중간 엽 특정 sox10 <sup...

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Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme

태아 얼굴 외배엽과 mesenchyme의 분리를위한 프로토콜이 설명되어 있습니다. 우리는 먼저 전체 배아를 취급하는 전체 얼굴 프로미넌스 prominences을 해부하기 위해 Dispase II를 사용하고 얼굴 외배엽과 mesenchyme 구분합니다.

마우스 배아 얼굴 외배엽과 Mesenchyme의 분리

 Orofacial clefts are the most frequent  craniofacial defects, which affect 1.5 in 1,000 newborns worldwide1,2. Orofacial clefting is caused by abnormal ...

Research

JoVE Journal

Biology

Electrophoretic Separation of Proteins

단백질의 전기 영동 분리

Electrophoresis is used to separate complex mixtures of proteins (e.g., from cells, subcellular fractions, column fractions, or immunoprecipitates), to ...

연구

생물학

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

절연 및 마우스 배아 새싹 세포의 유도

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

교양 차 마우스 배아 섬유아 세포의 신호 분자의 아데노 바이러스 - 매개 유전자 제거

The ability to genetically remove specific components of various cell signalling cascades has been an integral tool in modern signal transduction ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

배아 마우스 신장의 Nephrogenic 지대의 세포의 분리 및 문화

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

의 형광 단백질의 편광 Translocation XenopusWnt 신호에 응답> Ectoderm

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

Electroporation of Craniofacial Mesenchyme

Craniofacial Mesenchyme의 Electroporation

Electroporation is an efficient method of delivering DNA and other charged macromolecules into tissues at precise time points and in precise locations. ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Culturing 인간의 배아와 유도 Pluripotent 줄기 세포에 적합 마우스 배아 Fibroblast 세포의 준비

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

위한 시스템<em&gt; 예 생체</em배아 췌장의&gt; 배양

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

An Explant Assay for Assessing Cellular Behavior of the Cranial Mesenchyme

두개골 Mesenchyme의 셀룰러 행동을 평가하기위한 Explant 분석

The central nervous system is derived from the neural plate that undergoes a series of complex morphogenetic movements resulting in formation of the ...