Name: separation of mouse embryonic facial ectoderm and mesenchyme
Uploaded: 2013-04-12T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Irene Choi для иллюстрации эмбрионов главы на рис 1, а остальные члены лаборатории за помощь и обсуждение. Эта работа выполнена при поддержке гранта NIH DE012728 (TW)

1. Подготовка диспазы II <ol><li> Подготовка свежих Hepes-солевой буфер (HBS) (50 мМ Hepes / KOH рН 7,4, 150 мМ NaCl). Добавить 2 мл 0,5 М Hepes / KOH рН 7,4 и 1,2 мл 2,5 М NaCl в 16,8 мл ультрачистой H 2 O. </li><li> Сделайте 10 мг / мл диспазы II. Взвесить 0,2 г диспазы II (Roche, Cat # 4942078001) и растворить в 20 мл HBS. Подготовка 1,0 мл аликвоты в о...

<ol>
	<li>Wilkie, A. O., Morriss-Kay, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetics+of+craniofacial+development+and+malformation.">Genetics of craniofacial development and malformation.</a> Nat. Rev. Genet. 2, 458-468 (2001).</li><li>Gritli-Linde, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+2+-+The+Etiopathogenesis+of+cleft+lip+and+cleft+palate:+usefulness+and+caveats+of+mouse+models.">Chapter 2 - The Etiopathogenesis of cleft lip and cleft palate: usefulness and caveats of mouse models.</a> Current Topics in Developmental Biology. 84, 37-138 (2008).</li><li>Schutte, B. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+faces+and+factors+of+orofacial+clefts.">The many faces and factors of orofacial clefts.</a> Human Molecular Genetics. 8, 1-7 (1999).</li><li>Chai, Y., Maxson, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+craniofacial+morphogenesis.">Recent advances in craniofacial morphogenesis.</a> Dev. Dyn. 235, 2353-2375 (2006).</li><li>Jiang, R., Bush, J. O., Lidral, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+the+upper+lip:+Morphogenetic+and+molecular+mechanisms.">Development of the upper lip: Morphogenetic and molecular mechanisms.</a> Dev. Dyn. 235, 1152-1166 (2006).</li><li>Reid, B. S., Yang, H., Melvin, V. S., Taketo, M. M., Williams, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectodermal+WNT/&#946;-catenin+signaling+shapes+the+mouse+face.">Ectodermal WNT/&#946;-catenin signaling shapes the mouse face.</a> Developmental Biology. 349, 261-269 (2011).</li><li>Feng, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+and+temporal+analysis+of+gene+expression+during+growth+and+fusion+of+the+mouse+facial+prominences.">Spatial and temporal analysis of gene expression during growth and fusion of the mouse facial prominences.</a> PLoS ONE. 4, e8066 (2009).</li><li>Chia, R., Achilli, F., Festing, M. F., Fisher, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origins+and+uses+of+mouse+outbred+stocks.">The origins and uses of mouse outbred stocks.</a> Nat. Genet. 37 (11), 1181-1186 (2005).</li><li>Nagai, T., Aruga, J., Takada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+the+mouse+Zic1,+Zic2,+and+Zic3+gene+suggests+an+essential+role+for+Zic+genes+in+body+pattern+formation.">The expression of the mouse Zic1, Zic2, and Zic3 gene suggests an essential role for Zic genes in body pattern formation.</a> Developmental Biology. 182, 299-313 (1997).</li><li>Britsch, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+Sox10+is+a+key+regulator+of+peripheral+glial+development.">The transcription factor Sox10 is a key regulator of peripheral glial development.</a> Genes Dev. 15 (1), 66-78 (2001).</li></ol>

Этот протокол обеспечивает простой способ отделить эмбриональных мышь лица эктодермы и мезенхимы основаны на начальном этапе лечения диспазы II. В предыдущих исследованиях, мы провели вскрытие лица протуберанцев до начала лечения диспазы II, но мы последовательно обнаружили, что мезен...

<table>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <td>Dispase II (neutral protease, grade II)</td>
 <td>Roche</td>
 <td>4942078001</td>
 <td>Make 10 mg/ml Dispase II stock solution in HBS. Aliquot and store at -20 &deg;C . </td>
 </tr>
 <td>RNAlater</td>
 <td>Ambion</td>
 <td>AM7021</td>
 <td>&nbsp;</td>
 </tr>
</table>

separation of mouse embryonic facial ectoderm and mesenchyme

Орофациальные трещины являются наиболее частыми черепно-лицевых дефектов, которые влияют 1,5 на 1000 новорожденных по всему миру 1,2. Орофациальные clefting вызвана ненормальной лица 3 развитии. В человека и мыши, начальный рост и структурирование лицо опирается на несколько маленьких бутонов ткани, лицевой протуберанцы 4,5. Лицо является производным от шести основных протуберанцев: парные фронтальные процессы носа (ФНП), верхнечелюстной протуберанцы (MXP) и нижней челюсти протуберанцы (MDP). Эти протуберанцы опухоли состоят из мезенхимы, которые заключены в вышележащие эпителия. Исследования, проведенные в нескольких видов показало, что сигнализации перекрестных помех между лицевой эктодермы и мезенхимы имеет решающее значение для формирования лица 6. Тем не менее, механистического подробная информация о генах, участвующих в этих сигнальных реле отсутствует. Один из способов, чтобы получить полное представление о генной экспрессии, связывания транскрипционных факторов, и хроматина знаки, связанные с развитпинг лица эктодермы и мезенхимы, чтобы выделить и охарактеризовать разделенных отсеков ткани. Здесь мы представляем метод разделения лица эктодермы и мезенхимы в эмбриональный день (E) 10,5, критическую стадию развития в лице мыши образование, которое предшествует слияние протуберанцев. Наш метод адаптирован от подхода, мы уже использовали для рассечения лица протуберанцы 7. В этом раннем исследовании мы заняты инбредных мышей C57BL / 6, как этот штамм стал стандартом для генетика, геномика и лицевой морфологии 8. Здесь, однако, из-за более ограниченного количества тканей в наличии, мы использовали беспородных CD-1 штамм, который дешевле купить, более надежных для животноводства, и стремящихся производить больше эмбрионов (12-18) в помете, чем любой инбредных мыши штамма 8. После эмбриона изоляции, нейтральные протеазы диспазы II был использован для лечения целого эмбриона. Тогда, лица протуберанцев были рассекатьред в аренду, и лица эктодермы была отделена от мезенхимы. Этот метод сохраняет оба лица эктодермы и мезенхимы нетронутыми. Образцы, полученные с использованием этой методики могут быть использованы для методов, включая обнаружение белка, иммунопреципитации хроматина (ChIP) анализа, микрочипов исследований, и РНК-след.

После лечения диспазы II, эктодермы зародыша стремится быть свободной. Лица протуберанцы должны быть неповрежденными после рассечения (рис. 2A). Изолированные лица эктодермы является чистой и свободной от мезенхимы ткани (рис. 2В). Для определения эффективности протоко?...

Watch this Scientific Journal Video about Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme at JoVE.com

Separation of Mouse Embryonic Facial Ectoderm and Mesenchyme

Протокол для разделения эмбриона лица эктодермы и мезенхимы описано. Мы используем диспазы II для лечения целого эмбрионов первых, анализировать все лица протуберанцы, а потом разделить лицевой эктодермы и мезенхимы.

Разделение мышиных эмбриональных лице эктодермы и мезенхимы

 Orofacial clefts are the most frequent  craniofacial defects, which affect 1.5 in 1,000 newborns worldwide1,2. Orofacial clefting is caused by abnormal ...

Research

JoVE Journal

Biology

Electrophoretic Separation of Proteins

Электрофоретического разделения белков

Electrophoresis is used to separate complex mixtures of proteins (e.g., from cells, subcellular fractions, column fractions, or immunoprecipitates), to ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Выделение и Вывод мышиных эмбриональных зародышевых клеток

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

В естественных изображений и лечебных процедур в Ортотопическая мышиной модели рака яичников

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Adenovirus-mediated Genetic Removal of Signaling Molecules in Cultured Primary Mouse Embryonic Fibroblasts

Аденовирус-опосредованной Генетические Удаление сигнальных молекул в культуре первичных мышиных эмбриональных фибробластов

The ability to genetically remove specific components of various cell signalling cascades has been an integral tool in modern signal transduction ...

Isolation and Culture of Cells from the Nephrogenic Zone of the Embryonic Mouse Kidney

Выделение и культуре клеток из нефрогенной зона эмбриональных почек мышь

Embryonic development of the kidney has been extensively studied both as a model for epithelial-mesenchymal interaction in organogenesis and  to gain ...

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Polarized Translocation of Fluorescent Proteins in Xenopus Ectoderm in Response to Wnt Signaling

Поляризованные транслокации флуоресцентных белков в Xenopus Эктодермы в ответ на Wnt сигнализации

Cell polarity is a fundamental property of eukaryotic cells that is dynamically regulated by both intrinsic and extrinsic factors during embryonic ...

Electroporation of Craniofacial Mesenchyme

Электропорации черепно-лицевых Мезенхима

Electroporation is an efficient method of delivering DNA and other charged macromolecules into tissues at precise time points and in precise locations. ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Подготовка мышиных эмбриональных фибробластов подходит для культивирования эмбриональных и индуцированных плюрипотентных стволовых клетках

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

A System for ex vivo Culturing of Embryonic Pancreas

Система<em&gt; Бывших естественных условиях</em&gt; Культивирования эмбриональных поджелудочной железы

The pancreas controls vital functions of our body,  including the production of digestive enzymes and regulation of blood sugar  levels1. Although in the ...

An Explant Assay for Assessing Cellular Behavior of the Cranial Mesenchyme

Эксплантов анализа для оценки сотовой поведение черепно Мезенхима

The central nervous system is derived from the neural plate that undergoes a series of complex morphogenetic movements resulting in formation of the ...