Name: isolation, culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes
Uploaded: 2013-09-24T18:10:00
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Une. Cardiomyocytes Isolation Matériaux (Figure 1) Microdissecting forceps Pince de tissus Pinces hémostatiques délicates Pinces hémostatiques Microdissecting, en dents de scie, pinces courbes Ciseaux d&#39;exploitation, droit Ciseaux d&#39;exploitation, courbe 15 ml des tubes Falcon (5) 60 mm boîte de Petri Phosphate Buffered Saline (PBS) Nylon Mesh - taille des pores 400 p...

<ol>
	<li>Chlopcikova, S., Psotov&#225;, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+rat+cardiomyocytes-a+model+for+the+study+of+morphological,+biochemical+and+electrophysiological+characteristics+of+the+heart.">Neonatal rat cardiomyocytes-a model for the study of morphological, biochemical and electrophysiological characteristics of the heart.</a> Biomedical Papers. , (2001).</li><li>Rosenthal, N., Brown, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mouse+ascending:+perspectives+for+human-disease+models.">The mouse ascending: perspectives for human-disease models.</a> Nat. Cell Biol. 9, 993-999 (2007).</li><li>Ballou, L. M., Lin, R. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapamycin+and+mTOR+kinase+inhibitors.">Rapamycin and mTOR kinase inhibitors.</a> J. Chem. Biol. 1, 27-36 (2008).</li><li>Brette, F., Orchard, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T-Tubule+Function+in+Mammalian+Cardiac+Myocytes.">T-Tubule Function in Mammalian Cardiac Myocytes.</a> Circ Res. , (2003).</li><li>Sakata, Y., Hoit, B., Liggett, S., Walsh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decompensation+of+pressure-overload+hypertrophy+in+G?q-overexpressing+mice.">Decompensation of pressure-overload hypertrophy in G?q-overexpressing mice.</a> Circulation. , (1998).</li><li>Lieu, D. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absence+of+Transverse+Tubules+Contributes+to+Non-Uniform+Ca+2+Wavefronts+in+Mouse+and+Human+Embryonic+Stem+Cell-Derived+Cardiomyocytes.">Absence of Transverse Tubules Contributes to Non-Uniform Ca 2+Wavefronts in Mouse and Human Embryonic Stem Cell-Derived Cardiomyocytes.</a> Stem Cells and Development. 18, 1493-1500 (2009).</li><li>Lim, H., De Windt, L., Mante, J., Kimball, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversal+of+cardiac+hypertrophy+in+transgenic+disease+models+by+calcineurin+inhibition.">Reversal of cardiac hypertrophy in transgenic disease models by calcineurin inhibition.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 32 (4), 697-709 (2000).</li><li>Muthuchamy, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+a+familial+hypertrophic+cardiomyopathy+mutation+in+alpha-tropomyosin+manifests+cardiac+dysfunction.">Mouse model of a familial hypertrophic cardiomyopathy mutation in alpha-tropomyosin manifests cardiac dysfunction.</a> Circ. Res. 85, 47-56 (1999).</li><li>M&#252;ller, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+regulation+of+the+cardiac+sodium+calcium+exchanger+promoter+in+adult+and+neonatal+cardiomyocytes+by+Nkx2.5+and+serum+response+factor.">Differential regulation of the cardiac sodium calcium exchanger promoter in adult and neonatal cardiomyocytes by Nkx2.5 and serum response factor.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 34, 807-821 (2002).</li><li>Epstein, F., Hunter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+pathways+for+cardiac+hypertrophy+and+failure.">Signaling pathways for cardiac hypertrophy and failure.</a> New England Journal of Medicine. 341 (17), 1276-1283 (1999).</li><li>Snopko, R., Aromolaran, A., Karko, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture+modifies+Ca+2++signaling+during+excitation-contraction+coupling+in+neonate+cardiac+myocytes.">Cell culture modifies Ca 2+ signaling during excitation-contraction coupling in neonate cardiac myocytes.</a> Cell Calcium. , (2007).</li><li>Ranu, H., Terracciano, C., Davia, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Na+/Ca2+-exchanger+overexpression+on+excitation-contraction+coupling+in+adult+rabbit+ventricular+myocytes.">Effects of Na+/Ca2+-exchanger overexpression on excitation-contraction coupling in adult rabbit ventricular myocytes.</a> J. Mol. Cell Cardiol. 34 (4), 389-400 (2002).</li><li>Kaab, S., Nuss, H. B., Chiamvimonvat, N., O'Rourke, B., Pak, P. H., Kass, D. A., Marban, E., Tomaselli, G. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ionic+mechanism+of+action+potential+prolongation+in+ventricular+myocytes+from+dogs+with+pacing-induced+heart+failure.">Ionic mechanism of action potential prolongation in ventricular myocytes from dogs with pacing-induced heart failure.</a> Circ. Res. 78 (2), (1996).</li><li>Splawski, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variant+of+SCN5A+sodium+channel+implicated+in+risk+of+cardiac+arrhythmia.">Variant of SCN5A sodium channel implicated in risk of cardiac arrhythmia.</a> Science. 297, 1333-1336 (2002).</li><li>Zhou, Y., Wang, S., Zhu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+and+adenoviral+infection+of+adult+mouse+cardiac+myocytes:+methods+for+cellular+genetic+physiology.">Culture and adenoviral infection of adult mouse cardiac myocytes: methods for cellular genetic physiology.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 279 (1), 429-436 (2000).</li><li>Sussman, M., Lim, H., Gude, N., Taigen, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+cardiac+hypertrophy+in+mice+by+calcineurin+inhibition.">Prevention of cardiac hypertrophy in mice by calcineurin inhibition.</a> Science. , (1998).</li><li>Heinzel, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impairment+of+diazoxide-induced+formation+of+reactive+oxygen+species+and+loss+of+cardioprotection+in+connexin+43+deficient+mice.">Impairment of diazoxide-induced formation of reactive oxygen species and loss of cardioprotection in connexin 43 deficient mice.</a> Circ. Res. 97, 583-586 (2005).</li><li>Li, X., Heinzel, F. R., Boengler, K., Schulz, R., Heusch, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+connexin+43+in+ischemic+preconditioning+does+not+involve+intercellular+communication+through+gap+junctions.">Role of connexin 43 in ischemic preconditioning does not involve intercellular communication through gap junctions.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 36, 161-163 (2004).</li><li>Rockman, H. A., Ross, R. S., Harris, A. N., Knowlton, K. U., Steinhelper, M. E., Field, L. J., Ross, J., Chein, K. 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Physiol. 281 (3), 1104-1112 (2001).</li><li>Bostr&#246;m, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+PGC1-?-dependent+myokine+that+drives+brown-fat-like+development+of+white+fat+and+thermogenesis.">A PGC1-?-dependent myokine that drives brown-fat-like development of white fat and thermogenesis.</a> Nature. 481, 463-468 (2012).</li><li>Liao, R., Jain, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation,+culture,+and+functional+analysis+of+adult+mouse+cardiomyocytes.">Isolation, culture, and functional analysis of adult mouse cardiomyocytes.</a> Methods Mol. Med. 139, 251-262 (2007).</li><li>Volz, A., Piper, H. M., Siegmund, B., Schwartz, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longevity+of+adult+ventricular+rat+heart+muscle+cells+in+serum-free+primary+culture.">Longevity of adult ventricular rat heart muscle cells in serum-free primary culture.</a> J. Mol. Cell. Cardiol. 23, 161-173 (1991).</li><li>Guatimosim, S., Guatimosim, C., Song, L. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Molecular Biology. 689, 205-214 (2010).</li><li>Yang, J., Delaloye, K., Lee, U. S., Cui, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch+Clamp+and+Perfusion+Techniques+for+Studying+Ion+Channels+Expressed+in+Xenopus+oocytes.">Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes.</a> J. Vis. Exp. (47), e2269 (2011).</li><li>Brown, A. L., Johnson, B. E., Goodman, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch+Clamp+Recording+of+Ion+Channels+Expressed+in+Xenopus+Oocytes.">Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in Xenopus Oocytes.</a> J. Vis. Exp. (20), e936 (2008).</li><li>Arman, A. C., Sampath, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patch+Clamp+Recordings+from+Mouse+Retinal+Neurons+in+a+Dark-adapted+Slice+Preparation.">Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation.</a> J. Vis. Exp. (43), e2107 (2010).</li><li>Wen, H., Brehm, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paired+patch+clamp+recordings+from+motor-neuron+and+target+skeletal+muscle+in+zebrafish.">Paired patch clamp recordings from motor-neuron and target skeletal muscle in zebrafish.</a> J. Vis. Exp. (45), e2351 (2010).</li><li>Maier, S., Westenbroek, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+unexpected+role+for+brain-type+sodium+channels+in+coupling+of+cell+surface+depolarization+to+contraction+in+the+heart.">An unexpected role for brain-type sodium channels in coupling of cell surface depolarization to contraction in the heart.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (6), 4073-4078 (2002).</li><li>Shroff, S. G., Saner, D. R., Lal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+micromechanical+properties+of+cultured+rat+atrial+myocytes+measured+by+atomic+force+microscopy.">Dynamic micromechanical properties of cultured rat atrial myocytes measured by atomic force microscopy.</a> Am. J. Physiol. 269, 286-292 (1995).</li><li>Domke, J., Parak, W. J., George, M., Gaub, H. E., Radmacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+the+mechanical+pulse+of+single+cardiomyocytes+with+the+atomic+force+microscope.">Mapping the mechanical pulse of single cardiomyocytes with the atomic force microscope.</a> European Biophysics Journal. 28, 179-186 (1999).</li><li>Smith, B. A., Tolloczko, B., Martin, J. G., Gr&#252;tter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+the+Viscoelastic+Behavior+of+Cultured+Airway+Smooth+Muscle+Cells+with+Atomic+Force+Microscopy:+Stiffening+Induced+by+Contractile+Agonist.">Probing the Viscoelastic Behavior of Cultured Airway Smooth Muscle Cells with Atomic Force Microscopy: Stiffening Induced by Contractile Agonist.</a> Biophysical Journal. 88, 2994-3007 (2005).</li></ol>

Dans ce rapport, nous avons décrit les techniques nécessaires pour permettre l&#39;isolement et la culture des adultes CM du coeur de la souris. Notre technique permet une étude subséquente de la fonction et de l&#39;excitabilité CM utilisant les procédés décrits ci-dessus. Le paramètre critique pour l&#39;étude de la fonctionnalité des adultes MC est la santé et la qualité de l&#39;isolement CM. Comme décrit ci-dessus, nos techniques permettent un rendement élevé de cellules fonctionnelles qui se prête...

Des modèles murins de maladie cardio-vasculaire ont servi d&#39;outils efficaces pour élucider les mécanismes de la maladie 1,2 fondamentales, ainsi que pour l&#39;identification de cibles thérapeutiques potentielles 1,3. En particulier, l&#39;utilisation des deux modèles murins de maladies cardiaques acquises (tels que la pression de surcharge) et 4,5 modèles de souris transgéniques ont fait progresser notre compréhension de la maladie cardiaque 6-8. L&#39;utilisation de techniques de culture de cellules à étudier cascades de signalisation 3,9,10 et modifications dans les protéines individuelles qui sous-tendent l&#39;excitabilité cellulaire et le couplage excitation-contraction dans le coeur de 11 à 13 au niveau de la cellule unique ont complété les modèles in vivo de souris. Cependant, le manque de lignées cellulaires appropriées qui reflètent la structure et la fonction des adultes CM a une limitation importante. Les investigateurs ont tenté de surmonter ce par l&#39;étude de protéines individuelles, telles que des canaux ioniques, dans des systèmes d&#39;expression hétérologues <sup&gt; 14, et bien que ces études nous ont fourni des informations utiles en termes de biophysique de canaux ioniques ou le trafic de protéines, représentation inadéquate de la micro-natif de la CMS est une limitation importante. Deuxièmement, puisque la plupart de ces cellules hétérologues n&#39;ont pas un appareil contractile mature, il n&#39;a pas été possible d&#39;étudier la fonction contractile et l&#39;interaction complexe entre l&#39;excitabilité cellulaire et la contraction. Pour cette raison, les chercheurs se sont tournés vers des cultures de cellules primaires cardiaque pour beaucoup de leurs études fonctionnelles in vitro. Enfin, des études de cardiomyocytes isolés permettent d&#39;évaluer la fonction contractile sans les facteurs de confusion de préparation multicellulaire y compris l&#39;effet de cicatrice ou de la fibrose et de l&#39;orientation des fibres. Néonatales cardiomyocytes ventriculaires de rat primaires (NRVMs) sont relativement facile à la culture, peuvent être infectées par des adénovirus et lentivirus de manipuler l&#39;expression du gène 15, une ont donc été utilisée avec succès une, mais des limites de leur propre. Bien qu&#39;ils fournissent un microenvironnement physiologique 1 et ont été le cheval de bataille du champ de signalisation, des différences substantielles entre la morphologie et l&#39;organisation subcellulaire de NRVMs et cardiomyoctyes adultes en font un modèle pour l&#39;étude des flux ioniques et couplage excitation-contraction dans le coeur adulte insuffisant . Plus particulièrement NRVMs définitif n&#39;ont pas une sous-système tubulaire t-4. Depuis Ca 2 + flux et dynamique dépendent de façon critique sur des T-tubulaire maturité et le réticulum sarcoplasmique (RS) la structure 6, Ca 2 + dynamique et des études fonctionnelles de la contractilité cardiaque dans NRVMs ne sont pas un reflet exact de ces processus critiques dans les cardiomyocytes adultes. De plus, certains composants de voies de signalisation diffèrent entre les souriceaux nouveau-nés et les adultes 9, fournissant ainsi une autre limitation pour étudier les processus de la maladie et leur impact sur l&#39;excitabilité cellulaire et la contractilité dans NRVMs. Enfin, la distribution de la machinerie contractile conduit à un raccourcissement de la cellule multidirectionnel et non uniforme limitant la précision des mesures contractiles. L&#39;utilisation des cardiomyocytes adultes isolés fournit donc un système de modélisation plus précise in vitro. La croissance extraordinaire des connaissances rendue possible par la manipulation génétique de la souris souligne l&#39;importance d&#39;obtenir des cardiomyocytes isolés fonctionnels de souris. En fait, la caractérisation des adultes CM isolés à partir des modèles de souris a mis en lumière de nombreux événements biologiques et pathologiques. CM isolés à partir de modèles de souris transgéniques ont permis d&#39;études du gain ou de la perte de la fonction des protéines sur les propriétés contractiles des cellules simples 2,16, et la viabilité des modèles de maladies telles que l&#39;ischémie / reperfusion 17,18, complétant ainsi les informations obtenues à partir de Des études in vivo sur l&#39;souris soi. Utilisation d&#39;adulte isolé CM de modèles murins de maladie cardiaque acquise 3,19,20 (comme aortique surcharge transversale de pression induite par constriction, qui imite l&#39;hypertension ou la sténose aortique) ou de l&#39;exercice 5,21 (pour la modélisation de l&#39;hypertrophie physiologique) permet à l&#39;examen de l&#39;interaction des cascades de signalisation impliquées dans ces processus avec de l&#39;excitabilité cellulaire et le couplage excitation-contraction au niveau de la cellule unique. En outre, la capacité de manipuler l&#39;expression des gènes en utilisant l&#39;expression du gène conduit adenovirus en adulte CM nous donne l&#39;occasion de disséquer les composants de voies de signalisation complexes. Du point de vue électrophysiologique, la tension de cellule entière et expériences actuelles de serrage sur adulte isolé CM ont été essentiels dans la compréhension de la nature des flux ioniques au départ et dans divers états pathologiques. En raison de la structure complexe de la membrane cellulaire et la prote différentieldans les structures d&#39;échafaudage entre adultes GC et NRVMs ou des lignées de cellules hétérologues, la possibilité de patcher les cellules adultes donne une bien meilleure représentation des effets de certaines protéines membranaires, des protéines structurelles et canaux ioniques partenaires d&#39;interaction sur les composantes électrophysiologiques du cœur adulte. En dépit de ces avantages importants dans l&#39;étude adultes cardiomyocytes murins, l&#39;isolement et la culture de cardiomyocytes de souris adultes ont été difficiles, insistant sur la nécessité d&#39;une description systématique et précise de la méthodologie pour isoler les cardiomyocytes de souris viables et à les maintenir en culture à la poursuite de la manipulation génétique en utilisant virale vecteurs. Des études antérieures ont utilisé soit des adultes de la souris aiguë isolé GC ou adulte de rat cultivés GC. Ces derniers sont plus facile à la culture de la souris adulte MC, et la plupart des expériences de manipulation expression génique in vitro ont utilisé rat adulte GC. Peu d&#39;études ont modifié avec succès et une enquête fonctil&#39;expression du gène onal des adultes de la souris CM, présentant une grande limitation dans le champ d&#39;expériences. Par conséquent, nous présentons ici en détail ces méthodes, modifiés à partir des enquêtes précédentes, pour l&#39;isolement 7,8,22, culture 3,10,15,23, infection adénoviral 11-13,15, et l&#39;analyse fonctionnelle de cardiomyoctyes ventriculaires de souris adultes. Ce protocole d&#39;isolement des résultats dans Ca 2 +, les cardiomyocytes excitables tolérantes que nous avons cultivées avec succès jusqu&#39;à 72 h et transfectées de façon transitoire avec l&#39;adénovirus. La fonctionnalité de ces cellules isolées peuvent être évaluées à l&#39;aide du système d&#39;imagerie et MMSYS 14,24 patch clamp, qui sera également discuté.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of 			Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium Chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>S7653</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Potassium Chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>P9333</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Magnesium Chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>M8266</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HEPES</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>H3375</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium Phosphate 			Monobasic</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>S8282</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>D-glucose minimum</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>G8270</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Taurine</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>T0625</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>2,3-Butanedione 			monoxime</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>B0752</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase B</td>
 <td>Roche Applied 			Science</td>
 <td>11088807001 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase D</td>
 <td>Roche Applied 			Science</td>
 <td>11088858001 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Protease 			XIV from Streptomyces griseus</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>P5147</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Albumin from Bovine 			Serum</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A2153</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium Chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>C8106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Minimum Essential 			Media</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>51411C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Albumin solution 			from bovine serum</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A8412</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>L-glutamine</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>G3126</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Penicillin-Streptomycin</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>P4333</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Insulin-transferrin-sodium 			selenite media supplement</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>I1884</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cesium Chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td><a href="http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/289329?lang=en&amp;region=US" target="_blank">289329</a></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glutamate</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>G3291</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Adenosine 			5'-triphosphate magnesium salt</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>A9187</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ethylene 			glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetraacetic 			acid</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>E3889</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cesium Hydroxide 			Solution</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>232041</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tetraethylammonium 			hydroxide solution</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>86643</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>OptiVisor optical 			glass binocular 			visor</td>
 <td>Dohegan Optical 			Company Inc.</td>
 <td>N/A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Tissue 			forceps, 5.5", 1x2 teeth</td>
 <td>Roboz Scientific</td>
 <td>RS-8164</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Moloney 			forceps - 4.5" (11.5 cm) long slight curve, serrated </td>
 <td>Roboz Scientific</td>
 <td>RS-8254</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dumont 			#3 Forceps, Dumostar, tip size 0.17 x 0.10mm</td>
 <td>Roboz Scientific</td>
 <td>RS-4966</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Packer 			Mosquito Forceps 5" Straight Flat</td>
 <td>Roboz Scientific</td>
 <td>RS-7114</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro 			Dissecting Scissors 4.5" Curved Sharp/Sharp </td>
 <td>Roboz Scientific</td>
 <td>RS-5917</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micro Dissecting Scissors 3.5" Straight Sharp/Sharp20mm</td>
 <td>Roboz Scientific</td>
 <td>RS-5907</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

isolation, culture, and functional characterization of adult mouse cardiomyoctyes

L&#39;utilisation des cardiomyocytes primaires (CMS) dans la culture a fourni un complément puissant pour des modèles murins de la maladie de coeur dans l&#39;avancement de notre compréhension de la maladie de coeur. En particulier, la capacité à étudier l&#39;homéostasie ionique, de la fonction de canal ionique, l&#39;excitabilité cellulaire et le couplage excitation-contraction et leurs altérations dans des conditions pathologiques et par des mutations pathogènes ont conduit à des avancées importantes au niveau des maladies cardiaques. En outre, l&#39;absence d&#39;une ligne suffisante de cellules immortalisées à imiter les adultes GC, et les limites de néonatale CM (qui n&#39;ont pas beaucoup de la caractéristique de la biomécanique structurale et fonctionnelle des adultes MC) dans la culture ont entravé notre compréhension de l&#39;interaction complexe entre les voies de signalisation, les canaux ioniques et les propriétés contractiles du coeur adulte renforcer l&#39;importance d&#39;étudier adultes cardiomyocytes isolés. Ici, nous présentons des procédés pour l&#39;isolement, la culture, la manipulation de l&#39;expression de gène par adenovirus expreprotéines sseD et analyse fonctionnelle ultérieure de cardiomyocytes de la souris adulte. L&#39;utilisation de ces techniques permettra de développer une approche mécanistique dans les voies de régulation de l&#39;excitabilité cellulaire, Ca 2 + dynamique et la contractilité de signalisation et de fournir une caractérisation beaucoup plus physiologiquement pertinents de maladies cardio-vasculaires.

L&#39;isolement des résultats cardiomyoctyes adultes dans des cellules en forme de baguette, striées, et quiescentes (pas spontanément battant) (Figure 5A). Les cellules mortes seront look arrondi et aucun stries seront présents. Cellules au repos peuvent être cultivées et transfectées avec l&#39;adénovirus de manipuler l&#39;expression des gènes (figures 5B et 5C). Après 24 heures de culture, la morphologie des cellules vivantes ne change pas, ils sont encore...

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Isolation, Culture, and Functional Characterization of Adult Mouse Cardiomyoctyes

Nous décrivons ici l&#39;isolement de cardiomyoctyes de souris adultes en utilisant un système de perfusion de Langendorff. Les cellules résultantes sont des ions Ca2 + à tolérance de repos électriquement et peuvent être cultivées et transfectées avec l&#39;adénovirus ou de lentivirus de manipuler l&#39;expression génique. Leur fonctionnalité peut également être analysé en utilisant le système MMSYS et techniques de patch-clamp.

Isolement, culture et caractérisation fonctionnelle des adultes Cardiomyoctyes souris

The use of primary cardiomyocytes (CMs) in culture has provided a powerful complement to murine models of heart disease in advancing our understanding of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection of Hippocampal Dentate Gyrus from Adult Mouse

Dissection de l&#39;hippocampe gyrus denté de souris adulte

The hippocampus is one of the most widely studied areas in the brain because of its important functional role in memory processing and learning, its ...

Recherche

Biologie

Isolation and Culture of Adult Epithelial Stem Cells from Human Skin

Isolement et culture des cellules souches épithéliales adultes de la peau humaine

The homeostasis of all self-renewing tissues is dependent on adult stem cells. As undifferentiated stem cells undergo asymmetric divisions, they generate ...

Isolation and Culture of Neonatal Mouse Cardiomyocytes

Isolement et culture de cardiomyocytes de souris néonatales

Cultured neonatal cardiomyocytes have long been used to study  myofibrillogenesis and myofibrillar functions. Cultured cardiomyocytes allow  for easy ...

Isolation and Culture of Dental Epithelial Stem Cells from the Adult Mouse Incisor

Isolement et culture des cellules souches épithéliales dentaire de l&#39;adulte de souris Incisive

Understanding the cellular and molecular mechanisms that underlie tooth regeneration and renewal has become a topic of great interest1-4, and the mouse ...

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolation and Culture of Adult Mouse Cardiomyocytes for Cell Signaling and in vitro Cardiac Hypertrophy

Isolement et culture de cardiomyocytes adultes de souris pour Signalisation cellulaire et<em&gt; In vitro</em&gt; Hypertrophie cardiaque

Technological advances have made genetically modified mice, including transgenic and gene knockout mice, an essential tool in many research fields. Adult ...

Isolation and Functional Analysis of Mitochondria from Cultured Cells and Mouse Tissue

Isolement et analyse fonctionnelle des mitochondries de cellules cultivées et de tissus de souris

Comparison between two or more distinct groups, such as healthy vs. disease, is necessary to determine cellular status. Mitochondria are at the nexus of ...

Isolation, Culture and Transduction of Adult Mouse Cardiomyocytes

L&#39;isolement, la culture et la transduction des adultes cardiomyocytes souris

Cultured cardiomyocytes can be used to study cardiomyocyte biology using techniques that are complementary to in vivo systems. For example, the purity and ...

Methods for the Isolation, Culture, and Functional Characterization of Sinoatrial Node Myocytes from Adult Mice

Méthodes pour l&#39;isolement, la culture et la caractérisation fonctionnelle des sinoatrial Node myocytes de souris adultes

Sinoatrial node myocytes (SAMs) act as the natural pacemakers of the heart, initiating each heart beat by generating spontaneous action potentials (APs). ...

Isolation and Culture of Primary Mouse Keratinocytes from Neonatal and Adult Mouse Skin

Isolation et culture des kératinocytes de la souris primaire de la peau de souris néonatale et adulte

The keratinocyte (KC) is the predominant cell type in the epidermis, the outermost layer of the skin. Epidermal KCs play a critical role in providing skin ...

Isolation, Characterization, and Differentiation of Cardiac Stem Cells from the Adult Mouse Heart

Isolement, caractérisation et différenciation des cellules souches cardiaques du coeur de souris adulte

Myocardial infarction (MI) is a leading cause of morbidity and mortality around the world. A major goal of regenerative medicine is to replenish the dead ...