Name: assessment of gastric emptying in non-obese diabetic mice using a [13c]-octanoic acid breath test
Uploaded: 2013-03-23T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test at JoVE.com

Esta publicação vídeo foi possível graças ao financiamento do Instituto Nacional de Diabetes e Doenças Digestivas e Renais (NIDDK) para o Projeto Programa de Grant &quot;Patobiologia do Sistema Entérico&quot; DK 68055. Christopher T. Creedon foi apoiado pelo Programa de Mentoria Rochester Escolas Públicas. Agradecemos o Sr. Gary Stoltz para assistência técnica, a Sra. Kristy Zodrow para secretariado assistência e Douglas Dr. Baer, ​​de Los Gatos Research, Inc (Mountain View, CA).

1. Treinamento e habituação dos Ratos <ol><li> Antes da análise, colocar todos os ratos em câmaras de teste de 2-4 horas, com o fluxo de ar constante, a fim de se habituam-as às condições de teste. Isso reduz acentuadamente a níveis de tensão que de outra forma poderiam causar detecção aberrante de esvaziamento gástrico retardado. Tratar os ratinhos do mesmo modo que se a experiência do esvaziamento gástrico foi executado. Prepare gema de ovo (ver mais adiante) sem adição de ácido octanóico e aliment...

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	<li>Yeung, C. K., McCurrie, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+to+investigate+the+inhibitory+effects+of+drugs+on+gastric+emptying+in+the+mouse+in+vivo.">A simple method to investigate the inhibitory effects of drugs on gastric emptying in the mouse in vivo.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 45, 235-240 (2001).</li><li>Osinski, M. A., Seifert, T. R., Cox, B. F., Gintant, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+of+evaluation+of+drug-evoked+changes+in+gastric+emptying+in+mice.">An improved method of evaluation of drug-evoked changes in gastric emptying in mice.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 47, 115-120 (2002).</li><li>Ghoos, Y. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+gastric+emptying+rate+of+solids+by+means+of+a+carbon-labeled+octanoic+acid+breath+test.">Measurement of gastric emptying rate of solids by means of a carbon-labeled octanoic acid breath test.</a> Gastroenterology. 104, 1640-1647 (1993).</li><li>Symonds, E., Butler, R., Omari, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+breath+tests+can+detect+alterations+in+gastric+emptying+in+the+mouse.">Noninvasive breath tests can detect alterations in gastric emptying in the mouse.</a> Eur. J. Clin. Invest. 32, 341-344 (2002).</li><li>Symonds, E. L., Butler, R. N., Omari, T. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+gastric+emptying+in+the+mouse+using+the+[13C]-octanoic+acid+breath+test.">Assessment of gastric emptying in the mouse using the [13C]-octanoic acid breath test.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 27, 671-675 (2000).</li><li>Verhulst, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+ghrelin+in+the+relationship+between+hyperphagia+and+accelerated+gastric+emptying+in+diabetic+mice.">Role of ghrelin in the relationship between hyperphagia and accelerated gastric emptying in diabetic mice.</a> Gastroenterology. 135, 1267-1276 (2008).</li><li>Schoonjans, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+13C-octanoic+acid+breath+test:+validation+of+a+new+noninvasive+method+of+measuring+gastric+emptying+in+rats.">The 13C-octanoic acid breath test: validation of a new noninvasive method of measuring gastric emptying in rats.</a> Neurogastroenterol. Motil. 14, 287-293 (2002).</li><li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determination+of+gastric+emptying+in+nonobese+diabetic+mice.">Determination of gastric emptying in nonobese diabetic mice.</a> Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 293, 1039-1045 (2007).</li><li>Atkinson, M. A., Leiter, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+NOD+mouse+model+of+type+1+diabetes:+as+good+as+it+gets?.">The NOD mouse model of type 1 diabetes: as good as it gets?.</a> Nat. Med. 5, 601-604 (1999).</li><li>Camilleri, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+practice.+Diabetic+gastroparesis.">Clinical practice. Diabetic gastroparesis.</a> N. Engl. J. Med. 356, 820-829 (2007).</li><li>Choi, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme+oxygenase-1+protects+interstitial+cells+of+Cajal+from+oxidative+stress+and+reverses+diabetic+gastroparesis.">Heme oxygenase-1 protects interstitial cells of Cajal from oxidative stress and reverses diabetic gastroparesis.</a> Gastroenterology. 135, 2055-2064 (2008).</li><li>Kashyap, P. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+monoxide+reverses+diabetic+gastroparesis+in+NOD+mice.">Carbon monoxide reverses diabetic gastroparesis in NOD mice.</a> Am. J. Physiol. GI. G298, G1013-G1019 (2010).</li></ol>

A técnica aqui descrita permite uma repetida e não-invasiva de medição in vivo de esvaziamento gástrico em ratos sólido. Este sistema tem a vantagem de que os animais não são retidos na câmara de medição, o que lhes permite mover-se e girar livremente. Uma vez que este é um ambiente desconhecido, os ratos ainda precisam ser treinados e habituados às câmaras de testes para evitar efeitos do estresse sobre o esvaziamento gástrico. De um modo geral, nós assumimos os dados de esvaziamento g...

Este manuscrito descreve as considerações técnicas e metodológicas envolvidas na medição não invasiva do esvaziamento gástrico em ratos. Seguindo o protocolo descrito aqui, os investigadores podem de forma fiável e reproduzível acompanhar as alterações no esvaziamento gástrico, devido ao desenvolvimento de uma doença, estudar o impacto dos agentes farmacológicos sobre o esvaziamento gástrico e seguir a resposta de esvaziamento gástrico para o tratamento de doenças subjacentes ou defeitos 6,8, 11,12. Em publicações anteriores, a aplicação de 13 C do ácido octanóico testes de respiração mostrou ser uma forma útil de medir o esvaziamento gástrico nos seres humanos e animais 3,8. Este trabalho descreve, em detalhe, os procedimentos necessários para obter dados fidedignos sobre a 8 6 para meses necessários para um estudo longitudinal de esvaziamento gástrico em ratos com diabetes. As vantagens de seguir este protocolo, quando comparada com os métodos anteriormente publicados são de que o investigador pode ser assegurado o obtaine dadosd será confiável e reprodutível. Além disso, o sistema automático de recolha e análise de amostras de gás aqui descrita aumenta o número de animais que podem ser seguidos simultaneamente em estudo. No geral, o objetivo deste trabalho é identificar os principais fatores que mantêm a habituação dos ratos para o teste e que reduzir a variabilidade nos resultados obtidos. Para a medição in vivo de esvaziamento gástrico, os ratos são alimentados durante a noite e colocados nas câmaras de ensaio de plástico transparente, com fluxo de ar constante. Depois de os ratos ficam habituados aos tubos, de linha de base exalado 13 níveis de CO 2 são determinadas e o fluxo de ar ajustado de acordo. Em seguida, administrar uma refeição de teste consistindo em gema de ovo misturado com 13 C-rotulado ácido octanóico. Porque os ratos são jejuou e treinados, eles geralmente comem a refeição de teste dentro de 2 min. A administração de ácido octanóico não é absorvido no estômago, mas será retomado no duodeno umd vai ficar metabolizada no fígado em 13 CO 2, o qual é libertado e expirado, resultando num enriquecimento de 13 CO 2 no ar circundante. As amostras de ar são recolhidos em intervalos de tempo determinados e são analisados ​​pelo analisador de isótopo de carbono. O passo limitante da velocidade, em todo este processo é o esvaziamento gástrico e a excreção pulmonar de 13 CO 2 corresponde directamente com o esvaziamento gástrico da refeição rotulados. <img src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50301/50301fig1highres.jpg"/> Figura 1. Esquemática do aparelho de esvaziamento gástrico. Após jejum, os ratos são colocados em câmaras transparentes, permitindo-lhes mover e girar livremente. Um tubo de entrada permite que o influxo de ar fresco e constante e uma saída conduz ao analisador de isótopo para medir a 13 C a 12C em relação a respiração exalada. A câmara também tem uma porta central para fornecimento de alimentos contendo [13 C]-ácido octanóico.

<table border="1"><tbody><tr><td> NOME </td><td> EMPRESA </td><td> NÚMERO CAT </td><td> COMENTÁRIOS </td></tr><tr><td> Uma fonte de fornecimento constante de ar de fluxo, bem como a composição </td><td> central de fornecimento de ar na unidade de pesquisa </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 130 ml câmara de amostragem que tem ar de entrada, de saída de ar, e abertura de administração de alimentos Tubos de plástico para o fornecimento de ar </td><td> Na casa construída </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Octanóico </td><td> Cambridge Isotope Laboratories (Andover, MA) </td><td> CLM-293-1 </td><td></td></tr><tr><td> Para preparar a refeição de ovos: <ul><li> béquer pequeno </li><li> 50 tubo de plástico ml </li><li> Bico de Bunsen </li><li> ovo </li><li> espátula </li></ul></td><td> Qualquer fornecedor </td><td></td><td> Tenteser compatível com o fornecedor de ovos desde que o teor nutritivo e palatabilidade dos ovos pode afectar a ingestão e esvaziamento gástrico da refeição </td></tr><tr><td> Analisador de dióxido de carbono isótopo </td><td> Los Gatos Research Inc. (Mountain View, CA) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

assessment of gastric emptying in non-obese diabetic mice using a [13c]-octanoic acid breath test

Estudos de esvaziamento gástrico em ratos têm sido limitadas pela incapacidade para acompanhar alterações gástricas esvaziamento no mesmo animal uma vez que as técnicas mais vulgarmente utilizados necessitam de matar os animais e recuperação pós-morte de 1,2 a refeição. Esta abordagem evita a estudos longitudinais para determinar alterações no esvaziamento gástrico com a idade e progressão da doença. A comummente utilizados [13 C]-octanóico teste de respiração para os seres humanos ácido 3 foi modificado para utilização em ratinhos e ratos 4-6 e 7 que anteriormente mostraram que este teste é de confiança e sensível às mudanças no esvaziamento gástrico em resposta a drogas e durante progressão da doença diabética 8. Neste vídeo de apresentação do princípio e aplicação prática deste teste modificado é explicado. Como no estudo anterior, os ratinhos NOD LTJ são usados, um modelo de diabetes do tipo 1 9. A proporção destes ratos desenvolvem os sintomas de gastroparesia, uma complicação da diabetes caracterizadas por esvaziamento gástrico retardado, sem obstrução mecânica do estômago 10. Este artigo demonstra como treinar os ratos para testes, como preparar a refeição de teste e obter 4 hr gástricas dados esvaziamento e como analisar os dados obtidos. O analisador de isótopo de carbono utilizado no presente estudo, é adequado para a amostragem automatizada de amostras de ar de até 12 ratinhos, ao mesmo tempo. Esta técnica permite o acompanhamento longitudinal de esvaziamento gástrico a partir de grupos maiores de ratos com diabetes ou outras doenças de longa duração.

Um conjunto de dados representativos a partir de três ratinhos diferentes é mostrada na Figura 2. O gráfico preto representa os pontos de dados de um rato, com o esvaziamento gástrico normal. Ela mostra a fracção de 13 C, que é recuperado no ar exalado, expressa em percentagem da dose administrada por hora expresso como uma função do tempo. A curva azul é a partir de um ratinho com um esvaziamento gástrico acelerado com um valor de meia T de 40 minutos e a curva de vermelho é de u...

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Assessment of Gastric Emptying in Non-obese Diabetic Mice Using a [13C]-octanoic Acid Breath Test

Determinação do esvaziamento gástrico com um não-invasivo [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanóico teste de respiração ácido para gastroparesia rastreamento em camundongos NOD fêmeas LTJ.

Estudo do esvaziamento gástrico em ratos diabéticos não obesos utilizando a [<sup&gt; 13</sup&gt; C]-octanóico teste de respiração Ácido

Gastric emptying studies in mice have been limited by the inability to follow gastric emptying changes in the same animal since the most commonly used ...

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