Name: recording electrical activity from identified neurons in the intact brain of transgenic fish
Uploaded: 2013-04-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Recording Electrical Activity from Identified Neurons in the Intact Brain of Transgenic Fish at JoVE.com

نشكر الدكتور منغ تشين لين والسيدة دونغ يوان للمساعدة التقنية. وأيد هذا العمل من خلال منحة من المعاهد القومية للصحة HD053767 (من الباطن إلى NLW)، وصناديق من قسم علم وظائف الأعضاء ومكتب نائب مدير الجامعة للأبحاث، جامعة كاليفورنيا في لوس انجليس (NLW).

1. تشريح أدمغة من الكبار الميداكا <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخدير الكبار من الذكور أو الإناث (الشكل 1A) من تخبط في 5 مل MS-222 (150 ملغ / لتر، ودرجة الحموضة 7.4)؛ الانتظار بضع دقائق بعد توقف الحركات الخياشيم قبل قطع الرقاب. وقد وافق جميع الإجراءا...

<ol>
	<li>Kah, O., Lethimonier, C., Lareyre, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotrophin-releasing+hormone+(GnRH)+in+the+animal+kingdom.">Gonadotrophin-releasing hormone (GnRH) in the animal kingdom.</a> J. Soc. Biol. 198 (1), 53-60 (2004).</li><li>Ramakrishnan, S., Wayne, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Social+cues+from+conspecifics+alter+electrical+activity+of+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+in+the+terminal+nerve+via+visual+signals.">Social cues from conspecifics alter electrical activity of gonadotropin-releasing hormone neurons in the terminal nerve via visual signals.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 297 (1), R135-R141 (2009).</li><li>Abe, H., Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+neuromodulation+by+a+nonhypophysiotropic+GnRH+system+controlling+motivation+of+reproductive+behavior+in+the+teleost.">Mechanisms of neuromodulation by a nonhypophysiotropic GnRH system controlling motivation of reproductive behavior in the teleost.</a> 57 (6), 665-674 (2011).</li><li>Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tetrodotoxin-resistant+persistent+Na++current+underlying+pacemaker+potentials+of+fish+gonadotrophin-releasing+hormone+neurones.">Tetrodotoxin-resistant persistent Na+ current underlying pacemaker potentials of fish gonadotrophin-releasing hormone neurones.</a> J. Physiol. 482 (Pt. 1), 1-6 (1995).</li><li>Zhao, Y., Wayne, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Kisspeptin1+on+Electrical+Activity+of+an+Extrahypothalamic+Population+of+Gonadotropin-Releasing+Hormone+Neurons+in+Medaka.">Effects of Kisspeptin1 on Electrical Activity of an Extrahypothalamic Population of Gonadotropin-Releasing Hormone Neurons in Medaka.</a> PLoS One. 7 (5), e37909 (2012).</li><li>Wayne, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-cell+electrophysiology+of+gonadotropin-releasing+hormone+neurons+that+express+green+fluorescent+protein+in+the+terminal+nerve+of+transgenic+medaka+(Oryzias+latipes).">Whole-cell electrophysiology of gonadotropin-releasing hormone neurons that express green fluorescent protein in the terminal nerve of transgenic medaka (Oryzias latipes).</a> Biol. Reprod. 73 (6), 1228-1234 (2005).</li><li>Okubo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Forebrain+gonadotropin-releasing+hormone+neuronal+development:+insights+from+transgenic+medaka+and+the+relevance+to+X-linked+Kallmann+syndrome.">Forebrain gonadotropin-releasing hormone neuronal development: insights from transgenic medaka and the relevance to X-linked Kallmann syndrome.</a> Endocrinology. 147 (3), 1076-1084 (2006).</li><li>Okubo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+form+of+gonadotropin-releasing+hormone+in+the+medaka,+Oryzias+latipes.">A novel form of gonadotropin-releasing hormone in the medaka, Oryzias latipes.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 276 (1), 298-303 (2000).</li><li>Ramakrishnan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acquisition+of+spontaneous+electrical+activity+during+embryonic+development+of+gonadotropin-releasing+hormone-3+neurons+located+in+the+terminal+nerve+of+transgenic+zebrafish+(Danio+rerio).">Acquisition of spontaneous electrical activity during embryonic development of gonadotropin-releasing hormone-3 neurons located in the terminal nerve of transgenic zebrafish (Danio rerio).</a> Gen. Comp. Endocrinol. 168 (3), 401-407 (2010).</li><li>Abraham, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+gonadotropin-releasing+hormone-3+neuron+ablation+in+zebrafish:+effects+on+neurogenesis,+neuronal+migration,+and+reproduction.">Targeted gonadotropin-releasing hormone-3 neuron ablation in zebrafish: effects on neurogenesis, neuronal migration, and reproduction.</a> Endocrinology. 151 (1), 332-340 (2010).</li><li>Wayne, N. L., Kuwahara, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beta-endorphin+alters+electrical+activity+of+gonadotropin+releasing+hormone+neurons+located+in+the+terminal+nerve+of+the+teleost+medaka+(Oryzias+latipes.">Beta-endorphin alters electrical activity of gonadotropin releasing hormone neurons located in the terminal nerve of the teleost medaka (Oryzias latipes.</a> Gen. Comp. Endocrinol. 150 (1), 41-47 (2007).</li><li>Oka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+types+of+gonadotrophin-releasing+hormone+neurones+and+steroid-sensitive+sexually+dimorphic+kisspeptin+neurones+in+teleosts.">Three types of gonadotrophin-releasing hormone neurones and steroid-sensitive sexually dimorphic kisspeptin neurones in teleosts.</a> J. Neuroendocrinol. 21 (4), 334-338 (2009).</li><li>Molleman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Patch Clamping: An Introductory Guide To Patch Clamp Electrophysiology. , (2003).</li></ol>

هرمون GnRH 3: GFP الأسماك المعدلة وراثيا تقدم نماذج فريدة لدراسة الآليات العصبية الكامنة وراء التكامل العصبية والتنظيم في السيطرة المركزية من السلوكيات التي هي على حد سواء يشارك بصورة مباشرة وغير مباشرة في الإنجاب 3، 8-10. واحدة من مزايا كبيرة من هذا النظام النم...

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Olympus</td>
 <td></td>
 <td>BX50W (Upright)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Amplifier</td>
 <td>Axon Instruments</td>
 <td></td>
 <td>Axoclamp 200B </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>A-D converter</td>
 <td>Computer Interference Corp.</td>
 <td></td>
 <td>Digidata ITC-18 </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cooled CCD camera</td>
 <td>PCO Computer Optics </td>
 <td></td>
 <td>Sensicam</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Xenon lamp</td>
 <td>Sutter Instruments Co.</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>GFP filter set</td>
 <td>Chroma Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Imaging Software</td>
 <td>Intelligent Imaging Innovations</td>
 <td></td>
 <td>Slidebook software </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Electrophysiology Data Acquisition Software</td>
 <td>Axon Instruments</td>
 <td></td>
 <td>Axograph software </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Electrophysiology Data Acquisition Software</td>
 <td>AD Instruments Inc.</td>
 <td></td>
 <td>PowerLab </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Headstage for electrophysiology</td>
 <td>Axon Instruments</td>
 <td></td>
 <td>CV 203BU </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Micromanipulator</td>
 <td>Sutter Instrument Co </td>
 <td>MP-285 </td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Recording Chamber Platform</td>
 <td>Warner Instrument Corp.</td>
 <td></td>
 <td>P1 </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Recording Chamber</td>
 <td>Warner Instrument Corp.</td>
 <td></td>
 <td>RC-26G </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Electrode Puller</td>
 <td>Sutter instruments</td>
 <td></td>
 <td>P87 </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Filament for electrode puller</td>
 <td>Sutter Instruments</td>
 <td>FB330B</td>
 <td>3.0 mm wide trough filament</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>1.5 mm glass capillaries</td>
 <td>World Precision Instruments</td>
 <td>1B150-4</td>
 <td>Microelectrode for recording</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Syringe</td>
 <td>Becton Dickinson</td>
 <td>309586</td>
 <td>3 ml</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MS-222 </td>
 <td>Sigma</td>
 <td>E10521-10G</td>
 <td>Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fish saline</td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>mM: 134 NaCl; 2.9 KCl; 2.1 CaCl2; 1.2 MgCl2; 10 HEPES </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Electrode solution (loose-patch) </td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>mM: 150 NaCl; 3.5 KCl; 2.5 CaCl2; 1.3 MgCl2; 10 HEPES; 10 glucose </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Electrode solution (whole-cell patch) </td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>mM: 112.5 K-gluconate; NaCl; 17.5 KCl; 0.5 CaCl2; 1 MgCl2; 5 MgATP; 1 EGTA; 10 HEPES; 1 GTP; 0.1 leupeptin;10 phospho-creatine </td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

recording electrical activity from identified neurons in the intact brain of transgenic fish

فهم الفيزيولوجيا الخلية من الدوائر العصبية التي تنظم السلوك المعقد هو تتعزز بشكل كبير عن طريق استخدام نظم نموذج التي يمكن من خلالها تنفيذ هذا العمل في إعداد الدماغ سليمة حيث لا يزال الدوائر العصبية في الجهاز العصبي المركزي سليمة. نحن نستخدم الأسماك المعدلة وراثيا التي يتم تمييزها موجهة الغدد التناسلية لإفراز هرمون (هرمون GnRH) الخلايا العصبية وراثيا مع بروتين الفلورية الخضراء لتحديد الهوية في الدماغ سليمة. وتحتوي الأسماك السكان متعددة من الخلايا العصبية هرمون GnRH، ووظائفها تعتمد على موقعها في المخ والجينات هرمون GnRH التي يبدونها 1. فقد ركزنا على مظاهرة لدينا GnRH3 الخلايا العصبية الموجودة في الأعصاب الطرفية (TN) المرتبطة بصيلات الشم باستخدام الدماغ سليمة من الأسماك المعدلة وراثيا الميداكا (الشكل 1B و C). تشير الدراسات إلى أن الخلايا العصبية الميداكا TN-GnRH3 هي neuromodulatory، بوصفها جهاز إرسال المعلومات من البيئة الخارجية إلى الجهاز العصبي المركزي؛ رمهلا لا تلعب دورا مباشرا في تنظيم وظائف الغدد التناسلية النخامية، كما يفعل المعروفة طائي GnRH1 الخلايا العصبية 2، 3. نمط منشط من إمكانات العمل العفوي إطلاق الخلايا العصبية TN-GnRH3 هو خاصية ذاتية 4-6، وتواتر الذي هو عن طريق التضمين الإشارات البصرية من conspecifics 2 وkisspeptin نيوروبيبتيدي 1 5. في هذا الفيديو، ونحن نستخدم خط مستقر من الميداكا المعدلة وراثيا في الخلايا العصبية التي TN-GnRH3 تعبر عن التحوير الذي يحتوي على منطقة المروج من Gnrh3 مرتبطة تعزيز البروتين الفلوري الأخضر 7 لتظهر لك كيفية التعرف على الخلايا العصبية ورصد نشاطهم الكهربائية في الدماغ كله إعداد 6.

ويرد مثال على مجموعات ثنائية من GFP المسمى TN-GnRH3 الخلايا العصبية من الدماغ رفعه من الأسماك الميداكا في أرقام 1B و 1C. كل مجموعة تحتوي على حوالي 8-10 الخلايا العصبية هرمون GnRH. وسجلت أنشطة الخلايا العصبية عفوية من الهدف TN-GnRH3 في الوضع الحالي، المشبك (I = 0) مع م?...

Watch this Scientific Journal Video about Recording Electrical Activity from Identified Neurons in the Intact Brain of Transgenic Fish at JoVE.com

Recording Electrical Activity from Identified Neurons in the Intact Brain of Transgenic Fish

في هذا الفيديو، ونحن سوف تظهر كيفية تسجيل النشاط الكهربائي من الخلايا العصبية التي تم تحديدها واحد في إعداد الدماغ كله، الذي يحافظ على الدارات العصبية المعقدة. نحن نستخدم الأسماك المعدلة وراثيا التي يتم تمييزها موجهة الغدد التناسلية لإفراز هرمون (هرمون GnRH) الخلايا العصبية وراثيا مع بروتين فلوري لتحديد الهوية في إعداد الدماغ سليمة.

تسجيل النشاط الكهربائي من الخلايا العصبية التي تم تحديدها في الدماغ سليمة من الأسماك المعدلة وراثيا

Understanding the cell physiology of neural circuits that regulate complex behaviors is greatly enhanced by using model systems in which this work can be ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

Simultaneous Recording of Calcium Signals from Identified Neurons and Feeding Behavior of Drosophila melanogaster

في وقت واحد من تسجيل إشارات الكالسيوم من الخلايا العصبية التي تم تحديدها وسلوك التغذية من ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em

To study neuronal networks in terms of their function in behavior, we must analyze how neurons operate when each behavioral pattern is generated.  Thus, ...

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

Retrograde Fluorescent Labeling Allows for Targeted Extracellular Single-unit Recording from Identified Neurons In vivo

الفلورسنت وصفها الوراء يسمح لخارج الخلية المستهدفة واحدة وحدة التسجيل من الخلايا العصبية التي تم تحديدها<em&gt; في الجسم الحي</em

The overall goal of this method is to record single-unit responses from an identified population of neurons. In vivo electrophysiological recordings from ...

Voltage-sensitive Dye Recording from Axons, Dendrites and Dendritic Spines of Individual Neurons in Brain Slices

الجهد حساسة من تسجيل صبغ محاور عصبية، التشعبات والعمود الفقري شجيري الخلايا العصبية الفردية في شرائح الدماغ

Understanding the biophysical properties and functional organization of single neurons and how they process information is fundamental for understanding ...

Neural Circuit Recording from an Intact Cockroach Nervous System

العصبية الدائرة تسجيل من الصرصور الجهاز العصبي سليمة

The cockroach ventral nerve cord preparation is a tractable system for neuroethology experiments, neural network modeling, and testing the physiological ...

Intracellular Recording, Sensory Field Mapping, and Culturing Identified Neurons in the Leech, Hirudo medicinalis

Intracellular Recording, Sensory Field Mapping, and Culturing Identified Neurons in the Leech, Hirudo medicinalis

تسجيل داخل الخلايا، الحسي الميداني رسم الخرائط، والخلايا العصبية التي تم تحديدها في المستنزف، العلقة الطبية</i

The freshwater leech, Hirudo medicinalis, is a versatile model organism that has been used to address scientific questions in the fields of ...

Electrophysiological Recording in the Brain of Intact Adult Zebrafish

تسجيل الكهربية في الدماغ سليمة من اسماك الزرد الكبار

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

A Guide to In vivo Single-unit Recording from Optogenetically Identified Cortical Inhibitory Interneurons

A Guide to In vivo Single-unit Recording from Optogenetically Identified Cortical Inhibitory Interneurons

دليل ل<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تسجيل وحدة واحدة من التي تم تحديدها Optogenetically القشرية التثبيطي Interneurons

A major challenge in neurophysiology has been to characterize the response properties and function of the numerous inhibitory cell types in the cerebral ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

مثقب تسجيل التصحيح، المشبك من الماوس العصبونات الحسية الشمية في الظهارة العصبية السليمة: التحليل الوظيفي من الخلايا العصبية التي تم تحديدها إبداء الرائحة مستقبلات

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

Imaging Neural Activity in the Primary Somatosensory Cortex Using Thy1-GCaMP6s Transgenic Mice

التصوير النشاط العصبي في القشرة الأولية Somatosensory باستخدام Thy1-GCaMP6s الفئران المحورة وراثيا

The mammalian brain exhibits marked symmetry across the sagittal plane. However, detailed description of neural dynamics in symmetric brain regions in ...

Wireless Electrophysiological Recording of Neurons by Movable Tetrodes in Freely Swimming Fish

لاسلكيه الكهربائية تسجيل الخلايا العصبية من قبل Tetrodes المنقولة في بحريه السباحة الأسماك

The neural mechanisms governing fish behavior remain mostly unknown, although fish constitute the majority of all vertebrates. The ability to record brain ...