Name: isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants
Uploaded: 2013-03-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants at JoVE.com

ونحن ممتنون للدعم من المعاهد الوطنية للصحة (أرقام جائزة R00 NS072192 لMKL، HD029178 لAS.L.، و 2 RO1 NS032457 لCAW). MKL وهو حاصل على شهادة الطفل مستشفى بوسطن للتنمية زمالة / زمالة كلية طب شور مدرسة وزميل في مؤسسة ألفرد سلون P.. CAW هو باحث في معهد هوارد هيوز الطبي.

1. عزل الجنين / إعداد ويمكن استخدام هذه التقنية للماوس أو الفئران. في هذا البروتوكول أن نبرهن التقنية وجمع CSF الدماغي تشريح الدماغ مع يزدرع القشرية الجنينية الماوس. سنقوم التعليق على أي اختلافات هامة بالنسبة للفئران مقابل الفئران ا...

<ol>
	<li>Dziegielewska, K. M., Evans, C. A., Lai, P. C., Lorscheider, F. L., Malinowska, D. H., Mollgard, K., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteins+in+cerebrospinal+fluid+and+plasma+of+fetal+rats+during+development.">Proteins in cerebrospinal fluid and plasma of fetal rats during development.</a> Developmental Biology. 83 (1), 193-200 (1981).</li><li>Gato, A., Martin, P., Alonso, M. I., Martin, C., Pulgar, M. A., Moro, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cerebro-spinal+fluid+protein+composition+in+early+developmental+stages+in+chick+embryos.">Analysis of cerebro-spinal fluid protein composition in early developmental stages in chick embryos.</a> Journal of Experimental Zoology. Part A, Comparative Experimental Biology. 301 (4), 280-289 (2004).</li><li>Gato, A., Moro, J. A., Alonso, M. I., Bueno, D., Mano, D. L., Martin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival,+proliferation,+and+neurogenesis+in+chick+embryos.">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> The Anatomical Record. Part A, Discoveries in Molecular, Cellular, and Evolutionary Biology. 284 (1), 475-484 (2005).</li><li>Parada, C., Gato, A., Aparicio, M., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome+analysis+of+chick+embryonic+cerebrospinal+fluid.">Proteome analysis of chick embryonic cerebrospinal fluid.</a> Proteomics. 6 (1), 312-320 (2006).</li><li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+embryonic+cerebrospinal+fluid+proteome+has+greater+apolipoprotein+and+enzyme+pattern+complexity+than+the+avian+proteome.">Mammalian embryonic cerebrospinal fluid proteome has greater apolipoprotein and enzyme pattern complexity than the avian proteome.</a> Journal of Proteome Research. 4 (6), 2420-2428 (2005).</li><li>Zappaterra, M. D., Lisgo, S. N., Lindsay, S., Gygi, S. P., Walsh, C. A., Ballif, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+proteomic+analysis+of+human+and+rat+embryonic+cerebrospinal+fluid.">A comparative proteomic analysis of human and rat embryonic cerebrospinal fluid.</a> Journal of Proteome Research. 6 (9), 3537-3548 (2007).</li><li>Desmond, M. E., Jacobson, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+brain+enlargement+requires+cerebrospinal+fluid+pressure.">Embryonic brain enlargement requires cerebrospinal fluid pressure.</a> Developmental Biology. 57 (1), 188-198 (1977).</li><li>Lehtinen, M. K., Walsh, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+at+the+brain-cerebrospinal+fluid+interface.">Neurogenesis at the brain-cerebrospinal fluid interface.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 27, 653-679 (2011).</li><li>Lehtinen, M. K., Zappaterra, M. W., Chen, X., Yang, Y. J., Hill, A. D., Lun, M., Maynard, T., Gonzalez, D., Kim, S., Ye, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells.">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69 (5), 893-905 (2011).</li><li>Martin, C., Alonso, M. I., Santiago, C., Moro, J. A., De la Mano, A., Carretero, R., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid.">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> International Journal of Developmental Neuroscience: The Official Journal of the International Society for Developmental Neuroscience. 27 (7), 733-7340 (2009).</li><li>Martin, C., Bueno, D., Alonso, M. I., Moro, J. A., Callejo, S., Parada, C., Martin, P., Carnicero, E., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF2+plays+a+key+role+in+embryonic+cerebrospinal+fluid+trophic+properties+over+chick+embryo+neuroepithelial+stem+cells.">FGF2 plays a key role in embryonic cerebrospinal fluid trophic properties over chick embryo neuroepithelial stem cells.</a> Developmental Biology. 297 (2), 402-416 (2006).</li><li>Zappaterra, M. W., Lehtinen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid:+regulator+of+neurogenesis,+behavior,+and+beyond.">The cerebrospinal fluid: regulator of neurogenesis, behavior, and beyond.</a> Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS. 69 (17), 2863-2878 (2012).</li></ol>

وقد أسفرت الطريقة الموضحة لجمع عينات CSF البطين نقية نسبيا من CSF الجنينية مع تكوين البروتين مستقرة والنشاط المستمر في عدد من المقايسات الخلوية 9. مع تقنية جمع القمامة وحجم جيدة من عشرة E14.5 الفئران، ويمكن للمرء أن يتوقع لجمع 10-15 ميكرولتر من CSF، ومن القمامة من الفئرا...

وCSF هو السائل الذي يغمر في مجمع الظهارة العصبية النامية 1-6 و يقدم الضروري 7 الضغط وتعزيز النمو العظة للدماغ النامية 8-12. لدراسة CSF على مدى نمو الدماغ، وضعنا تقنيات لعزل CSF البطين من تطوير الفئران أو الماوس الأجنة أثناء مراحل مختلفة من التنمية 6،9. وشملت الأساليب السابقة من العزلة باستخدام الزجاج الصغيرة إبر وعزل CSF باستخدام محقن الصغير 1،2. لدينا أسلوب يستخدم الزجاج الصغيرة الشعرية ماصة التي تم سحبها تلميح لإنشاء نقطة متناهية الصغر لاختراق الأنسجة المحسنة. توصيل الزجاج الصغيرة الشعرية ماصة لالشافطة حتى يمكن التحكم CSF أن جمع البطين مع التغيرات في ضغط لطيف. للتحقيق في تأثيرات الخلايا الجذعية من الإشارات CSF، ونحن تشريح إإكسبلنتس القشرية الدماغية، ووضعها على الأغشية البولي، وتطفو بها على مكعب المناسبةlture المتوسطة تستكمل مع عينات CSF 9. مع هذه التقنية، وحجم خفض من وسائل الإعلام كافية لثقافة الأنسجة، مما يسمح لكفاءة استخدام CSF 9.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف / المواد </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> Wiretrop II الإبر الشعرية </td><td> دروموند العلمية </td><td> # 5-000-2020 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> لاصقات ألسويرث </td><td> # 184 SIL المرانة عدة </td><td></td></tr><tr><td> الشافطة أنبوب الجمعية </td><td> سيجما </td><td> # A5177-5EA </td><td></td></tr><tr><td> يمكن التخلص منها تصفية </td><td> بخاخ أو الصيدلية المحلية </td><td> غير متوفرة </td><td> معيار فلتر السجائر </td></tr><tr><td> Roundstock سكين البصريات (15 طعنة سكين درجة) </td><td> العالم آلات دقيقة، وشركة </td><td> # 500250 </td><td></td></tr><tr><td> 35MM طبق زجاج الثقافة القاع </td><td> شركة ماتيك </td><td> # P35G-1.5-14-C </td><td&gt; </td></tr><tr><td> سلك البلاتين إيريديوم </td><td> البحث Tritech </td><td> # PT-9010-010-3FT </td><td></td></tr><tr><td> Nuclepore المسار غشاء-إحفر </td><td> WHATMAN </td><td> # 09-300-57 </td><td></td></tr><tr><td> هانكس المتوازن محلول الملح </td><td> فيشر العلمية </td><td> # SH30031.FS </td><td></td></tr><tr><td> قطع القزحية مقص </td><td> أدوات العلوم الجميلة </td><td> # 15000-02 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants

وCSF هو السائل معقدة مع بروتيوم متفاوتة خلال مراحل تطوره وحيوي في مرحلة البلوغ. خلال التطور الجنيني، ويفرق CSF الوليدة من السائل الذي يحيط بالجنين عند إغلاق أنبوب للالعصبية الأمامية. CSF حجم يزيد على مدى الأيام اللاحقة ثم والخلايا المبطنة للعصبية ظهارية السلف البطينين والمشيمية الضفيرة CSF تولد. والجنينية للاتصالات CSF قمي سطح البطين، من الخلايا الجذعية العصبية في الدماغ والحبل الشوكي النامي. CSF يوفر حاسمة ضغط السائل لتوسيع الدماغ النامية وتوزع النمو إلى عوامل هامة لتيسير الخلايا الاصلية العصبية بطريقة محددة زمنيا. للتحقيق في وظيفة CSF، فمن المهم لعزل عينات نقية من التلوث CSF الجنينية دون من الدم أو الأنسجة النامية الدماغ الانتهائي. هنا، نحن تصف تقنية لعزل عينات نقية نسبيا من البطين الجنينية CSF التي يمكن استخدامها لمجموعة واسعة من المقايسات التجريبية بما في ذلك مطياف الكتلة، الكهربي البروتين، والخلية الأولية والثقافة يزدرع. نحن لشرح كيفية تشريح والثقافة إإكسبلنتس القشرية على الأغشية المسامية البولي من أجل أن تنمو الأنسجة القشرية النامية مع وحدات التخزين من وسائل الإعلام أو انخفاض CSF. مع هذا الأسلوب، يمكن إجراء التجارب باستخدام CSF من مختلف الأعمار أو شروط للتحقيق في النشاط البيولوجي للبروتيوم CSF على الخلايا المستهدفة.

وينبغي جمع CSF تسفر عن واضحة، شفافة السائل. ينبغي أن يكون هناك أي دليل على التلوث من الدم، كما يتضح من السائل الأحمر أو الأصفر المشوب في الرشفة وإيبندورف في أنبوب. يجب أن يكون هناك أيضا أي دليل على الأنسجة في الرشفة وأنبوب إيبندورف. عندما يتم طرد السائل النخاعي، يمكن لل?...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants at JoVE.com

Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

السائل المخي الشوكي البطين (CSF) والاستحمام عصبية ظهارية الدماغية القشرية الخلايا الاصلية خلال نمو المخ في وقت مبكر من الجنين. نحن هنا وصف الأسلوب وضعت لعزل CSF البطين من أجنة القوارض من مختلف الأعمار للتحقيق وظيفتها البيولوجية. وبالإضافة إلى ذلك، علينا أن نبرهن لدينا تشريح الدماغ يزدرع القشرية وتقنية ثقافة تسمح للنمو يزدرع مع وحدات التخزين أدنى من ثقافة المتوسط ​​أو CSF.

عزل السائل المخي الشوكي من أجنة القوارض للاستخدام مع إإكسبلنتس مشرح القشرية الدماغية

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

العزلة وثقافة الخلايا النجمية الماوس القشرية

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

بحكم الرحم الصعق الكهربائي وإإكسبلنتس نصف الكرة المجموع: طريقة بسيطة للدراسات التجريبية التنمية القشرية في وقت مبكر

Cortical development involves complex interactions between neurons and non-neuronal elements including precursor cells, blood vessels, meninges and ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

العزلة وثقافة فصل الخلايا العصبية الحسية من الفرخ الأجنة

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation and Cannulation of Cerebral Parenchymal Arterioles

العزلة وكيفية تركيب الكانيولا من الشلل متني الشرايين

Intracerebral parenchymal arterioles (PAs), which include parenchymal arterioles, penetrating arterioles and pre-capillary arterioles, are high resistance ...

Sample Preparation for Endopeptidomic Analysis in Human Cerebrospinal Fluid

إعداد نموذج لتحليل اندوبيبتيدوميك في السائل الدماغي النخاعي البشرية

This protocol describes a method developed to identify endogenous peptides in human cerebrospinal fluid (CSF). For this purpose, a previously developed ...

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

طريقة محسنة لجمع السائل الدماغي النخاعي من الفئران تخديره

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

Isolation of Cerebral Capillaries from Fresh Human Brain Tissue

عزل من الشعيرات الدموية الدماغية من أنسجة المخ البشري الطازج

Understanding blood-brain barrier function under physiological and pathophysiological conditions is critical for the development of new therapeutic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

نموذج الفئران من إزالة المزيل القشرية الدماغية على نطاق واسع الناجمة عن الحقن داخل الدماغ من السيتوكينات الموالية للالتهابات

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

آثار Neurotrauma الناجمة عن الانفجار على القوارض المضغوط الأوسط الشرايين الدماغية

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy

في التصوير في الجسم من نقل السائل الدماغي الشوكي من خلال جمجمة الماوس سليمة باستخدام التنظير الكلي الفلوري

Cerebrospinal fluid (CSF) flow in rodents has largely been studied using ex vivo quantification of tracers. Techniques such as two-photon microscopy and ...