Name: isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants
Uploaded: 2013-03-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants at JoVE.com

We zijn dankbaar voor de steun van het NIH (Award nummers R00 NS072192 aan MKL, HD029178 om AS.L., en 2 RO1 NS032457 naar CAW). MKL is de ontvanger van de Children&#39;s Hospital Boston Career Development Fellowship / Harvard Medical School Shore Fellowship en een Fellow van de Alfred P. Sloan Foundation. CAW is een onderzoeker van de Howard Hughes Medical Institute.

1. Embryo Isolatie / Voorbereiding Deze techniek kan worden gebruikt voor muis of rat. In dit protocol demonstreren we de CSF collectie techniek en cerebrale corticale explantatie dissectie met muis embryonale hersenen. We zullen reageren op een belangrijke verschillen voor ratten versus muizen die bestaan ​​binnen de algemene technieken. Voor de embryonale leeftijd staging systeem, E1 geclassificeerd als de dag van de plug voor ratten en E0.5 is geclassificeerd als de dag van de plug voor...

<ol>
	<li>Dziegielewska, K. M., Evans, C. A., Lai, P. C., Lorscheider, F. L., Malinowska, D. H., Mollgard, K., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteins+in+cerebrospinal+fluid+and+plasma+of+fetal+rats+during+development.">Proteins in cerebrospinal fluid and plasma of fetal rats during development.</a> Developmental Biology. 83 (1), 193-200 (1981).</li><li>Gato, A., Martin, P., Alonso, M. I., Martin, C., Pulgar, M. A., Moro, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cerebro-spinal+fluid+protein+composition+in+early+developmental+stages+in+chick+embryos.">Analysis of cerebro-spinal fluid protein composition in early developmental stages in chick embryos.</a> Journal of Experimental Zoology. Part A, Comparative Experimental Biology. 301 (4), 280-289 (2004).</li><li>Gato, A., Moro, J. A., Alonso, M. I., Bueno, D., Mano, D. L., Martin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival,+proliferation,+and+neurogenesis+in+chick+embryos.">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> The Anatomical Record. Part A, Discoveries in Molecular, Cellular, and Evolutionary Biology. 284 (1), 475-484 (2005).</li><li>Parada, C., Gato, A., Aparicio, M., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome+analysis+of+chick+embryonic+cerebrospinal+fluid.">Proteome analysis of chick embryonic cerebrospinal fluid.</a> Proteomics. 6 (1), 312-320 (2006).</li><li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+embryonic+cerebrospinal+fluid+proteome+has+greater+apolipoprotein+and+enzyme+pattern+complexity+than+the+avian+proteome.">Mammalian embryonic cerebrospinal fluid proteome has greater apolipoprotein and enzyme pattern complexity than the avian proteome.</a> Journal of Proteome Research. 4 (6), 2420-2428 (2005).</li><li>Zappaterra, M. D., Lisgo, S. N., Lindsay, S., Gygi, S. P., Walsh, C. A., Ballif, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+proteomic+analysis+of+human+and+rat+embryonic+cerebrospinal+fluid.">A comparative proteomic analysis of human and rat embryonic cerebrospinal fluid.</a> Journal of Proteome Research. 6 (9), 3537-3548 (2007).</li><li>Desmond, M. E., Jacobson, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+brain+enlargement+requires+cerebrospinal+fluid+pressure.">Embryonic brain enlargement requires cerebrospinal fluid pressure.</a> Developmental Biology. 57 (1), 188-198 (1977).</li><li>Lehtinen, M. K., Walsh, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+at+the+brain-cerebrospinal+fluid+interface.">Neurogenesis at the brain-cerebrospinal fluid interface.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 27, 653-679 (2011).</li><li>Lehtinen, M. K., Zappaterra, M. W., Chen, X., Yang, Y. J., Hill, A. D., Lun, M., Maynard, T., Gonzalez, D., Kim, S., Ye, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells.">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69 (5), 893-905 (2011).</li><li>Martin, C., Alonso, M. I., Santiago, C., Moro, J. A., De la Mano, A., Carretero, R., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid.">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> International Journal of Developmental Neuroscience: The Official Journal of the International Society for Developmental Neuroscience. 27 (7), 733-7340 (2009).</li><li>Martin, C., Bueno, D., Alonso, M. I., Moro, J. A., Callejo, S., Parada, C., Martin, P., Carnicero, E., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF2+plays+a+key+role+in+embryonic+cerebrospinal+fluid+trophic+properties+over+chick+embryo+neuroepithelial+stem+cells.">FGF2 plays a key role in embryonic cerebrospinal fluid trophic properties over chick embryo neuroepithelial stem cells.</a> Developmental Biology. 297 (2), 402-416 (2006).</li><li>Zappaterra, M. W., Lehtinen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid:+regulator+of+neurogenesis,+behavior,+and+beyond.">The cerebrospinal fluid: regulator of neurogenesis, behavior, and beyond.</a> Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS. 69 (17), 2863-2878 (2012).</li></ol>

De beschreven werkwijze voor ventriculaire CSF collectie leverde relatief zuivere monsters van embryonale CSF met stabiele en consistente eiwitsamenstelling activiteit in een aantal cellulaire assays 9. Met een goede techniek voor het verzamelen en worpgrootte van tien E14.5 muizen, kan men verwachten tot 10-15 ul CSF te verzamelen en uit een nest van E16 ratten, kan men verwachten te verzamelen ca 50-90 ul van CSF. Deze collectie techniek minimaliseert vervuiling door bloed en weefsel, door zorgvuldige obser...

Het CSF is een complexe vloeistof die de ontwikkeling van neuro-epitheel één-zes baadt en biedt essentiële druk 7 en groeibevorderende aanwijzingen voor de zich ontwikkelende hersenen 8-12. Om de CSF te bestuderen in de loop van ontwikkeling van de hersenen, we technieken ontwikkeld om ventriculaire CSF te isoleren van het ontwikkelen van rat of muis embryo&#39;s tijdens de verschillende stadia van ontwikkeling 6,9. Vorige methoden van isolatie opgenomen met behulp van een glazen micro-naald en het isoleren van de CSF met behulp van een micro-injector 1,2. Onze methode maakt gebruik van een glazen micro-capillaire pipet wiens tip is getrokken om een ​​ultrafijne punt voor een betere penetratie te creëren. De glazen micro-capillaire pipet is verbonden met een aspirator zodat ventriculaire CSF verzameling kan worden bediend met lichte veranderingen in druk. Om de stamcellen invloeden van CSF signalen te onderzoeken, ontleden we cerebrale corticale explantaten, leg ze op polycarbonaat membranen, en drijven ze op juiste culture medium aangevuld met CSF monsters 9. Met deze techniek verminderde hoeveelheden media cultuur voldoende zijn om het weefsel, waardoor een efficiënt gebruik van CSF 9.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van de Reagens / Materiaal </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Wiretrop II capillaire naalden </td><td> Drummond Scientific </td><td> # 5-000-2020 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> Ellsworth Lijmen </td><td> # 184 SIL ELAST kit </td><td></td></tr><tr><td> Aspirator binnenband </td><td> Sigma </td><td> # A5177-5EA </td><td></td></tr><tr><td> Wegwerpfilter </td><td> Venturi of lokale apotheek </td><td> niet beschikbaar </td><td> Standaard sigaret filter </td></tr><tr><td> Roundstock oftalmische mes (15 graden stab mes) </td><td> Wereld Precision Instruments, Inc </td><td> # 500250 </td><td></td></tr><tr><td> 35mm glazen bodem cultuur schotel </td><td> MatTek Corp </td><td> # P35G-1.5-14-C </td><td&gt; </td></tr><tr><td> Platina-iridium draad </td><td> TriTech Onderzoek </td><td> # PT-9010-010-3FT </td><td></td></tr><tr><td> Nuclepore Track-Etch Membraan </td><td> Whatman papier </td><td> # 09-300-57 </td><td></td></tr><tr><td> Hanks Balanced Salt Solution </td><td> Fisher Scientific </td><td> # SH30031.FS </td><td></td></tr><tr><td> Iridectomie Schaar </td><td> Fine Science Tools </td><td> # 15.000-02 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants

Het CSF is een complexe vloeistof met een dynamisch variërende proteoom tijdens de ontwikkeling en in de volwassenheid. Tijdens de embryonale ontwikkeling de ontluikende CSF opzichte van het vruchtwater na sluiting van de voorste neurale buis. CSF volume neemt dan de daaropvolgende dagen als de neuro-epitheliale stamcellen langs de ventrikels en de choroidea plexus genereren CSF. De embryonale CSF contacten de apicale, ventriculaire oppervlak van de neurale stamcellen van de ontwikkelende hersenen en het ruggenmerg. CSF biedt cruciaal vloeistofdruk voor de uitbreiding van de zich ontwikkelende hersenen en distribueert belangrijke groeibevorderende factoren om neurale progenitorcellen in een tijdelijk-specifieke wijze. Het onderzoeken van de functie van de CSF, is het belangrijk om zuivere monsters van embryonale CSF isolaat zonder contaminatie van bloed of de ontwikkeling telencephalic weefsel. Hier beschrijven we een techniek relatief zuivere monsters van ventriculaire embryonale CSF dat gebruikt kan worden voor isolerendiverse experimentele proeven, waaronder massaspectrometrie, eiwit elektroforese, en cellen en primaire explantaatkweek. We laten zien hoe te ontleden en cultuur corticale explantaten op poreuze polycarbonaat membranen om de ontwikkeling van corticale weefsel groeien met verminderde volumes van media of CSF. Met deze methode kunnen experimenten uitgevoerd met CSF van verschillende leeftijden of voorwaarden om de biologische activiteit van de CSF proteoom onderzoeken op doelcellen.

De CSF collectie moet opleveren een heldere, transparante vloeistof. Er geen bewijs van besmetting van bloed, zoals blijkt uit een rood of geel getinte vloeistof in de aspiratie en de Eppendorf buis. Er moet ook geen bewijs van weefsel in de aspiratie en Eppendorf buis. Wanneer het CSF gecentrifugeerd, kan men ook microscopisch beoordelen CSF te waarborgen dat er geen vervuiling. In aanwezigheid van verontreiniging, dient het CB worden weggegooid. Van de ene E14.5 muis nest, kan men anticiperen op het verzamelen 10 tot ...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants at JoVE.com

Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

De ventriculaire cerebrospinale vloeistof (CSF) baadt de neuro-epitheliale en cerebrale corticale progenitorcellen tijdens de vroege ontwikkeling van de hersenen in het embryo. Hier beschrijven we de methode ontwikkeld om ventriculaire CSF isoleren van knaagdieren embryo&#39;s van verschillende leeftijden om zijn biologische functie onderzoeken. Daarnaast tonen wij onze cerebrale corticale explantatie dissectie en cultuur techniek die voor explantatie groei mogelijk maakt met een minimale hoeveelheid voedingsoplossing of liquor.

Isolatie van de cerebrospinale vloeistof uit Knaagdieren Embryo&#39;s voor gebruik met Ontleed cerebrale corticale Explantaten

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Isolatie en Cultuur van de Muis Corticale Astrocyten

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

Ex utero elektroporatie en Whole halfrond Explantaten: Een eenvoudige experimentele methode voor bestudering van vroege corticale ontwikkeling

Cortical development involves complex interactions between neurons and non-neuronal elements including precursor cells, blood vessels, meninges and ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolatie en Cultuur van Gedissocieerde sensorische neuronen van Chick Embryo

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation and Cannulation of Cerebral Parenchymal Arterioles

Isolatie en Canulatie van Cerebral Parenchymale Arteriolen

Intracerebral parenchymal arterioles (PAs), which include parenchymal arterioles, penetrating arterioles and pre-capillary arterioles, are high resistance ...

Sample Preparation for Endopeptidomic Analysis in Human Cerebrospinal Fluid

Bereiding van de monsters voor de analyse van de Endopeptidomic van menselijke cerebrospinale vloeistof

This protocol describes a method developed to identify endogenous peptides in human cerebrospinal fluid (CSF). For this purpose, a previously developed ...

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

Een verbeterde methode voor de verzameling van de cerebrospinale vloeistof van narcose muizen

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

Isolation of Cerebral Capillaries from Fresh Human Brain Tissue

Isolatie van cerebrale haarvaten van verse menselijk hersenweefsel

Understanding blood-brain barrier function under physiological and pathophysiological conditions is critical for the development of new therapeutic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

Rat model van wijdverspreide cerebrale corticale demyelinatie geïnduceerd door een intracerebrale injectie van pro-inflammatoire cytokinen

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Gevolgen van Blast-geïnduceerde Neurotrauma voor hydrofoor knaagdier midden cerebrale bloedvaten

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy

In vivo beeldvorming van cerebrospinale vloeistof transport door de intact Mouse schedel met behulp van fluorescentie Macroscopie

Cerebrospinal fluid (CSF) flow in rodents has largely been studied using ex vivo quantification of tracers. Techniques such as two-photon microscopy and ...