Name: isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants
Uploaded: 2013-03-11T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants at JoVE.com

Nous sommes reconnaissants du soutien du NIH (numéros d&#39;attribution R00 NS072192 à MKL, HD029178 à AS.L., et 2 RO1 NS032457 des TCA). MKL est le récipiendaire de l&#39;Hôpital pour enfants de Boston carrière Développement Bourse Bourse / Harvard Medical School et Rive Fellow de la Fondation Alfred P. Sloan. TCA est un chercheur de l&#39;Institut médical Howard Hughes.

1. Isolation embryon / Préparation Cette technique peut être utilisée pour la souris ou le rat. Dans ce protocole, nous allons démontrer la technique de collecte de CSF et cérébrale corticale dissection explant avec la souris embryonnaire du cerveau. Nous allons commenter les différences importantes par rapport aux souris pour les rats qui existent dans les techniques générales. Pour le système de classification d&#39;âge embryonnaire, E1 est classé comme le jour de la fiche pour l...

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	<li>Dziegielewska, K. M., Evans, C. A., Lai, P. C., Lorscheider, F. L., Malinowska, D. H., Mollgard, K., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteins+in+cerebrospinal+fluid+and+plasma+of+fetal+rats+during+development.">Proteins in cerebrospinal fluid and plasma of fetal rats during development.</a> Developmental Biology. 83 (1), 193-200 (1981).</li><li>Gato, A., Martin, P., Alonso, M. I., Martin, C., Pulgar, M. A., Moro, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cerebro-spinal+fluid+protein+composition+in+early+developmental+stages+in+chick+embryos.">Analysis of cerebro-spinal fluid protein composition in early developmental stages in chick embryos.</a> Journal of Experimental Zoology. Part A, Comparative Experimental Biology. 301 (4), 280-289 (2004).</li><li>Gato, A., Moro, J. A., Alonso, M. I., Bueno, D., Mano, D. L., Martin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival,+proliferation,+and+neurogenesis+in+chick+embryos.">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> The Anatomical Record. Part A, Discoveries in Molecular, Cellular, and Evolutionary Biology. 284 (1), 475-484 (2005).</li><li>Parada, C., Gato, A., Aparicio, M., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome+analysis+of+chick+embryonic+cerebrospinal+fluid.">Proteome analysis of chick embryonic cerebrospinal fluid.</a> Proteomics. 6 (1), 312-320 (2006).</li><li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+embryonic+cerebrospinal+fluid+proteome+has+greater+apolipoprotein+and+enzyme+pattern+complexity+than+the+avian+proteome.">Mammalian embryonic cerebrospinal fluid proteome has greater apolipoprotein and enzyme pattern complexity than the avian proteome.</a> Journal of Proteome Research. 4 (6), 2420-2428 (2005).</li><li>Zappaterra, M. D., Lisgo, S. N., Lindsay, S., Gygi, S. P., Walsh, C. A., Ballif, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+proteomic+analysis+of+human+and+rat+embryonic+cerebrospinal+fluid.">A comparative proteomic analysis of human and rat embryonic cerebrospinal fluid.</a> Journal of Proteome Research. 6 (9), 3537-3548 (2007).</li><li>Desmond, M. E., Jacobson, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+brain+enlargement+requires+cerebrospinal+fluid+pressure.">Embryonic brain enlargement requires cerebrospinal fluid pressure.</a> Developmental Biology. 57 (1), 188-198 (1977).</li><li>Lehtinen, M. K., Walsh, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+at+the+brain-cerebrospinal+fluid+interface.">Neurogenesis at the brain-cerebrospinal fluid interface.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 27, 653-679 (2011).</li><li>Lehtinen, M. K., Zappaterra, M. W., Chen, X., Yang, Y. J., Hill, A. D., Lun, M., Maynard, T., Gonzalez, D., Kim, S., Ye, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells.">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69 (5), 893-905 (2011).</li><li>Martin, C., Alonso, M. I., Santiago, C., Moro, J. A., De la Mano, A., Carretero, R., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid.">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> International Journal of Developmental Neuroscience: The Official Journal of the International Society for Developmental Neuroscience. 27 (7), 733-7340 (2009).</li><li>Martin, C., Bueno, D., Alonso, M. I., Moro, J. A., Callejo, S., Parada, C., Martin, P., Carnicero, E., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF2+plays+a+key+role+in+embryonic+cerebrospinal+fluid+trophic+properties+over+chick+embryo+neuroepithelial+stem+cells.">FGF2 plays a key role in embryonic cerebrospinal fluid trophic properties over chick embryo neuroepithelial stem cells.</a> Developmental Biology. 297 (2), 402-416 (2006).</li><li>Zappaterra, M. W., Lehtinen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid:+regulator+of+neurogenesis,+behavior,+and+beyond.">The cerebrospinal fluid: regulator of neurogenesis, behavior, and beyond.</a> Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS. 69 (17), 2863-2878 (2012).</li></ol>

La méthode décrite pour la collecte ventriculaire CSF a abouti à des échantillons relativement purs des embryonnaire CSF avec la composition protéique stable et cohérente dans l&#39;activité d&#39;un certain nombre de tests cellulaires 9. Avec une technique de collecte et de bonne taille de la portée de dix souris E14.5, on peut s&#39;attendre à recueillir 10-15 ul de LCR, et d&#39;une portée de rats E16, on peut s&#39;attendre à recueillir environ 50-90 ul de LCR. Cette technique de collecte de mi...

Le LCR est un liquide complexe qui baigne le développement neuro-épithélium 1-6 et fournit une pression de 7 essentiels et de promouvoir la croissance des indices pour le développement du cerveau 8-12. Pour étudier le CSF au cours du développement du cerveau, nous avons développé des techniques pour isoler le LCR ventriculaire du développement des embryons de rat ou de la souris pendant divers stades de développement 6,9. Les méthodes précédentes de l&#39;isolement à l&#39;aide d&#39;un verre inclus micro-aiguille et l&#39;isolement de la peste porcine classique en utilisant un micro-injecteur 1,2. Notre méthode utilise un verre micro-pipette capillaire dont la pointe a été retiré pour créer un point ultrafin pour la pénétration tissulaire améliorée. Le verre micro-pipette capillaire est relié à un aspirateur de sorte que la collecte CSF ventriculaire peut être commandé avec des modifications de la pression douce. Pour étudier l&#39;influence de cellules souches de signaux CSF, nous disséquer cérébrales corticales explants, les placer sur des membranes de polycarbonate, et les faire flotter sur la cu appropriéesmoyen lture complétée par des échantillons de LCR 9. Avec cette technique, la baisse des volumes de médias sont suffisants pour la culture des tissus, ce qui permet une utilisation efficace des CSF 9.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom de réactif / Matériel </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Wiretrop II aiguilles capillaires </td><td> Drummond Scientific </td><td> # 5-000-2020 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> Ellsworth Adhesives </td><td> N ° 184 SIL ELAST kit </td><td></td></tr><tr><td> Tube d&#39;aspiration </td><td> Sigma </td><td> # A5177-5EA </td><td></td></tr><tr><td> Filtre jetable </td><td> Venturi ou pharmacie locale </td><td> pas disponible </td><td> Filtre de cigarette standard </td></tr><tr><td> Couteau ophtalmique Roundstock (15 couteau couteau degré) </td><td> Mondiale Precision Instruments, Inc </td><td> # 500250 </td><td></td></tr><tr><td> Verre 35mm boîte de culture à fond </td><td> MatTek Corp </td><td> # P35G-1.5-14-C </td><td&gt; </td></tr><tr><td> Platine-iridium fil </td><td> Tritech recherche </td><td> # PT-9010-010-3FT </td><td></td></tr><tr><td> Nuclepore Track-Etch membrane </td><td> Whatman </td><td> # 09-300-57 </td><td></td></tr><tr><td> Solution saline équilibrée de Hanks </td><td> Fisher Scientific </td><td> # SH30031.FS </td><td></td></tr><tr><td> Ciseaux à iridectomie </td><td> Outils Fine Science </td><td> # 15000-02 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants

Le LCR est un liquide complexe avec un protéome de faire varier dynamiquement au cours du développement et chez l&#39;adulte. Au cours du développement embryonnaire, le CSF naissante différencie du liquide amniotique lors de la fermeture du tube neural antérieur. Le volume de LCR augmente alors que les jours qui suivirent les cellules souches neuro-épithéliales qui tapissent les ventricules et le plexus choroïde générer LCR. Les contacts embryonnaires LCR de la surface apicale ventriculaire, des cellules souches neurales du cerveau en développement et la moelle épinière. CSF fournit une pression de fluide essentiel pour le développement du cerveau en développement et distribue croissance importante de facteurs favorisant cellules progénitrices neurales d&#39;une manière temporellement spécifique. Pour étudier la fonction de la LCR, il est important d&#39;isoler des échantillons purs de CSF embryonnaire sans contamination par le sang ou le tissu développer télencéphalique. Nous décrivons ici une technique pour isoler des échantillons relativement purs du ventricule embryonnaire CSF qui peuvent être utilisés pourun grand nombre de tests de laboratoire dont la spectrométrie de masse, électrophorèse des protéines, et la culture de cellules et explant primaire. Nous démontrons comment disséquer et à la culture des explants de cortex sur des membranes de polycarbonate poreux pour grandir développer le tissu cortical avec des volumes réduits de médias ou le LCR. Avec cette méthode, les expériences peuvent être effectuées en utilisant le LCR de différents âges ou de conditions d&#39;enquêter sur l&#39;activité biologique du protéome CSF sur les cellules cibles.

La collection CSF devrait produire un liquide clair, transparent. Il devrait y avoir aucune preuve de contamination par le sang, comme l&#39;a démontré par un fluide teinté de rouge ou jaune dans l&#39;aspiration et dans le tube Eppendorf. Il devrait également y avoir aucun signe de tissu dans l&#39;aspiration et le tube Eppendorf. Lorsque le LCR est centrifugé, on peut aussi évaluer la LCR au microscope pour s&#39;assurer qu&#39;il n&#39;ya pas de contamination. S&#39;il ya des signes de contamination, le CSF doi...

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Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

Le fluide ventriculaire céphalo-rachidien (LCR) baigne les cellules neuro-épithéliales corticales et progénitrices cérébrale au cours du développement précoce du cerveau chez l&#39;embryon. Nous décrivons ici la méthode mise au point pour isoler le LCR ventriculaire à partir d&#39;embryons de rongeurs d&#39;âges différents afin d&#39;étudier sa fonction biologique. En outre, nous démontrons notre dissection cérébrale corticale explant et la technique de culture qui permet la croissance des explants avec des volumes minimaux de milieu de culture ou le LCR.

Isolement du liquide céphalo-rachidien à partir d&#39;embryons de rongeurs pour une utilisation avec des explants cérébraux corticaux disséqué

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

Isolement et culture des astrocytes corticaux de souris

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

Recherche

Neurosciences

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

Ex utero électroporation et explants hémisphère: Une méthode simple expérimental pour les études du développement cortical précoce

Cortical development involves complex interactions between neurons and non-neuronal elements including precursor cells, blood vessels, meninges and ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

Isolement et culture de dissocié neurones sensoriels De embryons de poulet

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation and Cannulation of Cerebral Parenchymal Arterioles

Isolement et Cannulation de parenchyme cérébral artérioles

Intracerebral parenchymal arterioles (PAs), which include parenchymal arterioles, penetrating arterioles and pre-capillary arterioles, are high resistance ...

Sample Preparation for Endopeptidomic Analysis in Human Cerebrospinal Fluid

Préparation des échantillons pour l’analyse de Endopeptidomic dans le liquide céphalorachidien humaine

This protocol describes a method developed to identify endogenous peptides in human cerebrospinal fluid (CSF). For this purpose, a previously developed ...

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

Une méthode améliorée pour la collecte du liquide céphalo-rachidien de souris anesthésiés

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

Isolation of Cerebral Capillaries from Fresh Human Brain Tissue

Isolement des capillaires cérébraux du tissu de cerveau humain frais

Understanding blood-brain barrier function under physiological and pathophysiological conditions is critical for the development of new therapeutic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

Modèle de rat de démyélinisation corticale cérébrale généralisée induite par une injection intracérébrale de cytokines pro-inflammatoires

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Effets de neurotraumatologie induite par le souffle sur les rongeurs sous pression du milieu des artères cérébrales

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy In Vivo

Cerebrospinal fluid (CSF) flow in rodents has largely been studied using ex vivo quantification of tracers. Techniques such as two-photon microscopy and ...