Name: isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants
Uploaded: 2013-03-11T13:00:00
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우리는 NIH (상 번호 MKL에 R00 NS072192, 까악 까악로 AS.L.에 HD029178, 2 RO1 NS032457)의 지원에 감사합니다. MKL은 어린이 병원 보스턴의 경력 개발 친목 / 하버드 의과 대학의 쇼어 친목과 알프레드 P. 슬로안 재단의 연구원의 수상자이다. 까악 까악는 하워드 휴즈 의학 연구소의 탐정입니다.

1. 배아 절연 / 준비 이 기술은 마우스 또는 쥐 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜에서 우리는 CSF 수집 기술 및 마우스 배아의 뇌와 대뇌 피질 explant의 절개를 보여줍니다. 우리는 쥐 대 일반 기술 내에 존재 마우스의 중요한 차이점에 대해 언급합니다. 태아 연령 준비 시스템, E1은 쥐의 플러그 당일로 분류하고 있으며, E0.5는 마우스의 플러그 당일로 분류되어 있습니다. <ol><li>...

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	<li>Dziegielewska, K. M., Evans, C. A., Lai, P. C., Lorscheider, F. L., Malinowska, D. H., Mollgard, K., Saunders, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteins+in+cerebrospinal+fluid+and+plasma+of+fetal+rats+during+development.">Proteins in cerebrospinal fluid and plasma of fetal rats during development.</a> Developmental Biology. 83 (1), 193-200 (1981).</li><li>Gato, A., Martin, P., Alonso, M. I., Martin, C., Pulgar, M. A., Moro, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+cerebro-spinal+fluid+protein+composition+in+early+developmental+stages+in+chick+embryos.">Analysis of cerebro-spinal fluid protein composition in early developmental stages in chick embryos.</a> Journal of Experimental Zoology. Part A, Comparative Experimental Biology. 301 (4), 280-289 (2004).</li><li>Gato, A., Moro, J. A., Alonso, M. I., Bueno, D., Mano, D. L., Martin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+cerebrospinal+fluid+regulates+neuroepithelial+survival,+proliferation,+and+neurogenesis+in+chick+embryos.">Embryonic cerebrospinal fluid regulates neuroepithelial survival, proliferation, and neurogenesis in chick embryos.</a> The Anatomical Record. Part A, Discoveries in Molecular, Cellular, and Evolutionary Biology. 284 (1), 475-484 (2005).</li><li>Parada, C., Gato, A., Aparicio, M., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteome+analysis+of+chick+embryonic+cerebrospinal+fluid.">Proteome analysis of chick embryonic cerebrospinal fluid.</a> Proteomics. 6 (1), 312-320 (2006).</li><li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammalian+embryonic+cerebrospinal+fluid+proteome+has+greater+apolipoprotein+and+enzyme+pattern+complexity+than+the+avian+proteome.">Mammalian embryonic cerebrospinal fluid proteome has greater apolipoprotein and enzyme pattern complexity than the avian proteome.</a> Journal of Proteome Research. 4 (6), 2420-2428 (2005).</li><li>Zappaterra, M. D., Lisgo, S. N., Lindsay, S., Gygi, S. P., Walsh, C. A., Ballif, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+proteomic+analysis+of+human+and+rat+embryonic+cerebrospinal+fluid.">A comparative proteomic analysis of human and rat embryonic cerebrospinal fluid.</a> Journal of Proteome Research. 6 (9), 3537-3548 (2007).</li><li>Desmond, M. E., Jacobson, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+brain+enlargement+requires+cerebrospinal+fluid+pressure.">Embryonic brain enlargement requires cerebrospinal fluid pressure.</a> Developmental Biology. 57 (1), 188-198 (1977).</li><li>Lehtinen, M. K., Walsh, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurogenesis+at+the+brain-cerebrospinal+fluid+interface.">Neurogenesis at the brain-cerebrospinal fluid interface.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 27, 653-679 (2011).</li><li>Lehtinen, M. K., Zappaterra, M. W., Chen, X., Yang, Y. J., Hill, A. D., Lun, M., Maynard, T., Gonzalez, D., Kim, S., Ye, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid+provides+a+proliferative+niche+for+neural+progenitor+cells.">The cerebrospinal fluid provides a proliferative niche for neural progenitor cells.</a> Neuron. 69 (5), 893-905 (2011).</li><li>Martin, C., Alonso, M. I., Santiago, C., Moro, J. A., De la Mano, A., Carretero, R., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+embryonic+brain+development+in+rats+requires+the+trophic+influence+of+cerebrospinal+fluid.">Early embryonic brain development in rats requires the trophic influence of cerebrospinal fluid.</a> International Journal of Developmental Neuroscience: The Official Journal of the International Society for Developmental Neuroscience. 27 (7), 733-7340 (2009).</li><li>Martin, C., Bueno, D., Alonso, M. I., Moro, J. A., Callejo, S., Parada, C., Martin, P., Carnicero, E., Gato, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF2+plays+a+key+role+in+embryonic+cerebrospinal+fluid+trophic+properties+over+chick+embryo+neuroepithelial+stem+cells.">FGF2 plays a key role in embryonic cerebrospinal fluid trophic properties over chick embryo neuroepithelial stem cells.</a> Developmental Biology. 297 (2), 402-416 (2006).</li><li>Zappaterra, M. W., Lehtinen, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cerebrospinal+fluid:+regulator+of+neurogenesis,+behavior,+and+beyond.">The cerebrospinal fluid: regulator of neurogenesis, behavior, and beyond.</a> Cellular and Molecular Life Sciences: CMLS. 69 (17), 2863-2878 (2012).</li></ol>

심실 CSF 수집에 대한 설명 방법은 세포 assays 9 수의 안정적인 단백질 구성하고 일관된 활동과 배아 CSF의 비교적 순수한 샘플을 굴복했다. 좋은 수집 기술 개 E14.5 마우스 쓰레기의 크기로, 하나는 CSF의 10-15 μl를 수집하는 기대 수 있으며, E16 쥐의 쓰레기로부터, 하나는 CSF의 50-90 μl에 대해 수집 기대할 수 있습니다. 이 컬렉션 기술은주의 관찰, 원심 분리하고, 세포 파편 또는 혈액 가미의 ?...

CSF는 개발 neuroepithelium 1-6 bathes 및 개발 뇌 8-12에 대한 단서를 홍보하는 중요한 압력 7 성장을 제공하는 복잡한 유체입니다. 뇌 개발의 과정을 통해 CSF를 연구하기 위해, 우리는 개발 6,9의 다양한 단계에서 쥐 또는 마우스 배아를 개발에서 심실 CSF를 분리하는 기술을 개발했다. 고립 이전 방법은 유리 마이크로 바늘을 사용하고 마이크로 주사기 1,2을 사용하여 CSF를 분리 포함되어 있습니다. 우리의 방법 누구의 팁 향상된 조직 침투를위한 초 미립 지점을 만들 당겨 된 유리 마이크로 모세관 피펫을 이용하고 있습니다. 그 심실 CSF 모음 압력 부드러운 변화를 제어 할 수 있도록 유리 마이크로 모세관 피펫는 흡인기에 연결되어 있습니다. CSF 신호의 줄기 세포 영향을 조사하기 위해, 우리는 대뇌 피질의 explants를 해부 폴리 카보네이트 멤브레인에 넣어, 그리고 적절한 세제곱에 흘려 보내곤lture 매체 CSF 샘플을 9 보충. 이 기술을 통해 미디어의 감소 권 CSF 9 효율적으로 사용할 수 있도록, 문화, 조직을하기에 충분한 수 있습니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 / 재료의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 </td></tr><tr><td> Wiretrop II 모세관 바늘 </td><td> Drummond 과학 </td><td> # 5-000-2020 </td><td></td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> 엘스 워드 접착제 </td><td> # 184 SIL ELAST 키트 </td><td></td></tr><tr><td> 흡인기 관 조립 </td><td> 시그마 </td><td> # A5177-5EA </td><td></td></tr><tr><td> 일회용 필터 </td><td> 벤 투리 관 또는 지방 약국 </td><td> 사용할 수 없습니다 </td><td> 표준 담배 필터 </td></tr><tr><td> Roundstock의 opthalmic의 칼 (15도 찔린 칼) </td><td> 세계 정밀 기기 주식회사 </td><td> # 500250 </td><td></td></tr><tr><td> 35mm 유리 바닥 문화 요리 </td><td> MatTek 주식회사 </td><td> # P35G - 1.5-14-C </td><td&gt; </td></tr><tr><td> 백금 - 이리듐 와이어 </td><td> Tritech 연구 </td><td> # PT-9010-010-3FT </td><td></td></tr><tr><td> Nuclepore 트랙 - 에칭 막 </td><td> 워트 먼지 </td><td> # 09-300-57 </td><td></td></tr><tr><td> 행크스 균형 소금 솔루션 </td><td> 피셔 과학 </td><td> # SH30031.FS </td><td></td></tr><tr><td> Iridectomy의 가위 </td><td> 정밀 과학 도구 </td><td> # 15000-02 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolation of cerebrospinal fluid from rodent embryos for use with dissected cerebral cortical explants

CSF 개발 전역과 성인에서 동적으로 변화 프로테옴과 복잡한 유체입니다. 배아 개발 과정 초기 CSF는 앞쪽 신경 튜브의 폐쇄시 양수에서 차별화합니다. CSF 볼륨는 심실과 맥락막 얼기 생성 CSF 릴 neuroepithelial 전구 세포 등의 후속 일 동안 증가합니다. 개발 뇌와 척수의 신경 줄기 세포의 배아 CSF 연락처는 꼭대기, 심실 표면. CSF는 개발 뇌의 확장을위한 중요한 유체 압력을 제공하며, 시간적 특정 방식으로 신경 전구 세포에 요소를 홍보하는 중요한 성장을 배포합니다. CSF의 기능을 조사하기 위해 피하거나 개발 telencephalic 조직에서 오염없이 배아 CSF의 순수한 샘플을 분리하는 것이 중요합니다. 여기, 우리는 사용할 수있는 심실 배아 CSF의 비교적 순수한 샘플을 분리 할 수​​있는 기술을 설명질량 분광법, 단백질 전기 영동, 그리고 세포와 기본 explant 문화 등의 실험 assays 다양한. 우리는 미디어 또는 CSF의 감소 볼륨과 개발 대뇌 피질의 조직을 성장하기 위해 다공성 폴리 카보네이트 멤브레인에 대뇌 피질의 explants를 해부과 문화하는 방법을 보여줍니다. 이 방법을 실험 대상 세포에 CSF 프로테옴의 생물학적 활동을 조사하기 위해 다양한 연령이나 조건에서 CSF를 사용하여 수행 할 수 있습니다.

CSF 컬렉션은 깨끗하고 투명한 액체를 얻을 수 있습니다. 기음과 Eppendorf 튜브에 빨간색이나 노란색 물들어 유체에 의해 증명으로 혈액의 오염의 증거가 없어야합니다. 또한 기음과 Eppendorf 튜브에 조직의 증거가 없어야합니다. CSF가 centrifuged 때, 하나는 오염이 없다는 것을 보장하기 위해 미세 CSF를 평가 할 수 있습니다. 오염의 징후가있는 경우, CSF는 폐기해야합니다. 한 E14.5 마우스 쓰레기에서 한...

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Isolation of Cerebrospinal Fluid from Rodent Embryos for use with Dissected Cerebral Cortical Explants

심실 뇌척수 (CSF)는 배아의 초기 뇌 발달 동안 neuroepithelial과 대뇌 피질 전구 세포를 bathes. 여기에는 생물학적 기능을 조사하기 위해 다양한 연령대의 쥐 배아에서 심실 CSF를 분리하기 위해 개발 된 방법을 설명합니다. 또한, 우리는 우리의 대뇌 피질 explant의 해부와 문화 매체 또는 CSF의 최소한의 볼륨으로 explant 성장을 허용 문화 기술을 보여줍니다.

해부하는 뇌 두피 Explants와 함께 사용하기위한 쥐 태아의 뇌척수의 절연

The CSF is a complex fluid with a dynamically varying proteome throughout development and in adulthood. During embryonic development, the nascent CSF ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Isolation and Culture of Mouse Cortical Astrocytes

마우스 두피 Astrocytes의 분리와 문화

Astrocytes  are an abundant cell type in the mammalian brain, yet much remains to be  learned about their molecular and functional characteristics. In ...

연구

신경과학

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

Ex utero Electroporation and Whole Hemisphere Explants: A Simple Experimental Method for Studies of Early Cortical Development

예 자궁 Electroporation 및 전체 반구의 Explants : 초기 두피 개발 연구 간단한 실험 방법

Cortical development involves complex interactions between neurons and non-neuronal elements including precursor cells, blood vessels, meninges and ...

Isolation and Culture of Dissociated Sensory Neurons From Chick Embryos

병아리 배아에서 분리 및 해리 감각 뉴런의 문화

Neurons are multifaceted cells that carry information essential for a variety of functions including sensation, motor movement, learning, and memory. ...

Isolation and Cannulation of Cerebral Parenchymal Arterioles

분리 및 대뇌 실질 세동맥의 캐 뉼러

Intracerebral parenchymal arterioles (PAs), which include parenchymal arterioles, penetrating arterioles and pre-capillary arterioles, are high resistance ...

Sample Preparation for Endopeptidomic Analysis in Human Cerebrospinal Fluid

인간의 중추 신 경계에서 Endopeptidomic 분석을 위한 시료 준비

This protocol describes a method developed to identify endogenous peptides in human cerebrospinal fluid (CSF). For this purpose, a previously developed ...

An Improved Method for Collection of Cerebrospinal Fluid from Anesthetized Mice

마 취 쥐에서 척수의 컬렉션에 대 한 개선된 방법

The cerebrospinal fluid (CSF) is a valuable body fluid for analysis in neuroscience research. It is one of the fluids in closest contact with the central ...

Isolation of Cerebral Capillaries from Fresh Human Brain Tissue

신선한 인간의 뇌 조직에서 뇌 모세 혈관의 절연

Understanding blood-brain barrier function under physiological and pathophysiological conditions is critical for the development of new therapeutic ...

Rat Model of Widespread Cerebral Cortical Demyelination Induced by an Intracerebral Injection of Pro-Inflammatory Cytokines

프로 염증 성 사이토카인의 인트레이스렐 주입에 의해 유도된 광범위한 대뇌 피질 탈량의 쥐 모델

Multiple sclerosis (MS) is the most common immune-mediated disease of the central nervous system (CNS) and progressively leads to physical disability and ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

가압된 설치류에 폭발을 이용한 Neurotrauma의 효과 중간 대뇌 동맥

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

In Vivo Imaging of Cerebrospinal Fluid Transport through the Intact Mouse Skull using Fluorescence Macroscopy

형광 매크로법을 사용하여 그대로 마우스 두개골을 통해 뇌척수액 수송의 생체 내 이미징

Cerebrospinal fluid (CSF) flow in rodents has largely been studied using ex vivo quantification of tracers. Techniques such as two-photon microscopy and ...