Name: separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means
Uploaded: 2013-03-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل منحة PRB CS-009 لومنحة دراسية لشهادة الدكتوراه LC، من الاتحاد الوطني للبحوث والتكنولوجيا ذ Secretaría دي Ciencia (SENACYT)، بنما.

جميع الخطوات من البروتوكول، باستثناء centrifugations، ينبغي القيام بها داخل غطاء للحفاظ على عينة معقمة. 1. في وقت متأخر من مرحلة عزل P. المنجلية المصابة تبدي الكريات الحمر ويمكن فصل جميع المراحل ا...

<ol>
	<li>Jensen, J. B., Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+in+culture:+use+of+outdated+erythrocytes+and+description+of+the+candle+jar+method.">Plasmodium falciparum in culture: use of outdated erythrocytes and description of the candle jar method.</a> J. Parasitology. 63 (5), 883-886 (1977).</li><li>Guzman, I. Y., Francis, S. E., Oksman, A., Smith, C. E., Duffin, K. L., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+specificity+of+the+Plasmodium+falciparum+hemoglobin+degradation+pathway.">Order and specificity of the Plasmodium falciparum hemoglobin degradation pathway.</a> J. Clin. Invest. 93, 1602-1608 (1994).</li><li>Rosenthal, P. J., Meshnick, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin+catabolism+and+iron+utilization+by+malaria+parasites.">Hemoglobin catabolism and iron utilization by malaria parasites.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 83 (2), 131-139 (1996).</li><li>Fitch, C. D., Chevli, R., Kanjananggulpan, P., Dutta, P., Chevli, K., Chou, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+ferriprotoporphyrin+IX+is+a+lytic+agent.">Intracellular ferriprotoporphyrin IX is a lytic agent.</a> Blood. 62 (6), 1165-1168 (1983).</li><li>Hebbel, R. P., Eaton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathobiology+of+heme+interaction+with+the+erythrocyte+membrane.">Pathobiology of heme interaction with the erythrocyte membrane.</a> Semin. Hematol. 26 (2), 136-149 (1989).</li><li>Egan, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemozoin+formation.">Haemozoin formation.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 157 (2), 127-136 (2008).</li><li>Hempelmann, E., Marques, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+malaria+pigment+from+Plasmodium+falciparum.">Analysis of malaria pigment from Plasmodium falciparum.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 32 (1), 25-30 (1994).</li><li>Fitch, C. D., Kanjananggulpan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+ferriprotoporphyrin+IX+in+malaria+pigment.">The state of ferriprotoporphyrin IX in malaria pigment.</a> J. Biol. Chem. 262 (32), 15552-15555 (1987).</li><li>Moore, L. R., Fujioka, H., Williams, P. S., Chalmers, J. J., Grimberg, B., Zimmerman, P. A., Zborowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin+degradation+in+malaria-infected+erythrocytes+determined+from+live+cell+magnetophoresis.">Hemoglobin degradation in malaria-infected erythrocytes determined from live cell magnetophoresis.</a> FASEB J. 20 (6), 747-749 (2006).</li><li>Spadafora, C., Gerena, L., Kopydlowski, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+in+vitro+invasive+capabilities+of+Plasmodium+falciparum+schizonts+isolated+by+Percoll+gradient+or+using+magnetic+based+separation.">Comparison of the in vitro invasive capabilities of Plasmodium falciparum schizonts isolated by Percoll gradient or using magnetic based separation.</a> Malaria J. 10, 96 (2011).</li><li>Jackson, K. E., Spielmann, T., Hanssen, E., Adisa, A., Separovic, F., Dixon, M. W., Trenholme, K. R., Hawthorne, P. L., Gardiner, D. L., Gilberger, T., Tilley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+permeabilization+of+the+host+cell+membrane+of+Plasmodium+falciparum-infected+red+blood+cells+with+streptolysin+O+and+equinatoxin+II.">Selective permeabilization of the host cell membrane of Plasmodium falciparum-infected red blood cells with streptolysin O and equinatoxin II.</a> Biochem. J. 403, 167-175 (2007).</li><li>Goodyer, I. D., Johnson, J., Eisenthal, R., Hayes, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+mature-stage+Plasmodium+falciparum+by+gelatine+flotation.">Purification of mature-stage Plasmodium falciparum by gelatine flotation.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 88 (2), 209-211 (1994).</li><li>Pasvol, G., Wilson, R. J., Smalley, M. E., Brown, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+viable+schizont-infected+red+cells+of+Plasmodium+falciparum+from+human+blood.">Separation of viable schizont-infected red cells of Plasmodium falciparum from human blood.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 72, 87-88 (1978).</li><li>Pertoft, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fractionation+of+cells+and+subcellular+particles+with+Percoll.">Fractionation of cells and subcellular particles with Percoll.</a> J. Biochem. Biophys. Methods. 44 (1-2), 1-30 (2000).</li><li>Paul, F., Roath, S., Melville, D., Warhurst, D. C., Osisanya, J. O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+malaria-infected+erythrocytes+from+whole+blood:+use+of+a+selective+high-gradient+magnetic+separation+technique.">Separation of malaria-infected erythrocytes from whole blood: use of a selective high-gradient magnetic separation technique.</a> The Lancet. 318, 70-71 (1981).</li><li>Trang, D. T., Huy, N. T., Kariu, T., Tajima, K., Kamei, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-step+concentration+of+malarial+parasite-infected+red+blood+cells+and+removal+of+contaminating+white+blood+cells.">One-step concentration of malarial parasite-infected red blood cells and removal of contaminating white blood cells.</a> Malar. J. 3, 7 (2004).</li><li>Nillni, E. A., Londner, M. V., Spira, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+separation+of+uninfected+erythrocytes+from+those+infected+with+Plasmodium+berghei+and+for+isolation+of+artificially+released+parasites.">A simple method for separation of uninfected erythrocytes from those infected with Plasmodium berghei and for isolation of artificially released parasites.</a> Z. Parasitenkd. 64, 279-284 (1981).</li></ol>

في الثقافات المختبر من الملاريا الطفيلية P. يحمل المنجلية تطفلن الدم محدودة، مع أكثر من نصف خلايا الدم الحمراء غير مصاب في أعلى نقطة انتشار الثقافة. معظم البحوث للتجارب، من المستحسن أن تعمل فقط مع الكريات الحمراء المصابة. تحقيقا لهذه الغاية، وهي ت?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> التعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> RPMI 1640 HEPES تم التعديل </td><td> سيغما الدريخ </td><td> R4130 </td><td> تستكمل مع مصل الإنسان 10٪ والجلوكوز 2٪، و 0.2٪ بيكربونات الصوديوم </td></tr><tr><td> MidiMACS فاصل </td><td> MACS Miltenyi بيوتيك </td><td> 130-042-302 </td><td></td></tr><tr><td> MACS MultiStand </td><td> MACS Miltenyi بيوتيك </td><td> 130-042-303 </td><td></td></tr><tr><td> LS أعمدة </td><td> MACS Miltenyi بيوتيك </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> عدادة الكريات </td><td> Grafco </td><td> Grafco نويباور غرفة </td><td> ويمكن الاطلاع من خلال العديد من الموردين الآخرين </td></tr></tbody></table>

separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means

على عكس الأنواع الأخرى المتصورة، P. يمكن زرعها في المختبر المنجلية، مما يسهل دراستها 1. في حين أن تحقيق تطفلن الدم يمكن أن تصل إلى حد 40٪ ≈، المحقق يحتفظ عادة نسبة حوالي 10٪. في كثير من الحالات يكون من الضروري عزل الطفيلي التي تحتوي على خلايا الدم الحمراء (كرات الدم الحمراء) عن تلك غير مصاب، لإثراء الثقافة والمضي قدما في تجربة معينة. عندما P. يصيب كرات الدم الحمراء المنجلية، ويحط الطفيلي يتغذى من الهيموغلوبين 2، 3. ومع ذلك، يجب أن الطفيلي التعامل مع شاردة الحديد سامة جدا هيم التي تحتوي على 4 و 5. الطفيلي يتملص سميته عن طريق تحويل هيم إلى البوليمر الكريستال خاملة دعا haemozoin 6 و 7. يتم تخزين هذا الجزيء التي تحتوي على الحديد في فجوة الغذائية والمعدنية في دولة لديها الأكسدة التي تختلف عن تلك الموجودة في هيم 8. الدولة الحديديك الحديد في هيمozoin يضفي عليه خاصية ممغطس غائبة في كرات الدم الحمراء غير المصابة. كما الطفيلي الغازية تصل إلى مرحلة النضج، ومضمون haemozoin يزيد أيضا 9، الذي يمنح المزيد من المغطسة على آخر مراحل P. داخل كرات الدم الحمراء المنجلية. استنادا إلى هذه الخاصية ممغطس، أحدث مراحل P. ويمكن فصل الخلايا المنجلية المصابة الدم الحمراء عن طريق تمرير الثقافة من خلال عمود تحتوي على الخرز المغناطيسي. هذه الخرز المغناطيسي تصبح عندما يتم وضع الأعمدة التي تحتوي عليها على حامل المغناطيس. وبعد ذلك كرات الدم الحمراء المصابة، وذلك بسبب المغطسة بهم، أن المحاصرين داخل العمود، في حين أن التدفق من خلال ستتضمن، بالنسبة للجزء الاكبر، وكرات الدم الحمراء غير مصاب تلك المراحل المبكرة من المحتوية على الطفيلي. هنا، نحن تصف منهجية لإثراء السكان من الطفيليات مرحلة متأخرة مع الأعمدة المغناطيسي، والذي يحافظ على بقاء الطفيليات جيدة 10.بعد تنفيذ هذا الإجراء، يمكن إرجاعها إلى ثقافة غير مرتبط حاضنة للسماح للطفيليات المتبقية لمواصلة النمو.

في الشكل 2، يظهر الثقافة التي تمر عبر العمود المغناطيسي، قبل (A) وبعد العملية. (B) وينظر عادة واحد إلى اثنين الكريات الحمراء المصابة في حقل التكبير 100X كما هو مبين في الشكل 2، ويتجهان إلى الكريات الحمراء المصابة في الشكل 2A. في ...

Watch this Scientific Journal Video about Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means at JoVE.com

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

وتستخدم خصائص ممغطس من هيموزوين لعزل المراحل المتأخرة من<em&gt; المتصورة المنجلية</em&gt; المصابة خلايا الدم الحمراء نموا في الثقافة. هذه الطريقة بسيطة وسريعة ولا يؤثر على قدرات اللاحقة الغازية من الطفيليات.

فصل<em&gt; المتصورة المنجلية</em&gt; في وقت متأخر مرحلة المصابين تبدي الكريات الحمر بوسائل المغناطيسي

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

توسيع فيفو السابقين الخلايا T ورم التفاعل من قبل وسائل 1/Ionomycin Bryostatin وصياغة سلسلة غاما المشتركة السيتوكينات

It was reported that breast cancer patients have pre-existing immune responses against their tumors1,2. However, such immune responses fail to provide ...

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

اختيار المتصورة المنجلية الطفيليات لCytoadhesion لخلايا المخ البشري غشائي

Most human malaria deaths are caused by blood-stage Plasmodium falciparum parasites. Cerebral malaria, the most life-threatening complication of the ...

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

و<em&gt; في المختبر</em&gt; المشارك عدوى نموذج لدراسة<em&gt; المتصورة المنجلية</em&gt; HIV-1-التفاعلات في الإنسان خلايا الوحيدات المشتقة الابتدائية المناعي

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

بروتوكول بسيط لتجمع الصفائح الدموية بوساطة<em&gt; المتصورة المنجلية</emتبدي الكريات الحمر&gt; بالفيروس في أجواء فقيرة الموارد

P. falciparum causes the majority of severe malarial infections. The pathophysiological mechanisms underlying cerebral malaria (CM) are not fully ...

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

العزلة وتحليل الدماغ المعزول من الكريات البيضاء<em&gt; المتصورة berghei</em&gt; ANKA الفئران المصابة

We describe a method for isolation and  characterization of adherent inflammatory cells from brain blood vessels of P. berghei ANKA-infected mice. ...

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

الفصل الآلي لل<em&gt; C. ايليجانس</em&gt; المستعمرة بنسب مختلفة من قبل الممرض الجرثومي

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression ...

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

ارتفاع العائد تنقية<em&gt; المتصورة المنجلية</em&gt; Merozoites للاستخدام في فحوصات ضد طهائي

Plasmodium falciparum merozoite antigens are under development as potential malaria vaccines. One aspect of immunity against malaria is the removal of ...

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

في تقييم فيفو من القوارض المتصورة الطفيل وأقسومة الغزو من قبل التدفق الخلوي

During blood stage infection, malaria parasites invade, mature, and replicate within red blood cells (RBCs). This results in a regular growth cycle and an ...

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

طرق بالتحقيق في الدور التنظيمي للالرنا الصغيرة وخاص بالريبوسوم إشغال<em&gt; المتصورة المنجلية</em

The genetic variation responsible for the sickle cell allele (HbS) enables erythrocytes to resist infection by the malaria parasite, P. falciparum. The ...

Bioluminescence Imaging to Detect Late Stage Infection of African Trypanosomiasis

تلألؤ بيولوجي التصوير لكشف العدوى المرحلة المتأخرة من داء المثقبيات الأفريقي

Human African trypanosomiasis (HAT) is a multi-stage disease that manifests in two stages; an early blood stage and a late stage when the parasite invades ...