Name: separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means
Uploaded: 2013-03-02T14:00:00
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Ce travail a été financé par des subventions PRB-009 à CS et une bourse de doctorat à LC, de la Secretaría Nacional de Ciencia y Tecnología (SENACYT), Panama.

Toutes les étapes du protocole, à l&#39;exception des centrifugations, doit être effectuée sous une hotte pour garder l&#39;échantillon stérile. 1. Isolation Late Stage de P. érythrocytes infectés par P. falciparum Tous les stades de Plasmodium érythrocytes infectés peuvent être séparés par cette méthode, car hémozoïne, qui confère paramagnétisme sur le parasite, est un métabolite commun au genre. Une parasitémie élevée (3-10...

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	<li>Jensen, J. B., Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+in+culture:+use+of+outdated+erythrocytes+and+description+of+the+candle+jar+method.">Plasmodium falciparum in culture: use of outdated erythrocytes and description of the candle jar method.</a> J. Parasitology. 63 (5), 883-886 (1977).</li><li>Guzman, I. Y., Francis, S. E., Oksman, A., Smith, C. E., Duffin, K. L., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+specificity+of+the+Plasmodium+falciparum+hemoglobin+degradation+pathway.">Order and specificity of the Plasmodium falciparum hemoglobin degradation pathway.</a> J. Clin. Invest. 93, 1602-1608 (1994).</li><li>Rosenthal, P. J., Meshnick, S. 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Des cultures in vitro de la malaria parasite P. falciparum présentent une parasitémie limitée, avec plus de la moitié des globules rouges non infectés au point le plus élevé de prolifération de la culture. Pour la plupart des expériences de recherche, il est souhaitable de travailler uniquement avec les érythrocytes infectés. À cette fin, une technique de séparation est nécessaire de diviser la culture en fonction de l&#39;infection. Méthodes utiles comprennent l&#39;utilisation...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> RPMI 1640 Hepes modification </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R4130 </td><td> Supplémenté avec du sérum humain à 10%, glucose 2%, du bicarbonate de sodium et 0,2% </td></tr><tr><td> Séparateur MidiMACS </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-302 </td><td></td></tr><tr><td> MACS Multistand </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-303 </td><td></td></tr><tr><td> Colonnes LS </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> Hémacytomètre </td><td> Grafco </td><td> Grafco Neubauer Chambre </td><td> On peut trouver par le biais de nombreux autres fournisseurs </td></tr></tbody></table>

separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means

Contrairement aux autres espèces de Plasmodium, P. falciparum peuvent être cultivées en laboratoire, ce qui facilite son étude 1. Alors que la parasitémie atteint peut atteindre la limite ≈ 40%, le chercheur conserve généralement le pourcentage d&#39;environ 10%. Dans de nombreux cas, il est nécessaire d&#39;isoler les cellules du parasite contenant globules rouges (hématies) de ceux non infectés, afin d&#39;enrichir la culture et de procéder à une expérience donnée. Lorsque P. falciparum infecte les érythrocytes, le parasite se dégrade et se nourrit de l&#39;hémoglobine 2, 3. Cependant, le parasite doit faire face à un groupement hème contenant du fer très toxique 4, 5. Le parasite échappe de sa toxicité en transformant l&#39;hème en un polymère à cristaux inertes appelé hémozoïne 6, 7. Cette molécule contenant du fer est stocké dans sa vacuole alimentaire et le métal en elle possède un état ​​d&#39;oxydation différent de l&#39;une à l&#39;hème 8. L&#39;état ferrique en fer de l&#39;hèmeozoin lui confère une propriété paramagnétique absente dans les érythrocytes non infectés. Comme le parasite envahit atteint sa maturité, le contenu de hémozoïne augmente également 9, qui confère paramagnétisme encore plus sur les derniers stades de P. falciparum à l&#39;intérieur du globule rouge. Sur la base de cette propriété paramagnétique, les dernières étapes de P. falciparum cellules sanguines infectée-rouge peuvent être séparées par le passage de la culture à travers une colonne contenant des billes magnétiques. Ces billes se magnétique lorsque les colonnes les contenant sont placés sur un support d&#39;aimant. Globules rouges infectés, en raison de leur paramagnétisme, sera alors coincé à l&#39;intérieur de la colonne, tandis que le flux continu contiendra, pour la plupart, les érythrocytes non infectés et les stades précoces contenant du parasite. Ici, nous décrivons la méthode d&#39;enrichir la population de parasites stade avancé avec des colonnes magnétiques, ce qui maintient la viabilité du parasite bon 10.Après avoir effectué cette procédure, la culture libre peut être renvoyé dans un incubateur pour permettre aux parasites restants de continuer à croître.

Dans la figure 2, la culture en passant par la colonne magnétique est montré, avant (A) et après la procédure (B). Une à deux érythrocytes infectés sont généralement vus sur un champ de grossissement 100X comme le montre la figure 2, les flèches pointant vers érythrocytes infectés dans la figure 2A. Dans une procédure typique, à commencer par une culture de la parasitémie 5% (figure 2A), la performance de...

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Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Les propriétés paramagnétiques de hémozoïne sont utilisés pour isoler les stades tardifs de la<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-Globules rouges infectés en culture. La méthode est simple et rapide et ne pas affecter les capacités suivantes invasives des parasites.

Séparation de<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Late Phase érythrocytes infectés par des moyens magnétiques

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Research

JoVE Journal

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