Name: separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means
Uploaded: 2013-03-02T14:00:00
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Diese Arbeit wurde gefördert durch Gewährung PRB-009 CS und ein Promotionsstipendium an LC, aus dem Secretaría Nacional de für Wissenschaft und Technologie (SENACYT), Panama.

Alle Schritte des Protokolls, mit Ausnahme Zentrifugationen, sollte innerhalb einer Haube zu halten die Probe steril erfolgen. Ein. Late Stage Isolierung von P. falciparum-infizierten Erythrozyten Alle späten Stadien von Plasmodium-infizierten Erythrozyten kann mit dieser Methode getrennt werden, da Hemozoin, die Paramagnetismus überträgt der Parasit, ist eine gemeinsame Metabolit zur Gattung. Eine hohe Parasitämie (3-10%) in der Kultur wird empfohlen,...

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	<li>Jensen, J. B., Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+in+culture:+use+of+outdated+erythrocytes+and+description+of+the+candle+jar+method.">Plasmodium falciparum in culture: use of outdated erythrocytes and description of the candle jar method.</a> J. Parasitology. 63 (5), 883-886 (1977).</li><li>Guzman, I. Y., Francis, S. E., Oksman, A., Smith, C. E., Duffin, K. L., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+specificity+of+the+Plasmodium+falciparum+hemoglobin+degradation+pathway.">Order and specificity of the Plasmodium falciparum hemoglobin degradation pathway.</a> J. Clin. Invest. 93, 1602-1608 (1994).</li><li>Rosenthal, P. J., Meshnick, S. 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E., Brown, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+viable+schizont-infected+red+cells+of+Plasmodium+falciparum+from+human+blood.">Separation of viable schizont-infected red cells of Plasmodium falciparum from human blood.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 72, 87-88 (1978).</li><li>Pertoft, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fractionation+of+cells+and+subcellular+particles+with+Percoll.">Fractionation of cells and subcellular particles with Percoll.</a> J. Biochem. Biophys. Methods. 44 (1-2), 1-30 (2000).</li><li>Paul, F., Roath, S., Melville, D., Warhurst, D. C., Osisanya, J. O. 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T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+separation+of+uninfected+erythrocytes+from+those+infected+with+Plasmodium+berghei+and+for+isolation+of+artificially+released+parasites.">A simple method for separation of uninfected erythrocytes from those infected with Plasmodium berghei and for isolation of artificially released parasites.</a> Z. Parasitenkd. 64, 279-284 (1981).</li></ol>

In-vitro-Kulturen des Malaria-Parasiten P. falciparum Parasitämie weisen eine begrenzte, mit mehr als der Hälfte der nicht infizierten Erythrozyten auf dem höchsten Punkt der Proliferation Kultur. Für die meisten Forschungs-Experimenten ist es wünschenswert, dass es nur mit den infizierten Erythrozyten. Zu diesem Zweck ist ein Trennverfahren notwendig, die Kultur nach der Infektion zu unterteilen. Nützliche Verfahren umfassen die Verwendung von Streptolysin O zu permeabilisieren und lysieren die ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> RPMI 1640 Hepes Geändert </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R4130 </td><td> Ergänzt mit 10% menschlichem Serum, 2% Glucose und 0,2% Natriumbicarbonat </td></tr><tr><td> MidiMACS Separator </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-302 </td><td></td></tr><tr><td> MACS MULTISTAND </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-303 </td><td></td></tr><tr><td> LS Columns </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> Hämazytometer </td><td> GRAFCO </td><td> GRAFCO Neubauer Kammer </td><td> Kann durch viele andere Lieferanten gefunden werden </td></tr></tbody></table>

separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means

Im Gegensatz zu anderen Plasmodium-Arten, P. falciparum kann im Labor, die ihre Studie 1 erleichtert kultiviert werden. Während die Parasitämie erreicht die ≈ 40%-Grenze erreichen kann, die Ermittler in der Regel hält der Anteil bei rund 10%. In vielen Fällen ist es notwendig, die Parasiten-haltigen roten Blutkörperchen (Erythrozyten) von den infizierten diejenigen, zu isolieren, um die Kultur zu bereichern und fahren Sie mit einem gegebenen Experiment. Wenn P. falciparum infiziert den Erythrozyten, verschlechtert sich die Parasiten und speist von Hämoglobin 2, 3. Allerdings muss der Parasit mit einem sehr giftig eisenhaltigen Häm-Einheit 4, 5 umzugehen. Der Parasit entzieht seiner Toxizität durch die Umwandlung der Häm in einem inerten Kristall Polymer namens haemozoin 6, 7. Diese eisenhaltigen Molekül in seiner Nahrungsvakuole gespeichert und das Metall in sich hat einen oxidativen Zustand, der sich von dem in Häm 8 unterscheidet. Die Eisen-III von Eisen in der Häm-ozoin verleiht es eine paramagnetische Eigenschaft fehlt in infizierten Erythrozyten. Da die eindringenden Parasiten Reife erreicht, der Inhalt haemozoin erhöht auch 9, die noch Paramagnetismus schenkt den letzten Stadien von P. falciparum Inneren der Erythrozyten. Basierend auf dieser paramagnetische Eigenschaft, die neuesten Stadien von P. falciparum infizierten Erythrozyten-Zellen können durch Passieren der Kultur über eine Säule mit magnetischen Kügelchen abgetrennt werden. Diese Perlen werden magnetisch, wenn die Spalten enthält sie auf einem Magnethalter gestellt werden. Infizierten Erythrozyten, die aufgrund ihrer Paramagnetismus, werden dann im Inneren der Säule eingefangen werden, während die Flow-Through enthält, zum größten Teil nicht infizierten Erythrozyten und solchen mit frühen Stadien des Parasiten. Hier beschreiben wir die Methodik, um die Bevölkerung der späten Phase Parasiten mit magnetischen Säulen, die gute Parasiten Lebensfähigkeit 10 hält bereichern.Nach Durchführung dieses Verfahrens kann das ungebundene Kultur in einen Inkubator zurückgegeben werden, damit die verbleibenden Parasiten weiter wachsen.

In Abbildung 2 wird das Kulturmedium durch den magnetischen Spalte gezeigt, vor (A) und nach dem Verfahren (B). Ein bis zwei infizierten Erythrozyten werden in der Regel auf einem 100-facher Vergrößerung Feld gesehen, wie in 2 gezeigt, wobei die Pfeile zeigen auf infizierten Erythrozyten in 2A. In einem typischen Verfahren, beginnend mit einem Kulturmedium mit 5% Parasitämie (2A), die Leistung dieses Verfahrens erzeu...

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Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Die paramagnetischen Eigenschaften des Hämozoins werden verwendet, um späten Stadien der Isolierung<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Infiziert rote Blutkörperchen wachsen in der Kultur. Die Methode ist einfach und schnell und hat keinen Einfluss auf die nachfolgenden invasiven Fähigkeiten der Parasiten.

Trennung<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Late Stage-infizierten Erythrozyten durch magnetische Mittel

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

Ex vivo Expansion von Tumor-reaktiven T-Zellen mittels Bryostatin 1/Ionomycin und der Gemeinsamen gamma-Kette Zytokine Formulation

It was reported that breast cancer patients have pre-existing immune responses against their tumors1,2. However, such immune responses fail to provide ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

Auswahl der Plasmodium falciparum Parasiten für Cytoadhesion zu Human Brain Endothelial Cells

Most human malaria deaths are caused by blood-stage Plasmodium falciparum parasites. Cerebral malaria, the most life-threatening complication of the ...

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

Ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Co-Infektion Modell zum Studium<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; HIV-1-Wechselwirkungen in primären menschlichen Monozyten abgeleitete Immunzellen

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

Ein einfaches Protokoll für Thrombozyten-vermittelte Verklumpung<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-Infizierten Erythrozyten in einer Ressource Schlechte Einstellung

P. falciparum causes the majority of severe malarial infections. The pathophysiological mechanisms underlying cerebral malaria (CM) are not fully ...

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

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Isolierung und Analyse von Brain-sequestered Leukozyten aus<em&gt; Plasmodium berghei</em&gt; ANKA-infizierte Mäuse

We describe a method for isolation and  characterization of adherent inflammatory cells from brain blood vessels of P. berghei ANKA-infected mice. ...

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

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Automatische Trennung von<em&gt; C. elegans</em&gt; Variabel durch einen bakteriellen Erreger kolonisiert

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression ...

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

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Plasmodium falciparum merozoite antigens are under development as potential malaria vaccines. One aspect of immunity against malaria is the removal of ...

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

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During blood stage infection, malaria parasites invade, mature, and replicate within red blood cells (RBCs). This results in a regular growth cycle and an ...

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

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Methoden, um die regulatorische Rolle kleiner RNAs und Ribosomal Belegung von Untersuchen<em&gt; Plasmodium falciparum</em

The genetic variation responsible for the sickle cell allele (HbS) enables erythrocytes to resist infection by the malaria parasite, P. falciparum. The ...

Bioluminescence Imaging to Detect Late Stage Infection of African Trypanosomiasis

Biolumineszenz-Bildgebung zur Erkennung von Late Stage-Infektion der afrikanischen Trypanosomiasis

Human African trypanosomiasis (HAT) is a multi-stage disease that manifests in two stages; an early blood stage and a late stage when the parasite invades ...