Name: separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means
Uploaded: 2013-03-02T14:00:00
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이 작품은이 자금을 지원 한 보조금 PRB-009 CS와 Secretaría Nacional 드 Ciencia Y Tecnología (SENACYT), 파나마에서 LC에 박사 장학금합니다.

프로토콜의 모든 단계는 centrifugations을 제외하고, 샘플 무균 유지하는 후드 안에 수행해야합니다. 1. P.의 하순 무대 절연 falciparum에 감염된 적혈구 기생충에 paramagnetism을 수여 hemozoin는, 속으로 일반적인 신진 대사이기 때문에 Plasmodium에 감염된 적혈구의 모든 후반 단계는이 방법으로 분리 할 수​​ 있습니다. 전형적인 문화 2 ~ 4 %의 혈소판 (...

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	<li>Jensen, J. B., Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+in+culture:+use+of+outdated+erythrocytes+and+description+of+the+candle+jar+method.">Plasmodium falciparum in culture: use of outdated erythrocytes and description of the candle jar method.</a> J. Parasitology. 63 (5), 883-886 (1977).</li><li>Guzman, I. Y., Francis, S. E., Oksman, A., Smith, C. E., Duffin, K. L., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+specificity+of+the+Plasmodium+falciparum+hemoglobin+degradation+pathway.">Order and specificity of the Plasmodium falciparum hemoglobin degradation pathway.</a> J. Clin. Invest. 93, 1602-1608 (1994).</li><li>Rosenthal, P. J., Meshnick, S. 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L., Gilberger, T., Tilley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+permeabilization+of+the+host+cell+membrane+of+Plasmodium+falciparum-infected+red+blood+cells+with+streptolysin+O+and+equinatoxin+II.">Selective permeabilization of the host cell membrane of Plasmodium falciparum-infected red blood cells with streptolysin O and equinatoxin II.</a> Biochem. J. 403, 167-175 (2007).</li><li>Goodyer, I. D., Johnson, J., Eisenthal, R., Hayes, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+mature-stage+Plasmodium+falciparum+by+gelatine+flotation.">Purification of mature-stage Plasmodium falciparum by gelatine flotation.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 88 (2), 209-211 (1994).</li><li>Pasvol, G., Wilson, R. J., Smalley, M. E., Brown, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+viable+schizont-infected+red+cells+of+Plasmodium+falciparum+from+human+blood.">Separation of viable schizont-infected red cells of Plasmodium falciparum from human blood.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 72, 87-88 (1978).</li><li>Pertoft, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fractionation+of+cells+and+subcellular+particles+with+Percoll.">Fractionation of cells and subcellular particles with Percoll.</a> J. Biochem. Biophys. Methods. 44 (1-2), 1-30 (2000).</li><li>Paul, F., Roath, S., Melville, D., Warhurst, D. C., Osisanya, J. O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+malaria-infected+erythrocytes+from+whole+blood:+use+of+a+selective+high-gradient+magnetic+separation+technique.">Separation of malaria-infected erythrocytes from whole blood: use of a selective high-gradient magnetic separation technique.</a> The Lancet. 318, 70-71 (1981).</li><li>Trang, D. T., Huy, N. T., Kariu, T., Tajima, K., Kamei, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-step+concentration+of+malarial+parasite-infected+red+blood+cells+and+removal+of+contaminating+white+blood+cells.">One-step concentration of malarial parasite-infected red blood cells and removal of contaminating white blood cells.</a> Malar. J. 3, 7 (2004).</li><li>Nillni, E. A., Londner, M. V., Spira, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+separation+of+uninfected+erythrocytes+from+those+infected+with+Plasmodium+berghei+and+for+isolation+of+artificially+released+parasites.">A simple method for separation of uninfected erythrocytes from those infected with Plasmodium berghei and for isolation of artificially released parasites.</a> Z. Parasitenkd. 64, 279-284 (1981).</li></ol>

말라리아 기생충 P.의 체외 문화에 falciparum 더 문화의 높은 확산 지점에 감염되지 않은 적혈구의 절반 이상으로 제한된 parasitemia을 나타냅니다. 대부분의 연구 실험을 위해, 감염된 적혈구으로 만 작동하는 것이 바람직하다. 이를 위해 분리 기술은 감염에 따라 문화를 분할 할 필요가 있습니다. 유용한 방법은 감염되지 않은 적혈구 11 두 그룹의 서로 다른 밀도를 이용 차동 centrifugati...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 코멘트 (선택 사항) </td></tr><tr><td> RPMI 1640 Hepes은 수정 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> R4130 </td><td> 10% 인간의 혈청, 2 %의 포도당과 0.2 % 나트륨 중탄산염을 보충 </td></tr><tr><td> MidiMACS 구분 </td><td> 맥 Miltenyi BioTec </td><td> 130-042-302 </td><td></td></tr><tr><td> 맥 MultiStand </td><td> 맥 Miltenyi BioTec </td><td> 130-042-303 </td><td></td></tr><tr><td> LS 열 </td><td> 맥 Miltenyi BioTec </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> Hemacytometer </td><td> Grafco </td><td> Grafco Neubauer 상공 회의소 </td><td> 많은 다른 공급 업체를 통해 찾을 수 있습니다 </td></tr></tbody></table>

separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means

다른 Plasmodium 종과는 달리, P. falciparum은 그 연구 1 용이 실험실에서 배양 할 수 있습니다. 달성 parasitemia는 ≈ 40 % 한도에 도달 할 수 있지만, 탐정은 일반적으로 약 10 %로 비율을 유지합니다. 대부분의 경우 그것은 문화를 풍부하게하고 주어진 실험을 진행하기 위해 감염되지 않은 사람에서 기생충 함유 적혈구를 (적혈구), 분리 할 필요가 있습니다. 때 P. falciparum은 적혈구를 감염 기생충이 저하과 헤모글로빈 2, 3의 피드. 그러나 기생충은 매우 독성 철 함유 haem 잔기 4, 5를 처리해야합니다. 기생충은 haemozoin 6, 7이라는 불활성 크리스탈 폴리머에 haem를 변화함으로써 독성을 도망 간다. 이 철 함유 분자은 ​​그 식품 액포에 저장하고 그 안에 금속이 haem 8 하나에서 다른 산화 상태를 가지고있다. haem의 철의 철 상태ozoin는 감염되지 않은 적혈구의 부재 상자성체의 속성에 수여. 침략 기생충이 성숙에 도달로서, haemozoin의 내용은 P.의 최신 단계에서 더욱 paramagnetism을 준다고하는 9 증가 적혈구 내부 falciparum. 이 상자성체의 속성, P.의 최신 단계에 따라 falciparum 감염 - 적혈구는 자기 구슬이 포함 된 열을 통해 문화를 전달하여 분리 할 수 있습니다. 을 포함하는 열 자석 홀더에 배치 할 때이 구슬은 자석이된다. 흐름을 통해이 포함하면서 paramagnetism로 인해 감염된 적혈구는 다음 대부분의, 감염되지 않은 적혈구 및 기생충들을 포함하는 초기 단계를 들어, 열 안에 갇혀 될 것입니다. 여기, 우리는 좋은 기생충의 생존 능력 (10) 유지 자성 열과 후반 단계 기생충의 인구를 풍부하게 할 수있는 방법에 대해 설명합니다.이 절차를 수행 한 후 무소속의 문화가 남아있는 기생충은 성장을 계속 할 수 있도록 보육에 반환 할 수 있습니다.

그림 2에서, 자기 열을 통과 문화는 전에 표시됩니다 (A)와 절차 후 (B). 화살표가 그림 2A에 감염된 적혈구를 가리키는과 그림 2에 도시 된 바와 같이 하나 두 감염된 적혈구는 보통 100X 배율 필드를 볼 수 있습니다. 전형적인 프로 시저에서 5 % parasitemia (그림 2A)에서 문화로 시작,이 절차의 성능은 일반적으로 97% -100 % ...

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Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

hemozoin의 상자성의 특성은 월말 단계를 분리하는 데 사용됩니다<em&gt; Plasmodium falciparum</em문화에 성장&gt; - 감염된 적혈구. 방법은 간단하고 빠르고 기생충의 후속 침습적 기능에는 영향을 미치지 않습니다.

의 분리<em&gt; Plasmodium falciparum</em자기 수단으로&gt; 늦은 단계에 감염된 적혈구

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

Bryostatin의 1/Ionomycin에 의해 종양 반응 T 세포의 생체내 전 확장 및 일반 감마 체인 크린 시토킨 제제

It was reported that breast cancer patients have pre-existing immune responses against their tumors1,2. However, such immune responses fail to provide ...

연구

면역학 및 감염병학

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

선정 Plasmodium falciparum</em인간 두뇌 내피 세포 Cytoadhesion위한> 기생충

Most human malaria deaths are caused by blood-stage Plasmodium falciparum parasites. Cerebral malaria, the most life-threatening complication of the ...

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

<em&gt; 체외에서</em공부하기&gt; 공동 감염 모델<em&gt; Plasmodium falciparum</em인간의 기본 단핵구 파생 면역 세포에서&gt; - HIV-1 상호 작용

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

의 혈소판 응집 중재를위한 간단한 프로토콜<em&gt; 변형체 falciparum의</em자원별로 설정에서&gt; - 감염된 적혈구

P. falciparum causes the majority of severe malarial infections. The pathophysiological mechanisms underlying cerebral malaria (CM) are not fully ...

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

에서 뇌 - 분리 된 백혈구의 분리 및 분석<em&gt; Plasmodium berghei</em&gt; ANKA에 감염된 마우스

We describe a method for isolation and  characterization of adherent inflammatory cells from brain blood vessels of P. berghei ANKA-infected mice. ...

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

의 자동 분리<em&gt; C. 엘레</em&gt; 가변 세균성 병원체에 의해 식민지

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression ...

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

높은 수익률 정화<em&gt; 변형체 falciparum의</emOpsonizing 항체 분석 실험에 사용하기 위해&gt; Merozoites

Plasmodium falciparum merozoite antigens are under development as potential malaria vaccines. One aspect of immunity against malaria is the removal of ...

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

유동 세포 계측법에 의해 쥐 말라리아 기생충의 생체 내 평가와 Merozoite 침공

During blood stage infection, malaria parasites invade, mature, and replicate within red blood cells (RBCs). This results in a regular growth cycle and an ...

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

방법은 작은 RNA를과의 리보솜 점유 규제 역할을 조사하기 위해<em&gt; 말라리아 원충</em

The genetic variation responsible for the sickle cell allele (HbS) enables erythrocytes to resist infection by the malaria parasite, P. falciparum. The ...

Bioluminescence Imaging to Detect Late Stage Infection of African Trypanosomiasis

생물 발광 영상은 아프리카 트리파노소마 증의 늦은 단계의 감염을 감지하는

Human African trypanosomiasis (HAT) is a multi-stage disease that manifests in two stages; an early blood stage and a late stage when the parasite invades ...