Name: separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means
Uploaded: 2013-03-02T14:00:00
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Este trabalho foi financiado por subvenções PRB-009 para o CS e uma bolsa de doutorado à LC, do Nacional Secretaría de Ciencia y Tecnología (SENACYT), Panamá.

Todos os passos do protocolo, excepto para centrifugações, deve ser realizada dentro de uma capa para manter a amostra estéril. 1. Isolamento fase tardia de P. falciparum eritrócitos infectados Todos os estágios de Plasmodium eritrócitos infectados podem ser separados com esta metodologia, uma vez que hemozoin, que confere o paramagnetismo em que o parasita é um metabolito comum para o género. A parasitemia elevada (3-10%) em cultura é recomendado...

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	<li>Jensen, J. B., Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+in+culture:+use+of+outdated+erythrocytes+and+description+of+the+candle+jar+method.">Plasmodium falciparum in culture: use of outdated erythrocytes and description of the candle jar method.</a> J. Parasitology. 63 (5), 883-886 (1977).</li><li>Guzman, I. Y., Francis, S. E., Oksman, A., Smith, C. E., Duffin, K. L., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+specificity+of+the+Plasmodium+falciparum+hemoglobin+degradation+pathway.">Order and specificity of the Plasmodium falciparum hemoglobin degradation pathway.</a> J. Clin. Invest. 93, 1602-1608 (1994).</li><li>Rosenthal, P. J., Meshnick, S. 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As culturas in vitro de parasita da malária P. falciparum exibem uma parasitemia limitada, com mais de metade das células vermelhas do sangue não infectados, no ponto mais elevado de proliferação de cultura. Para a maioria das experiências de investigação, é desejável para funcionar apenas com os eritrócitos infectados. Para este fim, uma técnica de separação é necessário dividir a cultura de acordo com a infecção. Métodos úteis incluem a utilização de estreptolisina para...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários (opcional) </td></tr><tr><td> RPMI 1640 Modificado Hepes </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R4130 </td><td> Suplementado com 10% de soro humano, 2% de glucose, bicarbonato de sódio e 0,2% </td></tr><tr><td> Separador MidiMACS </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-302 </td><td></td></tr><tr><td> MACS MultiStand </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-303 </td><td></td></tr><tr><td> Colunas LS </td><td> MACS Miltenyi Biotec </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> Hemocitômetro </td><td> Grafco </td><td> Grafco Neubauer Câmara </td><td> Pode ser encontrado através de muitos outros fornecedores </td></tr></tbody></table>

separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means

Ao contrário de outras espécies de Plasmodium, P. falciparum pode ser cultivado no laboratório, o que facilita o seu estudo 1. Enquanto a parasitemia obtida pode atingir o limite ≈ 40%, o investigador geralmente mantém a percentagem de cerca de 10%. Em muitos casos, é necessário isolar o parasita contendo glóbulos vermelhos (RBC) de os não infectados, para enriquecer a cultura e proceder com uma dada experiência. Quando P. falciparum infecta o eritrócito, o parasita se degrada e se alimenta de hemoglobina 2, 3. No entanto, o parasita tem de lidar com uma porção heme muito tóxico contendo ferro 4, 5. O parasita escapa a sua toxicidade mediante a transformação do heme em um polímero de cristal inerte chamado haemozoin 6, 7. Esta molécula contendo ferro é armazenado no seu vacúolo alimentar e o metal em que tem um estado de oxidação diferente daquele do heme 8. O estado férrico em ferro no hemeozoin confere-lhe uma propriedade paramagnética ausente em eritrócitos não infectados. À medida que o parasita invasor atinge a maturidade, o conteúdo de haemozoin também aumenta 9, que confere paramagnetismo ainda mais sobre as últimas fases de P. falciparum no interior de eritrócitos. Com base nesta propriedade paramagnético, os últimos estágios de P. As células infectadas falciparum-vermelhos do sangue podem ser separados pela passagem da cultura através de uma coluna contendo as esferas magnéticas. Estes grânulos tornar magnético quando as colunas que contêm eles são colocados sobre um suporte de íman. RBC infectados, devido à sua paramagnetismo, será então aprisionado no interior da coluna, enquanto que o fluxo através conterá, na sua maior parte, os eritrócitos não infectados e os estágios iniciais da contendo o parasita. Aqui, descrevemos a metodologia para enriquecer a população de parasitas estágio final com colunas magnéticas, que mantém a viabilidade do parasita bom 10.Depois de executar este processo, a cultura não acoplada pode ser retornado para uma incubadora para permitir que as restantes parasitas que continue a crescer.

Na Figura 2, a cultura que passa através da coluna magnético é mostrado, antes (A) e após (B). Uma a duas eritrócitos infectados são geralmente vistos em um campo de ampliação de 100X, como mostrado na Figura 2, com as setas que apontam para eritrócitos infectados na Figura 2A. Num procedimento típico, a partir de uma cultura em 5% de parasitemia (Figura 2A), o desempenho deste procedimento normalmente produz ...

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Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

As propriedades paramagnéticas de hemozoin são utilizados para isolar as fases tardias da<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-Infectadas células vermelhas do sangue que crescem em cultura. O método é simples e rápido e não afeta as capacidades subseqüentes invasoras dos parasitas.

Separação de<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Fase Tardia eritrócitos infectados por meio magnético

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

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Expansão ex vivo de células tumorais T-reativa por Meios de 1/Ionomycin Bryostatin eo Common Gamma Cadeia Formulação Citocinas

It was reported that breast cancer patients have pre-existing immune responses against their tumors1,2. However, such immune responses fail to provide ...

Imunologia e Infecção

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

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An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

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Um<em&gt; In vitro</em&gt; Modelo de Co-infecção para Estudar<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt;-HIV-1 Interacções em monócitos humanos primários derivados de células imunes

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

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Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

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Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

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High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

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High Yield purificação<em&gt; Plasmodium falciparum</em&gt; Merozoítos Para uso em opsonizantes Anticorpo Ensaios

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Métodos para investigar o papel de Regulamentação dos Pequenos RNAs e Ribosomal Ocupação de<em&gt; Plasmodium falciparum</em

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Bioluminescence Imaging to Detect Late Stage Infection of African Trypanosomiasis

Bioluminescência de imagem para detectar a infecção fase tardia Africano Tripanossomíase

Human African trypanosomiasis (HAT) is a multi-stage disease that manifests in two stages; an early blood stage and a late stage when the parasite invades ...