Name: separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means
Uploaded: 2013-03-02T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means at JoVE.com

Bu çalışma tarafından finanse edildi hibe SORUN-009 CS ve Secretaria Nacional de Ciencia y Tecnología (SENACYT), Panama LC doktora bursu için.

Protokolünün tüm adımları, centrifugations hariç, örnek steril tutmak için bir başlık içinde yapılmalıdır. 1. P. Geç Evre İzolasyonu falciparum-enfekte Eritrositler Parazit paramanyetizma bahşeder hemozoin, cins için ortak bir metabolit olduğundan Plasmodium enfekte eritrositlerin tüm evrelerinde, bu metodoloji ile ayrılabilir. Tipik bir kültür% 2-4 hematokrit (kırmızı kan hücrelerinin hacminin yüzdesi) ve% 1-8 parazite...

<ol>
	<li>Jensen, J. B., Trager, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+falciparum+in+culture:+use+of+outdated+erythrocytes+and+description+of+the+candle+jar+method.">Plasmodium falciparum in culture: use of outdated erythrocytes and description of the candle jar method.</a> J. Parasitology. 63 (5), 883-886 (1977).</li><li>Guzman, I. Y., Francis, S. E., Oksman, A., Smith, C. E., Duffin, K. L., Goldberg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Order+and+specificity+of+the+Plasmodium+falciparum+hemoglobin+degradation+pathway.">Order and specificity of the Plasmodium falciparum hemoglobin degradation pathway.</a> J. Clin. Invest. 93, 1602-1608 (1994).</li><li>Rosenthal, P. J., Meshnick, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin+catabolism+and+iron+utilization+by+malaria+parasites.">Hemoglobin catabolism and iron utilization by malaria parasites.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 83 (2), 131-139 (1996).</li><li>Fitch, C. D., Chevli, R., Kanjananggulpan, P., Dutta, P., Chevli, K., Chou, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+ferriprotoporphyrin+IX+is+a+lytic+agent.">Intracellular ferriprotoporphyrin IX is a lytic agent.</a> Blood. 62 (6), 1165-1168 (1983).</li><li>Hebbel, R. P., Eaton, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathobiology+of+heme+interaction+with+the+erythrocyte+membrane.">Pathobiology of heme interaction with the erythrocyte membrane.</a> Semin. Hematol. 26 (2), 136-149 (1989).</li><li>Egan, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haemozoin+formation.">Haemozoin formation.</a> Mol. Biochem. Parasitol. 157 (2), 127-136 (2008).</li><li>Hempelmann, E., Marques, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+malaria+pigment+from+Plasmodium+falciparum.">Analysis of malaria pigment from Plasmodium falciparum.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 32 (1), 25-30 (1994).</li><li>Fitch, C. D., Kanjananggulpan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+state+of+ferriprotoporphyrin+IX+in+malaria+pigment.">The state of ferriprotoporphyrin IX in malaria pigment.</a> J. Biol. Chem. 262 (32), 15552-15555 (1987).</li><li>Moore, L. R., Fujioka, H., Williams, P. S., Chalmers, J. J., Grimberg, B., Zimmerman, P. A., Zborowski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemoglobin+degradation+in+malaria-infected+erythrocytes+determined+from+live+cell+magnetophoresis.">Hemoglobin degradation in malaria-infected erythrocytes determined from live cell magnetophoresis.</a> FASEB J. 20 (6), 747-749 (2006).</li><li>Spadafora, C., Gerena, L., Kopydlowski, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+the+in+vitro+invasive+capabilities+of+Plasmodium+falciparum+schizonts+isolated+by+Percoll+gradient+or+using+magnetic+based+separation.">Comparison of the in vitro invasive capabilities of Plasmodium falciparum schizonts isolated by Percoll gradient or using magnetic based separation.</a> Malaria J. 10, 96 (2011).</li><li>Jackson, K. E., Spielmann, T., Hanssen, E., Adisa, A., Separovic, F., Dixon, M. W., Trenholme, K. R., Hawthorne, P. L., Gardiner, D. L., Gilberger, T., Tilley, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+permeabilization+of+the+host+cell+membrane+of+Plasmodium+falciparum-infected+red+blood+cells+with+streptolysin+O+and+equinatoxin+II.">Selective permeabilization of the host cell membrane of Plasmodium falciparum-infected red blood cells with streptolysin O and equinatoxin II.</a> Biochem. J. 403, 167-175 (2007).</li><li>Goodyer, I. D., Johnson, J., Eisenthal, R., Hayes, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+mature-stage+Plasmodium+falciparum+by+gelatine+flotation.">Purification of mature-stage Plasmodium falciparum by gelatine flotation.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 88 (2), 209-211 (1994).</li><li>Pasvol, G., Wilson, R. J., Smalley, M. E., Brown, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+viable+schizont-infected+red+cells+of+Plasmodium+falciparum+from+human+blood.">Separation of viable schizont-infected red cells of Plasmodium falciparum from human blood.</a> Ann. Trop. Med. Parasitol. 72, 87-88 (1978).</li><li>Pertoft, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fractionation+of+cells+and+subcellular+particles+with+Percoll.">Fractionation of cells and subcellular particles with Percoll.</a> J. Biochem. Biophys. Methods. 44 (1-2), 1-30 (2000).</li><li>Paul, F., Roath, S., Melville, D., Warhurst, D. C., Osisanya, J. O. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separation+of+malaria-infected+erythrocytes+from+whole+blood:+use+of+a+selective+high-gradient+magnetic+separation+technique.">Separation of malaria-infected erythrocytes from whole blood: use of a selective high-gradient magnetic separation technique.</a> The Lancet. 318, 70-71 (1981).</li><li>Trang, D. T., Huy, N. T., Kariu, T., Tajima, K., Kamei, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-step+concentration+of+malarial+parasite-infected+red+blood+cells+and+removal+of+contaminating+white+blood+cells.">One-step concentration of malarial parasite-infected red blood cells and removal of contaminating white blood cells.</a> Malar. J. 3, 7 (2004).</li><li>Nillni, E. A., Londner, M. V., Spira, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+separation+of+uninfected+erythrocytes+from+those+infected+with+Plasmodium+berghei+and+for+isolation+of+artificially+released+parasites.">A simple method for separation of uninfected erythrocytes from those infected with Plasmodium berghei and for isolation of artificially released parasites.</a> Z. Parasitenkd. 64, 279-284 (1981).</li></ol>

Sıtma paraziti P. in vitro kültürlerde falciparum kültürü daha fazla olan en yüksek çoğalma noktada enfekte olmamış kırmızı kan hücrelerinin yarısından, sınırlı parazitemi sergiler. En çok araştırma deneyleri için, enfekte olmuş eritrositler ile birlikte çalışmak için sadece arzu edilir. Bu amaçla, bir ayırma tekniği, enfeksiyon göre kültür bölmek için gereklidir. Yararlı yöntemler enfekte olmamış eritrositler 11 ve iki grupların farklı yoğunluk ya...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> RPMI 1640 Hepes Modifiye </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R4130 </td><td> % 10 insan serumu,% 2 glükoz, ve% 0.2 sodyum bikarbonat ile desteklenmiş </td></tr><tr><td> MidiMACS Ayırıcı </td><td> MACS Miltenyi BioTec </td><td> 130-042-302 </td><td></td></tr><tr><td> MACS MultiStand </td><td> MACS Miltenyi BioTec </td><td> 130-042-303 </td><td></td></tr><tr><td> LS Sütunlar </td><td> MACS Miltenyi BioTec </td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> Hemasitometre </td><td> Grafco </td><td> Grafco Neubauer Odası </td><td> Diğer birçok tedarikçileri yoluyla bulunabilir </td></tr></tbody></table>

separation of plasmodium falciparum late stage-infected erythrocytes by magnetic means

Diğer Plasmodium türlerin aksine, P. falciparum onun çalışma 1 kolaylaştırır laboratuar, kültüre edilebilir. Elde parazitemi ≈% 40 sınırına ulaşabilir olsa da, araştırmacı genellikle yaklaşık% 10 oranda tutar. Pek çok durumda, kültür zenginleştirmek ve belirli bir deney ile devam etmek için enfekte olmamış olanlardan parazit içeren kırmızı kan hücrelerinin (eritrositler), izole etmek için gereklidir. Zaman P. falciparum eritrosit bozar, parazit düşürür ve hemoglobin 2, 3 beslenir. Ancak, parazitin bir çok toksik demir içeren haem parçası 4, 5 ile ilgilenmek zorundadır. Parazit haemozoin 6, 7 olarak adlandırılan bir inert kristal polimer içine haem dönüştürerek kendi toksisite eludes. Bu demir içeren moleküller, gıda vakuol içinde depolanır ve bir metal haem 8 biri farklı bir oksidasyon durumuna sahiptir. Haem demir ferrik durumuozoin bu bulaşmamış eritrosit eksik olan paramanyetik özellikte bahşeder. Işgalci parazit olgunluğa ulaşır gibi haemozoin içeriği de P. son aşamalarında daha paramanyetizma ihsan, 9 da artar eritrosit içindeki falciparum. Bu paramanyetik özelliği, P. son aşamalarında dayanarak falciparum enfekte-kırmızı kan hücreleri manyetik boncuklar ihtiva eden bir sütun içinden geçen kültür tarafından ayrılabilir. Bunları içeren sütunlar bir mıknatıs tutucu üzerine konulduğunda Bu boncuklar manyetik hale gelir. Flow-through içerecektir iken onların paramanyetizma nedeniyle Enfekte RBCs, sonra çoğunlukla, enfekte olmamış eritrosit ve parazit içerenler erken aşamalarında için, sütun içine hapsolmuş edilecektir. Burada, biz iyi parazit canlılığı 10 korur manyetik sütunlar ile geç evre parazitlerin nüfusu zenginleştirmek için metodoloji açıklanmaktadır.Bu yordamı gerçekleştirdikten sonra, bekâr kültürü kalan parazitler büyümeye devam sağlamak için bir inkübatör iade edilebilir.

Şekil 2&#39;de, manyetik sütun içinden geçen kültür önce gösterilmiştir (A) ve işlemden sonra (B). Şekil 2A oklar ile enfekte eritrositleri işaret ile, Şekil 2 &#39;de gösterildiği gibi bir veya iki enfekte eritrositler genellikle bir 100X büyütme alan üzerinde görülür. Tipik bir prosedürde asitleştirme,% 5 parazitemi (Şekil 2A) bir kültür ile başlayarak, bu işlemin performansı genellikle% 97 ile% 100 <stron...

Watch this Scientific Journal Video about Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means at JoVE.com

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Hemozoin bir paramanyetik özelliklerinin geç aşamalarında izole etmek için kullanılırlar<em&gt; Plasmodium falciparum</emKültüründe büyüyen&gt;-enfekte kırmızı kan hücreleri. Bu yöntem çok kolay ve hızlı ve parazitlerin sonraki invazif yetenekleri etkilemez.

Ayrılması<em&gt; Plasmodium falciparum</emManyetik Yoluyla&gt; Geç Evre-enfekte Eritrositler

Unlike other Plasmodium species, P. falciparum can be cultured in the lab, which facilitates its study 1. While the parasitemia achieved can reach the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Separation of Plasmodium falciparum Late Stage-infected Erythrocytes by Magnetic Means

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

Ex vivo Expansion of Tumor-reactive T Cells by Means of Bryostatin 1/Ionomycin and the Common Gamma Chain Cytokines Formulation

Bryostatin 1/Ionomycin Yoluyla Tümör-reaktif T hücrelerinin ex vivo Genişleme ve Ortak Gama Zinciri Sitokinler Formülasyon

It was reported that breast cancer patients have pre-existing immune responses against their tumors1,2. However, such immune responses fail to provide ...

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

Selection of Plasmodium falciparum Parasites for Cytoadhesion to Human Brain Endothelial Cells

Seçimi Plasmodium falciparum İnsan Beyninin endotel hücreleri Cytoadhesion için Parazitler

Most human malaria deaths are caused by blood-stage Plasmodium falciparum parasites. Cerebral malaria, the most life-threatening complication of the ...

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

An In vitro Co-infection Model to Study Plasmodium falciparum-HIV-1 Interactions in Human Primary Monocyte-derived Immune Cells

Bir<em&gt; In vitro</emOkumak&gt; Co-enfeksiyon Modeli<em&gt; Plasmodium falciparum</emİnsan İlköğretim Monosit kökenli Bağışıklık Hücrelerde&gt;-HIV-1 Etkileşimleri

Plasmodium falciparum, the causative agent  of the deadliest form of malaria, and human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) are among the most important ...

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

Trombosit-aracılı kesekleşme için Basit Protokolü<em&gt; Plasmodium falciparum</emBir kaynak Poor Setting&gt; ile enfekte Eritrosit

P. falciparum causes the majority of severe malarial infections. The pathophysiological mechanisms underlying cerebral malaria (CM) are not fully ...

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

Isolation and Analysis of Brain-sequestered Leukocytes from Plasmodium berghei ANKA-infected Mice

Den Beyin sekestre Lökositler İzolasyonu ve Analizi<em&gt; Plasmodium berghei</em&gt; ANKA-enfekte Fare

We describe a method for isolation and  characterization of adherent inflammatory cells from brain blood vessels of P. berghei ANKA-infected mice. ...

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Automated Separation of C. elegans Variably Colonized by a Bacterial Pathogen

Otomatik Ayırma<em&gt; C. elegans</em&gt; Değişken derecelerde Bakteriyel Patojen tarafından kolonileştirildiğini

The wormsorter is an instrument analogous to a FACS machine that is used in studies of Caenorhabditis elegans, typically to sort worms based on expression ...

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

High Yield Purification of Plasmodium falciparum Merozoites For Use in Opsonizing Antibody Assays

Yüksek Kapasiteli saflaştırılması<em&gt; Plasmodium falciparum</emOpsonizing Antikor Analizlerde kullanım için&gt; merozoitler

Plasmodium falciparum merozoite antigens are under development as potential malaria vaccines. One aspect of immunity against malaria is the removal of ...

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

Akış Cytometry tarafından Kemirgen Plasmodium parazitemi Vivo Değerlendirilmesi ve Merozoit Invasion

During blood stage infection, malaria parasites invade, mature, and replicate within red blood cells (RBCs). This results in a regular growth cycle and an ...

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

Yöntemler Küçük RNA&#39;ların ve Ribosomal doluluk Düzenleyici Rolü Araştırma<em&gt; Plasmodium falciparum</em

The genetic variation responsible for the sickle cell allele (HbS) enables erythrocytes to resist infection by the malaria parasite, P. falciparum. The ...

Bioluminescence Imaging to Detect Late Stage Infection of African Trypanosomiasis

Biyoparlaklık Görüntüleme Afrika Trypanosomiasis Geç Evre Enfeksiyon Algılama için

Human African trypanosomiasis (HAT) is a multi-stage disease that manifests in two stages; an early blood stage and a late stage when the parasite invades ...