Name: measuring intracellular ca2+ changes in human sperm using four techniques: conventional fluorometry, stopped flow fluorometry, flow cytometry and single cell imaging
Uploaded: 2013-05-24T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell

Forfatterne takker Jose Luis De la Vega, Erika Melchy og Dr. Takuya Nishigaki for teknisk assistanse. Dette arbeidet ble støttet av Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACyT-Mexico) (99 333 og 128 566 til CT); Dirección General de Asuntos del Personlig Academico / Universidad Nacional Autónoma de México (IN202212-3 til CT).

I denne artikkelen rapporterer vi bruken av de fire nevnte teknikker for å måle [Ca 2 +] i endringer i menneskelige sædceller. Vi brukte progesteron for å utløse en Ca 2 + svar, som det er godt etablert at denne steroid produserer en forbigående [Ca 2 +] i økning i sædceller. Spesielt i menneskelig sperm, aktiverer progesteron direkte en Ca 2 +-kanal (nemlig CatSper) uttrykt utelukkende i plasma membran av sædceller 10,11. Vi har også...

<ol>
	<li>Bouschet, T., Henley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+as+an+extracellular+signalling+molecule:+perspectives+on+the+Calcium+Sensing+Receptor+in+the+brain.">Calcium as an extracellular signalling molecule: perspectives on the Calcium Sensing Receptor in the brain.</a> Comptes Rendus Biologies. 328, 691-700 (2005).</li><li>Darszon, A., Nishigaki, T., Beltran, C., Trevino, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+channels+in+the+development,+maturation,+and+function+of+spermatozoa.">Calcium channels in the development, maturation, and function of spermatozoa.</a> Physiol. Rev. 91, 1305-1355 (2011).</li><li>Esposito, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+deficient+for+soluble+adenylyl+cyclase+are+infertile+because+of+a+severe+sperm-motility+defect.">Mice deficient for soluble adenylyl cyclase are infertile because of a severe sperm-motility defect.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 2993-2998 (2004).</li><li>Avenarius, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+male+infertility+caused+by+mutations+in+the+CATSPER1+channel+protein.">Human male infertility caused by mutations in the CATSPER1 channel protein.</a> American Journal of Human Genetics. 84, 505-510 (2009).</li><li>Carlson, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+targeting+of+native+CatSper+channels+reveals+a+required+role+in+maintenance+of+sperm+hyperactivation.">Pharmacological targeting of native CatSper channels reveals a required role in maintenance of sperm hyperactivation.</a> PLoS ONE. 4, e6844 (2009).</li><li>Brokaw, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+flagellar+response+during+the+chemotaxis+of+bracken+spermatozoids.">Calcium and flagellar response during the chemotaxis of bracken spermatozoids.</a> J. Cell. Physiol. 83, 151-158 (1974).</li><li>Visconti, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capacitation+of+mouse+spermatozoa.+II.+Protein+tyrosine+phosphorylation+and+capacitation+are+regulated+by+a+cAMP-dependent+pathway.">Capacitation of mouse spermatozoa. II. Protein tyrosine phosphorylation and capacitation are regulated by a cAMP-dependent pathway.</a> Development. 121, 1139-1150 (1995).</li><li>Svahn, H. A., van den Berg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cells+or+large+populations.">Single cells or large populations.</a> Lab on a chip. 7, 544-546 (2007).</li><li>Pepperkok, R., Ellenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+fluorescence+microscopy+for+systems+biology.">High-throughput fluorescence microscopy for systems biology.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 690-696 (2006).</li><li>Strunker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CatSper+channel+mediates+progesterone-induced+Ca2++influx+in+human+sperm.">The CatSper channel mediates progesterone-induced Ca2+ influx in human sperm.</a> Nature. 471, 382-386 (2011).</li><li>Lishko, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Control+of+Male+Fertility+by+Spermatozoan+Ion+Channels.">The Control of Male Fertility by Spermatozoan Ion Channels.</a> Annu. Rev. Physiol. , (2011).</li><li>Kao, J. P., Harootunian, A. T., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+generated+cytosolic+calcium+pulses+and+their+detection+by+fluo-3.">Photochemically generated cytosolic calcium pulses and their detection by fluo-3.</a> J. Biol. Chem. 264, 8179-8184 (1989).</li><li>Kilic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caged+progesterone:+a+new+tool+for+studying+rapid+nongenomic+actions+of+progesterone.">Caged progesterone: a new tool for studying rapid nongenomic actions of progesterone.</a> Journal of the American Chemical Society. 131, 4027-4030 (2009).</li><li>Lishko, P. V., Botchkina, I. L., Kirichok, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+activates+the+principal+Ca2++channel+of+human+sperm.">Progesterone activates the principal Ca2+ channel of human sperm.</a> Nature. 471, 387-391 (2011).</li><li>Xia, J., Ren, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BSA-induced+Ca2++influx+during+sperm+capacitation+is+CATSPER+channel-dependent.">The BSA-induced Ca2+ influx during sperm capacitation is CATSPER channel-dependent.</a> Reprod. Biol. Endocrinol. 7, 119 (2009).</li><li>Galantino-Homer, H. L., Florman, H. M., Storey, B. T., Dobrinski, I., Kopf, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+sperm+capacitation:+assessment+of+phosphodiesterase+activity+and+intracellular+alkalinization+on+capacitation-associated+protein+tyrosine+phosphorylation.">Bovine sperm capacitation: assessment of phosphodiesterase activity and intracellular alkalinization on capacitation-associated protein tyrosine phosphorylation.</a> Mol. Reprod. Dev. 67, 487-500 (2004).</li><li>Baldi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+accumulation+and+responsiveness+to+progesterone+in+capacitating+human+spermatozoa.">Intracellular calcium accumulation and responsiveness to progesterone in capacitating human spermatozoa.</a> J. Androl. 12, 323-330 (1991).</li></ol>

Intracellulær signalering er avgjørende for de fleste cellulære aktiviteter, Ca 2 + er en allestedsnærværende messenger som følger mammalieceller gjennom hele sin levetid, fra sin opprinnelse ved befruktning, til slutten av sin livssyklus. Som svar på ulike stimuli, [Ca 2 +] Jeg øker, svinger og avtar med spatio-temporal kodifisering, følgelig er ulike prosesser aktivert, modulerte eller nedlegges av Ca 2 +-kodede meldinger. Intracellulær Ca 2 + dynamikken er svært ...

Ca 2 + er en universell andre budbringer signaltransduksjonsveiene i eukaryote celler. Intracellulær Ca2 + (Ca 2 + i) deltar i reguleringen av mange grunnleggende fysiologiske prosesser i både eksiterbare og ikke-eksiterbare celler,. Betydningen og allmenn bruk av Ca 2 + som andre messenger under signalformidling hendelser er avledet fra sin spatio-temporal allsidighet i overføring av informasjon i cellen. Mens Ca 2 + ikke kan syntetiseres de novo eller nedbrytes inne i cellen, dets intracellulære konsentrasjon ([Ca2 +] i) holdes innenfor svært strenge grenser gjennom ulike cellulære mekanismer som kontinuerlig buffer, binder, compartmentalize, og / eller akkumuleres Ca2 +. Forandringer i konsentrasjonen av dette ion kan oppstå i sterkt lokaliserte områder inne i cellen 1, og tolke slike svingninger er vesentlig for å oppnå en deEPER forståelse av (1) deres rolle i signalisering mekanisme, (2) deres fysiologisk betydning, og (3) de generelle mekanismer for celle-signalering. Ca 2 +-mediert signalisering er av særlig betydning i sperm fysiologi to. Spermiemotilitet er en av de viktigste funksjonene for befruktning suksess, og i virkeligheten kan flere sperm motilitet feil føre til sterilitet 3-5. Betydningen av Ca 2 + i flagellar bevegelsen har vært lenge anerkjent 6, men er mekanismen for hvordan Ca 2 + styrer den spesifikke form av flagellar bøyning ikke fullt ut forstått. Før den festes med egg, må sædceller gjennomgå capacitation, en kompleks prosess avhengig av sperm bolig i den kvinnelige skrift. Under capacitation, er sæden membranen lipid arkitektur og organisasjonen endres, hovedsakelig som følge av kolesterol fjernet fra plasma membran. I tillegg viste flere proteiner er tyrosin-fosforylated 7. Viktigere, under capacitation det er en økning i intracellulær pH (pH i) og i [Ca 2 +] i, og membranpotensialet hyperpolarizes i enkelte arter to. Capacitation finner bare sted i en subpopulasjon av spermatozoer (20-40%), og mekanismene som er involvert i alle disse cellulære endringer er langt fra klart. Det er generelt akseptert at bare en subpopulasjon capacitated sperm gjennomgå acrosome reaksjon (AR) når de utsettes for fysiologiske induktorer. AR er også en Ca 2 +-regulert arrangement som kreves for befruktning i alle arter som innehar en acrosome (spesialiserte organeller med ytre og indre membraner). I løpet av denne prosessen de ytre acrosomal membran sikringer med sperm plasma membran, slippe hydrolytic enzymer som gjør at sædcelle å trenge inn i glyco-proteinaceous matrise rundt egget (zona pellucida, eller ZP). AR avslører også en ny fusogenic sædcelle overflate som samhandler medegget plasma membran for endelig fusjon av begge kjønnsceller. Det finnes flere mobilnettet ligander som induserer AR, progesteron være en av de mest studerte blant dem. I dette arbeidet presenterer vi fire forskjellige teknikker som involverer bruk av en Ca2 +-sensitive fluorescerende fargestoff til å måle [Ca2 +] i forandringer i human sperm utløst av progesteron (med unntak av strømningscytometri, der vi målt [Ca 2 + ] jeg øker indusert under in vitro capacitation prosess). I dette spesielle tilfellet har vi brukt Fluo-3 AM (Life Technologies, Grand Island, NY), en membran som slipper gjennom fargestoff med en K D = 325 nM. In vitro overvåket vi fluorescens endres som en funksjon av tid med tre av de metodologier og med den fjerde teknikken målte vi fluorescens-verdier ved en enkelt gitt tidspunkt. Disse ulike tilnærminger utfyller hverandre, siden de til sammen gir romlige og tidsmessige resolution på både enkelt celle og celle bestandsnivå. Cell Befolkning eller Bulk Experiments Bulk teknikker er mye brukt ikke bare fordi instrumentene de trenger er lett tilgjengelig, men også fordi de er enkle, godt etablert, og la for gjennomsnitt av informasjon fra målinger utført på millioner av celler i et enkelt eksperiment. Technique # 1. Konvensjonell fluorometri Denne teknikken overvåker endringer i fluorescens som en funksjon av tid; forsøkene er utført i glass kyvetter med prøvemengder på mellom 200 til 1000 mL. Riktig blanding av tilsatte reagenser krever magnetisk omrøring, og derfor den tidsmessig oppløsning er erholdt i størrelsesorden sekunder. Den typiske celle konsentrasjonsområde av de analyserte prøvene er 10 5 -10 8 celler / ml. Technique # 2. Stoppet Flow fluorometri Tsin teknikk overvåker også endringer i fluorescens som en funksjon av tid, men reagensene blandes raskt sammen (ved hjelp av trykk) inn i et opptak kuvette som inneholder en meget liten prøvevolum (strekker 25-100 ul). Derfor er homogenisering av reagenser momentant, slik at en høy tidsmessig oppløsning i størrelsesorden millisekunder. Analyse av de resulterende fluorescens mot tid spor er egnet for å bestemme reaksjons-hastigheter, tydeliggjøring kompleksiteten av reaksjonsmekanismen, innhenting av informasjon om kortlivede mellomprodukter reaksjonsbetingelser, etc. Den vanlige celle konsentrasjonsområde av de analyserte prøvene er 10 5 -10 7 celler / ml. Enkelt celle Experiments Bulk eksperimenter rapporterer den gjennomsnittlige oppførselen til et stort antall celler, men kan ofte utvise en populasjon heterogene egenskaper som er oversett under en slik type målinger. Encellete teknikker er dermed brukes til å utfylle the informasjon innhentet med cellepopulasjonen eksperimenter. Technique # 3. Flowcytometrisystemer På tross av betydningen av den informasjon som oppstår fra enkelt-celle-målinger, er det viktig å analysere et stort antall celler for å hindre feilaktige ekstrapolering av celle-spesifikke egenskaper til hele populasjonen. Av denne grunn er high-throughput teknikker foretrekkes, og de mest populære metoden er flowcytometri, hvori 10 000 celler pr tilstand blir vanligvis analysert. Denne metoden gjør det mulig for multi-parametrisk analyse av heterogene populasjoner som det kategoriserer celler i henhold til deres størrelse (forward scatter (FSC)), detaljnivå (side scatter (SSC)) og fluorescens intensitet (spesifikk merking med et antistoff, levedyktighet markør, etc.) , og dermed gi informasjon om parametre &#39;fordeling for en gruppe av celler. Flowcytometri gir umiddelbar snarere enn tidsavhengig informasjon åtte. Forward og side scatter verdier are også nyttig for å velge en gate som inneholder celler, men diskriminerer mobilnettet rusk, støv, etc. For fluorescens målinger, negative og positive fluorescens kontroller må også inkluderes. Hvis mer enn én fluorescens kanalen brukes, må en prosess som kalles kompensasjon utføres (for detaljer se <a href="http://www.bdbiosciences.com/resources/protocols/setting_compensation.jsp" target="_blank">http://www.bdbiosciences.com/resources/protocols/setting_compensation.jsp</a> ). Kompensasjon åpner for spektral overlapping diskriminering blant fluorophores. Strømningscytometri tillater også diskriminering av døde celler, vanligvis ved hjelp av propidium jodid farging. Technique # 4. Enkelt Cell Imaging Mikroskopi er en annen vanlig metode for å studere enkelt celle atferd, det er godt egnet for tidsavhengige studier og det gir også romlig oppløsning. En stor ulempe er at high-throughput analyser er bare i sin spede begynnelse på det nåværende tidspunkt <sopp&gt; 9.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ham's F-10</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>N-6013</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bovine Serum Albumin</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A-7906</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium Chloride Dihydrate approx. 99%</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C-3881</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Makler Counting Chamber</td>
 <td>SEFI Medical Insruments LTD</td>
 <td>SEF-MAKL</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluo-3 AM</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>F-1242</td>
 <td>20 vials/50 &mu;g each</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ionomycin</td>
 <td>Alomone</td>
 <td>I-700</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Progesterone</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P0130</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>S-9888</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Potassium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P-3911</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium bicarbonate</td>
 <td>JT Baker</td>
 <td>3506</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Magnesium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>M-2670</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium chloride anhydrous</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C-1016</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HEPES</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>H-3125</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>D-Glucose</td>
 <td>JT Baker</td>
 <td>1906-01</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium pyruvate</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P-2256</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium L-lactate (aprox. 99%)</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>L- 7022</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Propidium Iodide </td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>L-7011 </td>
 <td>Component B</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Triton X-100 (t-Octylphenoxypolyethoxyethanol)</td>
 <td>Sigma- Aldrich</td>
 <td>X-100</td>
 <td>2.4 mM solution in water </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Round coverslip </td>
 <td>VWR</td>
 <td>48380 080</td>
 <td>25 mm diameter</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Poly-L-lysine solution </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P8920</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Manganese chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>M-3634</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Attofluor; Cell Chamber, for microscopy</td>
 <td>Life technologies</td>
 <td>A-7816</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dimethyl Sulphoxide</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D2650</td>
 <td>5x5 ml</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

measuring intracellular ca2+ changes in human sperm using four techniques: conventional fluorometry, stopped flow fluorometry, flow cytometry and single cell imaging

Sædceller er mannlige kjønnsceller er spesielt konstruert for å nå, gjenkjenne og fusjonere med egg. For å utføre disse oppgavene, må sædcellene være forberedt på å møte et stadig skiftende miljø og overvinne flere fysiske barrierer. Å være i hovedsak transcriptionally og translationally stille, disse bevegelige celler stole fullt og helt om ulike signalering mekanismer å orientere seg og svømme i en rettet måte, og å stri med utfordrende miljøforhold under sin reise for å finne egget. Spesielt er Ca 2 +-mediert signalisering sentral for flere sperm funksjoner: aktivering av motilitet, capacitation (en kompleks prosess som forbereder spermier for den acrosome reaksjon) og den acrosome reaksjon (exocytotic en hendelse som gjør at sæd-egg fusjon). Bruken av fluorescerende fargestoffer for å spore intracellulære svingninger av denne ion er av bemerkelsesverdig betydning på grunn av sin enkle programmet, følsomhet og allsidighet i Detection. Ved hjelp av en enkelt dye-lasting protokollen vi bruker fire forskjellige fluorometriske teknikker for å overvåke sperm Ca 2 + dynamikk. Hver teknikk gir tydelig informasjon som gjør romlige og / eller tidsmessig oppløsning, generering av data både på enkelt celle og celle bestandsnivå.

<img alt="Figur 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50344/50344fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50344/50344fig1.jpg" /> Figur 1. Skisse av den eksperimentelle protokollen for sperm prøveopparbeidelse av swim-up-metoden. Den store skritt for separasjon av aktive sædceller og for justering av konsentrasjonen deres er illustrert. Den siste inkubasjonstrinn blir bare utført når capacitation er nødvendig. <p class="jove_content" fo:ke...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell 

Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell Imaging (Video) | JoVE

Intracellulær Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Dynamikk er svært viktig i sperm fysiologi og Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;-Sensitive fluorescerende fargestoffer utgjør et allsidig verktøy for å studere dem. Befolkning eksperimenter (fluorometri og stoppet flyt fluorometri) og encellede eksperimenter (flowcytometri og enkelt celle imaging) brukes til å spore spatio-temporal [Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;] Endringer i menneskelige sædceller.

Måling Intracellulær Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Endring i Menneskelig Sperm bruker Fire Teknikker: Konvensjonell fluorometri, Stoppet Flow fluorometri, flowcytometrisystemer og Single Cell Imaging

Spermatozoa  are male reproductive cells especially designed to reach, recognize and fuse  with the egg. To perform these tasks, sperm cells must be ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell Imaging

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm (Video) | JoVE

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells (Video) | JoVE

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry (Video) | JoVE

Måling cellesyklusprogresjon Kinetics med metabolsk Merking og flowcytometrisystemer

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes (Video) | JoVE

Optimalisert flekker og spredning modellering Metoder for Celledeling Overvåking hjelp Cell Tracking Fargestoffer

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry (Video) | JoVE

Den<em&gt; Xenopus</em&gt; Oocytter Cut-open vaselin Gap Voltage-klemme teknikk med fluorometri

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry (Video) | JoVE

Teknikker for analyse av Ekstracellulær Blemmer ved hjelp av flowcytometri

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

LED Thermo Flow &#8212; Combining Optogenetics with Flow Cytometry

LED Thermo Flow Ã¢â‚¬â€ Combining Optogenetics with Flow Cytometry (Video) | JoVE

LED Thermo Flow - Kombinere Optogenetics med flowcytometrisystemer

Optogenetic tools allow isolated, functional investigations of almost any signaling molecule within complex signaling pathways. A major obstacle is the ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry (Video) | JoVE

Analyse av cellesuspensjoner Isolert fra solid vev ved Spectral Flow Cytometry

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry (Video) | JoVE

Vurdere autophagic Flux ved å måle LC3, p62 og LAMP1 Co-lokalisering ved hjelp av flerspektral bildeflow-cytometri

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

Measuring Endoreduplication by Flow Cytometry of Isolated Tuber Protoplasts

Measuring Endoreduplication by Flow Cytometry of Isolated Tuber Protoplasts (Video) | JoVE

Måle Endoreduplication av flowcytometri av isolerte Tuber Protoplasts

Endoreduplication, the replication of a cell's nuclear genome without subsequent cytokinesis, yields cells with increased DNA content and is associated ...