Name: measuring intracellular ca2+ changes in human sperm using four techniques: conventional fluorometry, stopped flow fluorometry, flow cytometry and single cell imaging
Uploaded: 2013-05-24T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell

Авторы благодарят Хосе Луис де ла Вега, Эрика Melchy и доктор Такуя Nishigaki за техническую помощь. Эта работа выполнена при поддержке Национального совета де Ciencia у Tecnología (КОНАСИТ-Мексика) (99 333 и 128 566 КТ); Dirección генерала де Asuntos дель Личная Academico / Национального автономного университета Мексики (IN202212-3 КТ).

В данной работе мы сообщаем об использовании четырех вышеупомянутых методов измерения [Ca 2 +] я изменения в клетках человека спермы. Мы использовали прогестерон, чтобы вызвать Са 2 + ответ, как это хорошо известно, что этот стероид производит переходные [Са 2 +]...

<ol>
	<li>Bouschet, T., Henley, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+as+an+extracellular+signalling+molecule:+perspectives+on+the+Calcium+Sensing+Receptor+in+the+brain.">Calcium as an extracellular signalling molecule: perspectives on the Calcium Sensing Receptor in the brain.</a> Comptes Rendus Biologies. 328, 691-700 (2005).</li><li>Darszon, A., Nishigaki, T., Beltran, C., Trevino, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+channels+in+the+development,+maturation,+and+function+of+spermatozoa.">Calcium channels in the development, maturation, and function of spermatozoa.</a> Physiol. Rev. 91, 1305-1355 (2011).</li><li>Esposito, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+deficient+for+soluble+adenylyl+cyclase+are+infertile+because+of+a+severe+sperm-motility+defect.">Mice deficient for soluble adenylyl cyclase are infertile because of a severe sperm-motility defect.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 2993-2998 (2004).</li><li>Avenarius, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+male+infertility+caused+by+mutations+in+the+CATSPER1+channel+protein.">Human male infertility caused by mutations in the CATSPER1 channel protein.</a> American Journal of Human Genetics. 84, 505-510 (2009).</li><li>Carlson, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+targeting+of+native+CatSper+channels+reveals+a+required+role+in+maintenance+of+sperm+hyperactivation.">Pharmacological targeting of native CatSper channels reveals a required role in maintenance of sperm hyperactivation.</a> PLoS ONE. 4, e6844 (2009).</li><li>Brokaw, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+flagellar+response+during+the+chemotaxis+of+bracken+spermatozoids.">Calcium and flagellar response during the chemotaxis of bracken spermatozoids.</a> J. Cell. Physiol. 83, 151-158 (1974).</li><li>Visconti, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capacitation+of+mouse+spermatozoa.+II.+Protein+tyrosine+phosphorylation+and+capacitation+are+regulated+by+a+cAMP-dependent+pathway.">Capacitation of mouse spermatozoa. II. Protein tyrosine phosphorylation and capacitation are regulated by a cAMP-dependent pathway.</a> Development. 121, 1139-1150 (1995).</li><li>Svahn, H. A., van den Berg, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single+cells+or+large+populations.">Single cells or large populations.</a> Lab on a chip. 7, 544-546 (2007).</li><li>Pepperkok, R., Ellenberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+fluorescence+microscopy+for+systems+biology.">High-throughput fluorescence microscopy for systems biology.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 7, 690-696 (2006).</li><li>Strunker, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+CatSper+channel+mediates+progesterone-induced+Ca2++influx+in+human+sperm.">The CatSper channel mediates progesterone-induced Ca2+ influx in human sperm.</a> Nature. 471, 382-386 (2011).</li><li>Lishko, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Control+of+Male+Fertility+by+Spermatozoan+Ion+Channels.">The Control of Male Fertility by Spermatozoan Ion Channels.</a> Annu. Rev. Physiol. , (2011).</li><li>Kao, J. P., Harootunian, A. T., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photochemically+generated+cytosolic+calcium+pulses+and+their+detection+by+fluo-3.">Photochemically generated cytosolic calcium pulses and their detection by fluo-3.</a> J. Biol. Chem. 264, 8179-8184 (1989).</li><li>Kilic, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caged+progesterone:+a+new+tool+for+studying+rapid+nongenomic+actions+of+progesterone.">Caged progesterone: a new tool for studying rapid nongenomic actions of progesterone.</a> Journal of the American Chemical Society. 131, 4027-4030 (2009).</li><li>Lishko, P. V., Botchkina, I. L., Kirichok, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progesterone+activates+the+principal+Ca2++channel+of+human+sperm.">Progesterone activates the principal Ca2+ channel of human sperm.</a> Nature. 471, 387-391 (2011).</li><li>Xia, J., Ren, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+BSA-induced+Ca2++influx+during+sperm+capacitation+is+CATSPER+channel-dependent.">The BSA-induced Ca2+ influx during sperm capacitation is CATSPER channel-dependent.</a> Reprod. Biol. Endocrinol. 7, 119 (2009).</li><li>Galantino-Homer, H. L., Florman, H. M., Storey, B. T., Dobrinski, I., Kopf, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bovine+sperm+capacitation:+assessment+of+phosphodiesterase+activity+and+intracellular+alkalinization+on+capacitation-associated+protein+tyrosine+phosphorylation.">Bovine sperm capacitation: assessment of phosphodiesterase activity and intracellular alkalinization on capacitation-associated protein tyrosine phosphorylation.</a> Mol. Reprod. Dev. 67, 487-500 (2004).</li><li>Baldi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+calcium+accumulation+and+responsiveness+to+progesterone+in+capacitating+human+spermatozoa.">Intracellular calcium accumulation and responsiveness to progesterone in capacitating human spermatozoa.</a> J. Androl. 12, 323-330 (1991).</li></ol>

Внутриклеточной сигнализации является жизненно важным для большинства сотовых деятельности; Са 2 + является повсеместное посланника, который сопровождает клетках млекопитающих на протяжении всей своей жизни, от их происхождения при оплодотворении, к концу своего жизненного ци?...

Са 2 + является универсальным вторичным мессенджером путей сигнальной трансдукции в эукариотических клетках. Внутриклеточного Са 2 + (Ca 2 + I) участвует в регуляции многих фундаментальных физиологических процессов в обоих возбудимы и не возбудимых клеток. Важность и универсальность Са 2 + в качестве вторичного мессенджера во время события передачи сигнала является производным от его пространственно-временной гибкость в передаче информации внутри клетки. В то время как Са 2 + не могут быть синтезированы заново или деградации в клетке, его внутриклеточной концентрации ([Са 2 +]) поддерживается в пределах очень строгих ограничений через различные клеточные механизмы, которые непрерывно буфер, улавливание, устроены и / или накапливать Са2 +. Изменения концентрации этого иона может происходить в сильно локализованной области в пределах ячейки 1 и расшифровка таких колебаний имеет важное значение для получения деEPER понимание (1) их роль в сигнальный механизм, (2) их физиологическое значение, и (3) общие механизмы клеточной сигнализации. Ca 2 +-опосредованной сигнализации имеет особое значение в сперме физиологии 2. Подвижность сперматозоидов является одним из наиболее важных функций для оплодотворения успех, и в самом деле, некоторые дефекты подвижности сперматозоидов может привести к бесплодию 3-5. Важность Ca 2 + в движение жгутиковых Уже давно признано, 6, однако механизм того, как Ca 2 + контролирует специфическая форма жгутиковое изгиба до конца не изучен. Перед сваркой с яйцом, сперматозоиды должны пройти капацитация, сложный процесс зависит от спермы резиденции внутри женского тракта. Во капацитация, липидные мембраны сперматозоидов архитектуры и организации будут изменены, в основном в результате удаления холестерина из плазмы мембраны. Кроме того, некоторые белки тирозин-фосфорylated 7. Важно отметить, что во время капацитации происходит увеличение внутриклеточного рН (я) и [Са 2 +], и мембранный потенциал гиперполяризует у некоторых видов 2. Капацитация происходит только в субпопуляции сперматозоидов (20-40%), а также механизмы, участвующие во всех этих клеточных изменений, далеко не ясны. Принято считать, что только субпопуляции капаситированных спермы проходят акросомной реакции (AR) под воздействием физиологических индукторов. AR также Ca 2 +-регулируемых событий необходимы для оплодотворения у всех видов обладающих акросоме (специализированные органеллы с внешней и внутренней мембраны). Во время этого процесса внешней мембраны акросомную предохранители с плазменной мембраны сперматозоидов, выпуская гидролитические ферменты, которые позволяют сперматозоидам проникнуть в глико-белковые матрицы, окружающей яйцо (пеллюцида или ZP). AR также предоставляет новые фузогенные поверхности сперматозоида, который взаимодействует смембраны плазмы яичного для окончательного слияния двух гамет. Есть несколько сотовых лигандов, которые вызывают AR, прогестерон является одним из наиболее изученных среди них. В данной работе мы представляем четыре различные методы, связанные с использованием Са 2 +-чувствительного флуоресцентного красителя для измерения [Ca 2 +] я изменения в сперме человека вызваны прогестерона (за исключением проточной цитометрии, в которых мы определили [Ca 2 + ] Я увеличить индуцированной во время процесса капацитация в пробирке). В данном случае мы использовали Fluo-3 утра (Life Technologies, Grand Island, NY), проницаемые мембраны красителя с К D = 325 нм. Экстракорпоральное мы провели мониторинг изменений флуоресценции как функции времени с тремя из методологий, и с четвертым техники были измерены величины флуоресценции на одной данный момент времени. Эти различные подходы дополняют друг друга, так как в целом они обеспечивают пространственное и временное разрешениеOlution как на одну клетку и уровни клеточной популяции. Клеточной популяции или массовых экспериментов Массовые методы широко используются не только потому, что они требуют инструментов легко доступны, но и потому, что они просты, хорошо известна, и позволяют усреднение информации из измерений, проведенных на миллионов клеток в одном эксперименте. Метод № 1. Обычные флуорометрии Этот метод отслеживает изменения флуоресценции в зависимости от времени; Эксперименты проводились в стеклянной кюветы с образцами объемом от 200 до 1000 мкл. Правильное смешивание реагентов требуется добавить магнитной мешалкой и, следовательно, временное разрешение получено составляет порядка нескольких секунд. Типичный диапазон концентрации клеток из анализируемых образцов составляет 10 5 -10 8 клеток / мл. Метод № 2. Остановленной струи флуорометрии Tего техники также отслеживает изменения флуоресценции в зависимости от времени, но реагенты быстро смешивают вместе (с помощью давления) в запись кювету очень небольшой объем образца (в пределах от 25-100 мкл). Таким образом, гомогенизации реагентов происходит мгновенно, что позволяет высоким временным разрешением порядка миллисекунд. Анализ полученного в результате флуоресценции в зависимости от времени следы пригодны для определения скорости реакции выяснения сложность механизма реакции, получение информации о недолго промежуточных продуктов реакции и т.д. общий диапазон концентрации клеток из анализируемых образцов составляет 10 5 -10 7 клеток / мл. Одноместный экспериментах с клеточными Массовое экспериментов сообщают среднего поведение большого количества клеток, однако популяции может часто демонстрируют гетерогенные свойства, которые пропускаются в течение такого типа измерений. Одноместный Клеточные технологии при этом используются в дополнение к-йэлектронной информации, полученной с экспериментами клеточной популяции. Метод № 3. Проточной цитометрии Несмотря на важность информации, вытекающие из отдельных измерений клетки, важно проанализировать большое количество клеток для того, чтобы предотвратить ошибочное экстраполяции клетка-специфическими свойствами в совокупности. По этой причине высокой пропускной методами собираются в стаи и самый популярный метод проточной цитометрии, в которых 10 000 клеток на состояние условно проанализированы. Этот метод позволяет мульти-параметрического анализа гетерогенных популяций, как это классифицирует клетки в зависимости от их размера (прямого рассеяния (FSC)), детализации (бокового рассеяния (SSC)) и интенсивность флуоресценции (особая маркировка с антителом, жизнеспособность маркером и т.д.) , тем самым обеспечивая информацию о распределении параметров для группы ячеек. Проточной цитометрии обеспечивает мгновенный, а не зависящие от времени информации 8. Вперед и в стороны разброс значений арэлектронной также полезны для выбора ворот, который включает клетки, но дискриминационным клеточных остатков, пыли и т.п. Для измерения флуоресценции, отрицательных и положительных флуоресценции управления также должны быть включены. Если более чем один флуоресценции канал используется, процесс, известный как компенсация должна быть выполнена (подробнее см. <a href="http://www.bdbiosciences.com/resources/protocols/setting_compensation.jsp" target="_blank">http://www.bdbiosciences.com/resources/protocols/setting_compensation.jsp</a> ). Компенсация позволяет спектрального перекрытия дискриминации среди флуорофорам. Проточная цитометрия также позволяет дискриминация мертвых клеток, обычно с помощью окрашивания йодистым пропидием. Метод № 4. Одноместный изображений Сотовые Микроскопия является еще одним распространенным методом изучения поведения одного клетки; он хорошо подходит для зависящих от времени исследований, а также обеспечивает пространственное разрешение. Основным недостатком является то, что высокопроизводительного анализа только в зачаточном состоянии в настоящее время <sдо&gt; 9.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ham's F-10</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>N-6013</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bovine Serum Albumin</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>A-7906</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium Chloride Dihydrate approx. 99%</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C-3881</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Makler Counting Chamber</td>
 <td>SEFI Medical Insruments LTD</td>
 <td>SEF-MAKL</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluo-3 AM</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>F-1242</td>
 <td>20 vials/50 &mu;g each</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ionomycin</td>
 <td>Alomone</td>
 <td>I-700</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Progesterone</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P0130</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>S-9888</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Potassium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P-3911</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium bicarbonate</td>
 <td>JT Baker</td>
 <td>3506</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Magnesium chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>M-2670</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calcium chloride anhydrous</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>C-1016</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HEPES</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>H-3125</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>D-Glucose</td>
 <td>JT Baker</td>
 <td>1906-01</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium pyruvate</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P-2256</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Sodium L-lactate (aprox. 99%)</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>L- 7022</td>
 <td>Reagents for human sperm medium (HSM)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Propidium Iodide </td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>L-7011 </td>
 <td>Component B</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Triton X-100 (t-Octylphenoxypolyethoxyethanol)</td>
 <td>Sigma- Aldrich</td>
 <td>X-100</td>
 <td>2.4 mM solution in water </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Round coverslip </td>
 <td>VWR</td>
 <td>48380 080</td>
 <td>25 mm diameter</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Poly-L-lysine solution </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>P8920</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Manganese chloride</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>M-3634</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Attofluor; Cell Chamber, for microscopy</td>
 <td>Life technologies</td>
 <td>A-7816</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dimethyl Sulphoxide</td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>D2650</td>
 <td>5x5 ml</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

measuring intracellular ca2+ changes in human sperm using four techniques: conventional fluorometry, stopped flow fluorometry, flow cytometry and single cell imaging

Сперматозоиды мужских репродуктивных клетках рассчитанным в первую очередь, признать и сливаться с яйцом. Для выполнения этих задач, сперматозоиды должны быть готовы к постоянно меняющейся окружающей среде и преодолеть несколько физических барьеров. Будучи по сути транскрипции и поступательно молчать, эти подвижные клетки глубоко полагаться на разнообразных сигнальных механизмов ориентироваться и плавать в направленном моде, и, чтобы бороться с сложных условиях окружающей среды во время их путешествия, чтобы найти яйцо. В частности, Ca 2 +-передачи сигналов имеет решающее значение для нескольких функций спермы: активация моторики, капацитация (сложный процесс, который готовит спермы для акросомной реакции) и акросомной реакции (экзоцитоза событие, позволяющее спермы яйца синтеза). Использование флуоресцентных красителей для отслеживания внутриклеточных колебаний этого иона имеет значительное место из-за их легкости применения, чувствительность и универсальность Detперегиба. Использование одного красителя загрузке протокола мы используем четыре различных флуорометрическая методов для контроля спермы Ca 2 + динамики. Каждый из этих методов имеет определенные информацию, которая позволяет пространственное и / или временное разрешение, генерации данных как на одну клетку и уровни клеточной популяции.

<img alt="Рисунок 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50344/50344fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50344/50344fig1.jpg" /> Рисунок 1. Принципиальная схема экспериментальной протокол образец спермы подготовка к которому можно подплыть методом. Основные шаги для разделения подвижных спермато?...

Watch this Scientific Journal Video about Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell 

Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell Imaging

Внутриклеточного Са<sup&gt; 2 +</sup&gt; Динамика очень важны в сперме физиологии и Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Чувствительных флуоресцентных красителей представляют собой универсальный инструмент для их изучения. Население экспериментов (флуорометрию и остановил поток флуорометрию) и разовых экспериментов клетки (проточной цитометрии и одной ячейки изображения) используются для отслеживания пространственно-временных [Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt;] Изменения в человеческих клетках спермы.

Измерение внутриклеточного Са<sup&gt; 2 +</sup&gt; Изменения в человеческой спермы с помощью четырех методов: Обычные флуорометрии, остановленной струи флуорометрии, проточной цитометрии и односпальная изображений Сотовые

Spermatozoa  are male reproductive cells especially designed to reach, recognize and fuse  with the egg. To perform these tasks, sperm cells must be ...

Research

JoVE Journal

Biology

Measuring Intracellular Ca2+ Changes in Human Sperm using Four Techniques: Conventional Fluorometry, Stopped Flow Fluorometry, Flow Cytometry and Single Cell Imaging

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Techniques for Imaging Ca2+ Signaling in Human Sperm

Методы для работы с изображениями Ca 2 + Сигнализация в человеческой спермы

Fluorescence microscopy of cells loaded with fluorescent, Ca2+-sensitive dyes is used for measurement of spatial and temporal aspects of Ca2+ signaling in ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

Проточной цитометрии Очистка мыши мейоза клетки

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Measuring Cell Cycle Progression Kinetics with Metabolic Labeling and Flow Cytometry

Измерительная ячейка Кинетика цикла прогрессии с метаболическим Маркировка и проточной цитометрии

Precise control of the initiation and subsequent progression through the various phases of the cell cycle are of paramount importance in proliferating ...

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Оптимизирован Окрашивание и распространения методов моделирования для деления клеток Мониторинг использования красителей сотовых слежения

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

<em&gt; Xenopus</em&gt; Ооцитов Cut открыть Вазелин Gap Напряжение-зажим Техника С флуорометрии

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

Techniques for the Analysis of Extracellular Vesicles Using Flow Cytometry

Методы анализа внеклеточной везикул с использованием проточной цитометрии

Extracellular Vesicles (EVs) are small, membrane-derived vesicles found in bodily fluids that are highly involved in cell-cell communication and help ...

LED Thermo Flow &#8212; Combining Optogenetics with Flow Cytometry

LED Thermo Flow ÃƒÆ’Ã‚Â¢ÃƒÂ¢Ã¢â‚¬Å¡Ã‚Â¬ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã‚Â Combining Optogenetics with Flow Cytometry

LED Thermo Flow - Сочетание оптогенетика с проточной цитометрии

Optogenetic tools allow isolated, functional investigations of almost any signaling molecule within complex signaling pathways. A major obstacle is the ...

Analysis of Cell Suspensions Isolated from Solid Tissues by Spectral Flow Cytometry

Анализ Суспензии клеток, выделенная из твердых тканей с помощью спектральной проточной цитометрии

Flow cytometry has been used for the past 40 years to define and analyze the phenotype of lymphoid and other hematopoietic cells. Initially restricted to ...

Assessing Autophagic Flux by Measuring LC3, p62, and LAMP1 Co-localization Using Multispectral Imaging Flow Cytometry

Оценка аутофагического потока путем измерения локализации LC3, p62 и LAMP1 с использованием мультиспектральной визуальной проточной цитометрии

Autophagy is a catabolic pathway in which normal or dysfunctional cellular components that accumulate during growth and differentiation are degraded via ...

Measuring Endoreduplication by Flow Cytometry of Isolated Tuber Protoplasts

Измерение Endoreduplication подачей Cytometry изолированных клубней протопласта

Endoreduplication, the replication of a cell's nuclear genome without subsequent cytokinesis, yields cells with increased DNA content and is associated ...