Name: in vivo imaging of tumor angiogenesis using fluorescence confocal videomicroscopy
Uploaded: 2013-09-11T14:30:00
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1. इसके विपरीत एजेंट की तैयारी <ol><li> FITC-dextran 70 केडीए के लिए, इंजेक्शन की खुराक 500 मिलीग्राम / किग्रा (FITC-dextran के 10 मिलीग्राम 20 ग्राम वजन एक माउस के लिए नमक की 0.1 मिलीलीटर में पतला) है. </li><li> एजेंट प्रकाश को भी लंबे समय उज?...

<ol>
	<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamental+concepts+of+the+angiogenic+process.">Fundamental concepts of the angiogenic process.</a> Curr Mol Med. 3 (7), 643-651 (2003).</li><li>Laemmel, E., Genet, M., Le Goualher, G., Perchant, A., Le Gargasson, J. F., Vicaut, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibered+confocal+fluorescence+microscopy+(Cell-viZio)+facilitates+extended+imaging+in+the+field+of+microcirculation.+A+comparison+with+intravital+microscopy.">Fibered confocal fluorescence microscopy (Cell-viZio) facilitates extended imaging in the field of microcirculation. A comparison with intravital microscopy.</a> J Vasc Res. 41 (5), 400-411 (2004).</li><li>Charnley, N., Donaldson, S., Price, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+angiogenesis.">Imaging angiogenesis.</a> Methods Mol Biol. 467, 25-51 (2009).</li><li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Taillieu, F., Cuenod, C., Siauve, N., Clement, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+contrast+enhanced+optical+imaging+of+capillary+leakage.">Dynamic contrast enhanced optical imaging of capillary leakage.</a> Technol Cancer Res Treat. 10 (1), 49-57 (2011).</li><li>Kurose, I., Kubes, P., Wolf, R., Anderson, D. C., Paulson, J., Miyasaka, M., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+nitric+oxide+production.+Mechanisms+of+vascular+albumin+leakage.">Inhibition of nitric oxide production. Mechanisms of vascular albumin leakage.</a> Circ Res. 73 (1), 164-171 (1993).</li><li>Faye, N. F. L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macromolecular+capillary+leakage+is+involved+in+the+onset+of+anaphylactic+hypotension.">Macromolecular capillary leakage is involved in the onset of anaphylactic hypotension.</a> Anesthesiology. , (2012).</li><li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Macromolecular Capillary Leakage Is Involved in the Onset of Anaphylactic Hypotension. Anesthesiology. 117 (5), 1072-1079 (2012).</li><li>Tozer, G. M., Kanthou, C., Baguley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disrupting+tumour+blood+vessels.">Disrupting tumour blood vessels.</a> Nat Rev Cancer. 5 (6), 423-435 (2005).</li><li>Ntziachristos, V., Schellenberger, E. A., Ripoll, J., Yessayan, D., Graves, E., Bogdanov, A., Josephson, L., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+antitumor+treatment+by+means+of+fluorescence+molecular+tomography+with+an+annexin+V-Cy5.5+conjugate.">Visualization of antitumor treatment by means of fluorescence molecular tomography with an annexin V-Cy5.5 conjugate.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (33), 12294-12299 (2004).</li><li>Cuccia, D. J., Bevilacqua, F., Durkin, A. J., Merritt, S., Tromberg, B. J., Gulsen, G., Yu, H., Wang, J., Nalcioglu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+optical+contrast+agent+dynamics+in+rat+tumors+by+use+of+diffuse+optical+spectroscopy+with+magnetic+resonance+imaging+coregistration.">In vivo quantification of optical contrast agent dynamics in rat tumors by use of diffuse optical spectroscopy with magnetic resonance imaging coregistration.</a> Appl Opt. 42 (16), 2940-2950 (2003).</li></ol>

ट्यूमर microcirculation के अध्ययन ट्यूमर के विकास, प्रसार और चिकित्सा 1 के जवाब के pathophysiology समझ में आवश्यक हो गया है. ऑप्टिकल इमेजिंग एक फ्लोरोसेंट विपरीत एजेंट का उपयोग केशिकाओं निरीक्षण करने के लिए और रूपात्म?...

Angiogenesis पूर्व मौजूदा जहाजों से नए रक्त वाहिकाओं के गठन शामिल है एक जटिल प्रक्रिया है 1. धमनियों, capillaries, और venules से बना ऊतक microcirculation में रोग परिवर्तन, जैसे कैंसर, सूजन, या मधुमेह जैसे रोगों की एक बड़ी रेंज में फंसा रहे हैं. यह मात्रात्मक microvessel संरचना और समारोह का आकलन करने के तरीकों को विकसित करने के लिए इसलिए जरूरी है. इमेजिंग वास्तविक समय में और vivo में, एक गैर या सूक्ष्म आक्रामक तरीके से microvessels के अध्ययन के लिए सक्षम बनाता है, और एक ही पशु 2 में समय पर दोहराया उपाय. वर्तमान में, गतिशील विपरीत बढ़ाकर (डी सी इ) इमेजिंग 3 सामान्यतः ऊतक microcirculation आकलन करने के लिए प्रयोग किया जाता है. गतिशील विपरीत बढ़ाकर इमेजिंग समय के साथ नसों में इंजेक्शन एक दरियाफ्त की biodistribution इस प्रकार है जो एक तकनीक है. इस अधिग्रहण से, मात्रात्मक मापदंडों ऊतक vascularization दर्शाती निकाला जा सकता है. डी सी इ इमेजिंगसबसे अधिक बार सीटी, एमआरआई या अल्ट्रासाउंड के साथ इस्तेमाल किया गया है. हालांकि, इन इमेजिंग तकनीक विशिष्ट प्रयोगात्मक उपकरणों के उपयोग के साथ अन्य की तुलना में उनके संकल्प, सबसे अधिक बार macroscopic रहता है के बाद से, microvessels के प्रत्यक्ष देखने की अनुमति नहीं है. इस पत्र में, हम fibered confocal videomicroscopy साथ, गतिशील विपरीत बढ़ाकर ऑप्टिकल इमेजिंग का उपयोग सूक्ष्म पैमाने पर और vivo में ट्यूमर वाहिका अध्ययन करने का प्रस्ताव है. हम अपनी आणविक वजन और ऊतकों की अन्तःचूचुक की विशेषताओं 4 अध्ययन के अनुसार, interstitium में endothelial बाधा के माध्यम से जहाजों या लीक के भीतर विशेष रूप से बनी हुई है, जो एक macromolecular विपरीत एजेंट (FITC-dextran) का इस्तेमाल किया. इस लीक और interstitium में जमते द्वारा, सही ढंग से जहाजों delineating द्वारा दोनों microvessel संरचना का अध्ययन, और केशिका पारगम्यता की अनुमति दी.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Insulin serynge 
 Myjector 1ml 
 29G</td>
 <td>Terumo Europe </td>
 <td>BS-05M2913</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorescein isothiocyanate-dextran 70 kDa </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>01619HH</td>
 <td>100 mg/mL 
 diluted in saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fibered confocal videomicroscopy</td>
 <td>Cellvizio - MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calibration and Cleaning Kit for LEICAFCM1000</td>
 <td>Leica Microsystems</td>
 <td>LSU-488</td>
 <td>Store at 4 &deg;C</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Probe ProFlexTM Z</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mosaicing software</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vessel detection software</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

in vivo imaging of tumor angiogenesis using fluorescence confocal videomicroscopy

एक फाइबर ऑप्टिक बंडल के साथ fibered confocal प्रतिदीप्ति में vivo इमेजिंग फ्लोरोसेंट confocal माइक्रोस्कोपी के रूप में एक ही सिद्धांत का उपयोग करता है. यह ऑप्टिकल फाइबर के माध्यम से सीटू तत्वों में फ्लोरोसेंट उत्तेजित, और फिर एक ही ऑप्टिकल फाइबर के माध्यम से उत्सर्जित फोटॉनों से कुछ रिकॉर्ड कर सकते हैं. प्रकाश स्रोत फाइबर बंडल के भीतर एक तत्व के माध्यम से रोमांचक प्रकाश भेजता है और यह नमूना भर में स्कैन करता है, के रूप में पिक्सेल द्वारा एक छवि पिक्सेल recreates कि एक लेजर है. इस स्कैन समर्पित इमेज प्रोसेसिंग सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन से, बहुत तेजी से होता है, 12 फ्रेम / सेकंड की एक आवृत्ति के साथ वास्तविक समय में छवियों को प्राप्त किया जा सकता है. हम एक confocal प्रतिदीप्ति videomicroscopy उपकरण का उपयोग कर, मात्रात्मक केशिका आकारिकी और समारोह को चिह्नित करने के लिए एक तकनीक विकसित की है. हमारे प्रयोग में पहला कदम केशिका नेटवर्क कल्पना करने के लिए ट्यूमर के चार quadrants में 5 सेकंड फिल्मों का रिकॉर्ड था. सभी फिल्में (सॉफ्टवेयर का उपयोग संसाधित थे मैंmageCell, एक चुना व्यास (हमारे मामले में 10 माइक्रोन) के आसपास वाहिकाओं के एक स्वचालित विभाजन से करता है कि मौना प्रौद्योगिकी, पेरिस फ्रांस). इस प्रकार, हम कुल पोत क्षेत्र और छवि के कुल क्षेत्र के बीच का अनुपात है जो &#39;कार्यात्मक केशिका घनत्व&#39;, यों सकता. यह पैरामीटर आमतौर पर विकृति उपकरणों का उपयोग करके मापा, microvascular घनत्व के लिए एक किराए मार्कर था. दूसरे चरण के interstitium में केशिका दीवार के माध्यम से macromolecular विपरीत एजेंट के रिसाव यों को 20 मिनट से अधिक ट्यूमर की फिल्मों का रिकॉर्ड था. वाहिकाओं में है कि अधिक interstitium में संकेत तीव्रता के अनुपात को मापने के द्वारा, एक &#39;सूचकांक रिसाव&#39; केशिका पारगम्यता के लिए एक किराए मार्कर के रूप में अभिनय, प्राप्त हुई थी.

एकत्र आंकड़ों का प्रयोग, हम मात्रात्मक microcirculation को दर्शाती विभिन्न मापदंडों का विश्लेषण कर सकता है. हमने अध्ययन में विवो एक fibered confocal प्रतिदीप्ति videomicroscopy प्रणाली (Cellvizio, Maunakea प्रौद्योगिकी, पेरिस, फ?...

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In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

इस पत्र में, हम गतिशील विपरीत बढ़ाकर प्रतिदीप्ति videomicroscopy का उपयोग vivo में ट्यूमर microvessels का विश्लेषण करने के लिए एक तरीका मौजूद है. दो मात्रात्मक मापदंडों का अधिग्रहण किया गया: कार्यात्मक ट्यूमर की vascularity दर्शाती केशिका घनत्व, और endothelial दीवार की leakiness दर्शाती सूचकांक रिसाव.

प्रतिदीप्ति Confocal Videomicroscopy का उपयोग ट्यूमर angiogenesis के vivo इमेजिंग में

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

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Confocal ऑप्टिकल इमेजिंग द्वारा गुलाब बंगाल Photothrombosis<em&gt; Vivo</em&gt;: एक पोत स्ट्रोक का एक मॉडल

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...