Name: in vivo imaging of tumor angiogenesis using fluorescence confocal videomicroscopy
Uploaded: 2013-09-11T14:30:00
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1. 조영제의 제조 <ol><li> FITC-덱스 트란 70 kDa의 경우, 주사 투여 량은 500 ㎎ / ㎏ (FITC-덱스 트란 10 ㎎ 20 g의 무게 마우스에 생리 식염수 0.1 ㎖에 희석)입니다. </li><li> 에이전트는 빛에 너무 오래 노출되어서는 안된다. 표백을 방지하기 위해, 그것은 알루미늄 호일로 튜브를 포함하는 것이 좋습니다. </li></ol> 2. 마취 <ol><li> 마우스는 자일 라진의 1:4 혼합물의 복강 내 주사하여 마취...

<ol>
	<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamental+concepts+of+the+angiogenic+process.">Fundamental concepts of the angiogenic process.</a> Curr Mol Med. 3 (7), 643-651 (2003).</li><li>Laemmel, E., Genet, M., Le Goualher, G., Perchant, A., Le Gargasson, J. F., Vicaut, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibered+confocal+fluorescence+microscopy+(Cell-viZio)+facilitates+extended+imaging+in+the+field+of+microcirculation.+A+comparison+with+intravital+microscopy.">Fibered confocal fluorescence microscopy (Cell-viZio) facilitates extended imaging in the field of microcirculation. A comparison with intravital microscopy.</a> J Vasc Res. 41 (5), 400-411 (2004).</li><li>Charnley, N., Donaldson, S., Price, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+angiogenesis.">Imaging angiogenesis.</a> Methods Mol Biol. 467, 25-51 (2009).</li><li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Taillieu, F., Cuenod, C., Siauve, N., Clement, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+contrast+enhanced+optical+imaging+of+capillary+leakage.">Dynamic contrast enhanced optical imaging of capillary leakage.</a> Technol Cancer Res Treat. 10 (1), 49-57 (2011).</li><li>Kurose, I., Kubes, P., Wolf, R., Anderson, D. C., Paulson, J., Miyasaka, M., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+nitric+oxide+production.+Mechanisms+of+vascular+albumin+leakage.">Inhibition of nitric oxide production. Mechanisms of vascular albumin leakage.</a> Circ Res. 73 (1), 164-171 (1993).</li><li>Faye, N. F. L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macromolecular+capillary+leakage+is+involved+in+the+onset+of+anaphylactic+hypotension.">Macromolecular capillary leakage is involved in the onset of anaphylactic hypotension.</a> Anesthesiology. , (2012).</li><li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Macromolecular Capillary Leakage Is Involved in the Onset of Anaphylactic Hypotension. Anesthesiology. 117 (5), 1072-1079 (2012).</li><li>Tozer, G. M., Kanthou, C., Baguley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disrupting+tumour+blood+vessels.">Disrupting tumour blood vessels.</a> Nat Rev Cancer. 5 (6), 423-435 (2005).</li><li>Ntziachristos, V., Schellenberger, E. A., Ripoll, J., Yessayan, D., Graves, E., Bogdanov, A., Josephson, L., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+antitumor+treatment+by+means+of+fluorescence+molecular+tomography+with+an+annexin+V-Cy5.5+conjugate.">Visualization of antitumor treatment by means of fluorescence molecular tomography with an annexin V-Cy5.5 conjugate.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (33), 12294-12299 (2004).</li><li>Cuccia, D. J., Bevilacqua, F., Durkin, A. J., Merritt, S., Tromberg, B. J., Gulsen, G., Yu, H., Wang, J., Nalcioglu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+optical+contrast+agent+dynamics+in+rat+tumors+by+use+of+diffuse+optical+spectroscopy+with+magnetic+resonance+imaging+coregistration.">In vivo quantification of optical contrast agent dynamics in rat tumors by use of diffuse optical spectroscopy with magnetic resonance imaging coregistration.</a> Appl Opt. 42 (16), 2940-2950 (2003).</li></ol>

종양 미세 혈관의 연구는 종양의 성장, 보급 및 치료 1에 대한 응답의 병태 생리를 이해하는데 필수가되고있다. 광학 영상은 형광 조영제를 이용하여 모세 혈관을 관찰 및 형태학 (기능 모세관 밀도) 및 기능 (인덱스 누설) 파라미터를 정량화하는 데 사용할 수있는 기술 중 하나이다. 우리는이 연구에 사용 된 형광 현미경 영상은 장점과 한계를 모두 가지고 있습니다. ...

혈관 신생은 기존 혈관으로부터 새로운 혈관의 형성을 포함하는 복잡한 과정 일이다. 동맥, 모세 혈관, 세정맥과 구성 조직의 미세 혈관의 병리학 적 변화는,, 암, 염증, 당뇨병과 같은 질병의 넓은 범위에 연루되어있다. 정량적 미세 혈관의 구조와 기능을 평가하는 방법을 개발하는 것이 필수적이다. 영상은 실시간 및 생체 내에서, 비 - 또는 마이크로 - 침습적 방식으로 미세 혈관의 연구를 가능하게하고, 동일 동물이 경시 반복 측정. 현재 동적 조영 증강 (DCE) 영상 (3)은 일반적으로 조직의 미세 혈관을 평가하는 데 사용됩니다. 동적 조영 증강 영상은 시간이 지남에 따라 정맥 주사 추적의 생체 분포를 따르는 기술이다. 이번 인수에서 정량적 매개 변수는 조직의 혈관 신생을 반영 추출 할 수 있습니다. DCE 영상대부분 CT, MRI 또는​​ 초음파로 사용되어왔다. 그러나 이러한 영상 기술은 특정 실험 장치의 사용과 그 이외의 해상도가 가장 자주 거시적 남아 있기 때문에, 미세 혈관의 직접적인 관찰을 허용하지 않는다. 이 논문에서, 우리는 fibered 촛점 videomicroscopy으로, 동적 조영 증강 광학 이미징을 사용하여 미세한 규모 및 생체 내에서 종양 혈관을 연구하기 위해 제안한다. 우리는 그 분자량 및 조직의 내피 세포의 특성을 연구 4에있어서, 간질로 내피 장벽을 통한 혈관 누수 또는 내에서만 남아 고분자 조영제 (FITC-덱스 트란) 사용. 이 누출 및 간질에 축적에 의해, 제대로 혈관을 서술하여 모두 미세 혈관 구조의 연구는, 모세 혈관 투과성을 허용했다.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Insulin serynge 
 Myjector 1ml 
 29G</td>
 <td>Terumo Europe </td>
 <td>BS-05M2913</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorescein isothiocyanate-dextran 70 kDa </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>01619HH</td>
 <td>100 mg/mL 
 diluted in saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fibered confocal videomicroscopy</td>
 <td>Cellvizio - MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calibration and Cleaning Kit for LEICAFCM1000</td>
 <td>Leica Microsystems</td>
 <td>LSU-488</td>
 <td>Store at 4 &deg;C</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Probe ProFlexTM Z</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mosaicing software</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vessel detection software</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

in vivo imaging of tumor angiogenesis using fluorescence confocal videomicroscopy

광섬유 번들 Fibered 공 초점 형광 생체 촬상 형광 공 초점 현미경과 같은 원리를 사용한다. 이 광섬유를 통해 원위치 요소에 형광을 자극 한 후 동일한 광섬유를 통해 방출 된 광자의 일부를 기록 할 수있다. 광원은 섬유 다발 내의 요소를 통해 여기 광을 전송하고 샘플을 통해 스캔과 같은, 화소에 의해 화상의 화소를 다시 레이저이다. 이것은 스캔이 전용 ​​이미지 프로세싱 소프트웨어와 조합함으로써, 매우 빠르고 같이, 12 프레임 / 초의 주파수 실시간 화상을 얻을 수있다. 우리는 공 초점 형광 videomicroscopy 장치를 이용하여 정량적으로 모세관 형태와 기능을 특성화하는 기술을 개발했다. 우리의 실험에서 첫 번째 단계는 모세관 네트워크를 시각화하는 종양의 사분면에서 5 초 영화를 기록하도록 하였다. 모든 영화는 (소프트웨어를 사용하여 처리 된 ImageCell, 선택 직경 (우리의 경우 10 ㎛)의 주위에 혈관의 자동 분할을 수행 마우나 케아 기술, 파리, 프랑스). 따라서, 우리는 전체 혈관 영역과 화상의 전체 영역 사이의 비율이다 &#39;기능적 모세관 밀도&#39;정량화 있었다. 이 파라미터는 보통 병리 도구를 사용하여 측정 된, 미세 혈관 밀도에 대한 대리 마커이었다. 두 번째 단계는 간질로 모세관 벽을 통해 고분자 조영제의 누출을 정량화하기 20 분에 걸쳐 종양의 영화를 기록하는 것이었다. 혈관 그 이상의 간질에서 신호 강도의 비를 측정함으로써, &#39;인덱스 누설&#39;모세관 투과성에 대한 대리 마커로서 작용 얻었다.

수집 된 데이터를 사용하여, 우리는 양적으로 미세 혈관을 반영하는 다른 매개 변수를 분석 할 수 있습니다. 우리는 공부 생체 fibered 공 초점 형광 videomicroscopy 시스템 (Cellvizio, Maunakea 기술, 파리, 프랑스 2), 고분자 형광 조영제 주입 후 형광 염료 - 덱스 트란 (사용 BALB-c 마우스에 이식 대장 종양의 말초 혈관 네트워크 70 kDa의 (시그마 - 알드리치 (Sigma-Aldrich) 생 ?...

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In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

이 논문에서는 동적 조영 증강 형광 videomicroscopy를 사용하여 생체 내에서 종양의 미세 혈관을 분석하는 방법을 제시한다. 두 정량적 파라미터를 획득 하였다 : 기능성 종양 혈관을 반영 모세관 밀도 및 내피 벽 leakiness 반사 인덱스 누설.

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