Name: in vivo imaging of tumor angiogenesis using fluorescence confocal videomicroscopy
Uploaded: 2013-09-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy at JoVE.com

En. Utarbeidelse av kontrastmiddel <ol><li> For FITC-dekstran 70 kDa, er dosen injisert 500 mg / kg (10 mg av FITC-dekstran fortynnet i 0,1 ml saltløsning for en mus som veier 20 g). </li><li> Midlet bør ikke utsettes for lenge for lys. For å unngå bleking, er det anbefalt å dekke røret med aluminiumsfolie. </li></ol> 2. Anestesi <ol><li> Mus ble bedøvd med en intraperitoneal injeksjon av en blanding av 01:04 av xylazin (Rompun 2%, Bayer, Puteaux, Frankrike) og ketamin (ketamin 500, Vi...

<ol>
	<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamental+concepts+of+the+angiogenic+process.">Fundamental concepts of the angiogenic process.</a> Curr Mol Med. 3 (7), 643-651 (2003).</li><li>Laemmel, E., Genet, M., Le Goualher, G., Perchant, A., Le Gargasson, J. F., Vicaut, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibered+confocal+fluorescence+microscopy+(Cell-viZio)+facilitates+extended+imaging+in+the+field+of+microcirculation.+A+comparison+with+intravital+microscopy.">Fibered confocal fluorescence microscopy (Cell-viZio) facilitates extended imaging in the field of microcirculation. A comparison with intravital microscopy.</a> J Vasc Res. 41 (5), 400-411 (2004).</li><li>Charnley, N., Donaldson, S., Price, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+angiogenesis.">Imaging angiogenesis.</a> Methods Mol Biol. 467, 25-51 (2009).</li><li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Taillieu, F., Cuenod, C., Siauve, N., Clement, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+contrast+enhanced+optical+imaging+of+capillary+leakage.">Dynamic contrast enhanced optical imaging of capillary leakage.</a> Technol Cancer Res Treat. 10 (1), 49-57 (2011).</li><li>Kurose, I., Kubes, P., Wolf, R., Anderson, D. C., Paulson, J., Miyasaka, M., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+nitric+oxide+production.+Mechanisms+of+vascular+albumin+leakage.">Inhibition of nitric oxide production. Mechanisms of vascular albumin leakage.</a> Circ Res. 73 (1), 164-171 (1993).</li><li>Faye, N. F. L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macromolecular+capillary+leakage+is+involved+in+the+onset+of+anaphylactic+hypotension.">Macromolecular capillary leakage is involved in the onset of anaphylactic hypotension.</a> Anesthesiology. , (2012).</li><li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Macromolecular Capillary Leakage Is Involved in the Onset of Anaphylactic Hypotension. Anesthesiology. 117 (5), 1072-1079 (2012).</li><li>Tozer, G. M., Kanthou, C., Baguley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disrupting+tumour+blood+vessels.">Disrupting tumour blood vessels.</a> Nat Rev Cancer. 5 (6), 423-435 (2005).</li><li>Ntziachristos, V., Schellenberger, E. A., Ripoll, J., Yessayan, D., Graves, E., Bogdanov, A., Josephson, L., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+antitumor+treatment+by+means+of+fluorescence+molecular+tomography+with+an+annexin+V-Cy5.5+conjugate.">Visualization of antitumor treatment by means of fluorescence molecular tomography with an annexin V-Cy5.5 conjugate.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (33), 12294-12299 (2004).</li><li>Cuccia, D. J., Bevilacqua, F., Durkin, A. J., Merritt, S., Tromberg, B. J., Gulsen, G., Yu, H., Wang, J., Nalcioglu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+optical+contrast+agent+dynamics+in+rat+tumors+by+use+of+diffuse+optical+spectroscopy+with+magnetic+resonance+imaging+coregistration.">In vivo quantification of optical contrast agent dynamics in rat tumors by use of diffuse optical spectroscopy with magnetic resonance imaging coregistration.</a> Appl Opt. 42 (16), 2940-2950 (2003).</li></ol>

Studiet av svulst mikrosirkulasjonen har blitt viktig i forståelsen av patofysiologien av tumorvekst, formidling og respons på behandling en. Optisk avbildning er en av teknikkene som kan anvendes til å observere kapillarene ved hjelp av en fluoriserende kontrastmiddel og for å kvantifisere morfologisk (Functional Capillary Density) og funksjonelle (index lekkasje) parametere. Fluorescens mikroskopi bildebehandling vi brukt i denne studien har både fordeler og begrensninger. ...

Angiogenese er en kompleks prosess som involverer en dannelse av nye blodkar fra pre-eksisterende fartøyer. Patologiske endringer i mikrosirkulasjon vev, bestående av arterioler, kapillærer og venules, er innblandet i et stort utvalg av sykdommer så som kreft, inflammasjon, eller diabetes. Det er derfor viktig å utvikle metoder for å kvantitativt vurdere microvessel struktur og funksjon. Imaging muliggjør studium av microvessels i et ikke-eller mikro-invasiv måte, i sanntid, og in vivo, og repeterte målinger over tid i samme dyr 2.. Foreløpig er dynamisk kontrastforsterket (DCE) avbildning 3 vanligvis brukes til å vurdere vev mikrosirkulasjonen. Dynamisk kontrastforsterket avbildning er en teknikk som følger over tid på biodistribusjonen av en tracer injiseres intravenøst. Fra dette oppkjøpet, kan kvantitative parametre hentes ut reflekterende vev vascularization. DCE bildebehandlinghar blitt oftest brukes med CT, MR eller ultralyd. Men disse avbildningsteknikker ikke tillater direkte visning av microvessels, siden deres oppløsning, annet enn ved bruk av spesifikke eksperimentelle enheter, forblir oftest makroskopisk. I denne artikkelen foreslår vi å studere tumor blodkar på mikroskopisk skala og in vivo ved hjelp av dynamisk kontrast forbedret optisk bildebehandling, med fibered confocal videomicroscopy. Vi brukte et makromolekylært kontrastmiddel (FITC-dekstran) som forblir utelukkende innenfor fartøy eller lekkasjer gjennom endoteliale barrierer i interstitium, i henhold til molekylvekten og egenskapene til endotelet av vev undersøkt 4.. Dette tillot studiet av både microvessel struktur, ved riktig opptegning fartøy, og kapillær permeabilitet, ved lekker og akkumuleres i interstitium.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Insulin serynge 
 Myjector 1ml 
 29G</td>
 <td>Terumo Europe </td>
 <td>BS-05M2913</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorescein isothiocyanate-dextran 70 kDa </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>01619HH</td>
 <td>100 mg/mL 
 diluted in saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fibered confocal videomicroscopy</td>
 <td>Cellvizio - MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calibration and Cleaning Kit for LEICAFCM1000</td>
 <td>Leica Microsystems</td>
 <td>LSU-488</td>
 <td>Store at 4 &deg;C</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Probe ProFlexTM Z</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mosaicing software</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vessel detection software</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

in vivo imaging of tumor angiogenesis using fluorescence confocal videomicroscopy

Fibered konfokal fluorescens in vivo imaging med en fiberoptisk bunt er det samme prinsippet som fluorescerende konfokal mikroskopi. Det kan eksitere fluorescerende in situ elementene gjennom de optiske fibre, og så ta opp noen av de utsendte fotoner, via de samme optiske fiber. Lyskilden er en laser som sender ekssitering av lys gjennom et element inne i fiberbunten, og som skanner over prøven, gjenskaper et bilde piksel for piksel. Som denne skanningen er veldig fort, ved å kombinere den med dedikert programvare for bildebehandling, kan bilder i sanntid med en frekvens på 12 bilder / sek oppnås. Vi utviklet en teknikk for å kvantitativt karakter kapillær morfologi og funksjon, ved hjelp av en confocal fluorescens videomicroscopy enhet. Det første trinnet i eksperimentet vårt var å spille inn 5 sek filmer i de fire kvadrantene av svulsten for å visualisere kapillær nettverk. Alle filmene ble behandlet ved hjelp av programvare (jegmageCell, Mauna Kea Technology, Paris Frankrike) som utfører en automatisk segmentering av fartøyer rundt en valgt diameter (10 mikrometer i vårt tilfelle). Dermed kan vi kvantifisere &quot;funksjonelle kapillære tetthet&quot;, som er forholdet mellom det totale fartøy området og det totale areal av bildet. Denne parameteren var en surrogatmarkør for mikrovaskulær tetthet, vanligvis målt ved hjelp av patologi verktøy. Det andre trinn var å ta opp film av svulsten løpet av 20 min for å kvantifisere lekkasje av det makromolekylære kontrastmiddel gjennom kapillære vegg inn i interstitium. Ved å måle forholdet mellom signalintensitet i interstitium over det i skipene, ble en &#39;index lekkasje&#39; innhentet, fungerer som en surrogatmarkør for kapillær permeabilitet.

Ved hjelp av data samlet inn, kunne vi kvantitativt analysere ulike parametre som reflekterer mikrosirkulasjonen. Vi har studert in vivo på perifere vaskulære nettverk av et kolon tumor implantert i balb-c mus ved hjelp av en fibered confocal fluorescens videomicroscopy system (Cellvizio, Maunakea Technology, Paris, Frankrike 2), etter injeksjon av et makromolekylært fluorescerende kontrastmiddel Fluorescein isotiocyanat-dekstran ( FITC-dekstran) med en molekylvekt på...

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy at JoVE.com

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

I denne artikkelen presenterer vi en metode for å analysere kreft microvessels in vivo ved hjelp av dynamisk kontrast forbedret fluorescens videomicroscopy. To kvantitative parametre ble kjøpt: funksjonell kapillærtetthet reflekterer vaskulariteten av svulsten, og indeksen lekkasje reflekterer leakiness av endothelial veggen.

In vivo avbildning av tumor angiogenese med fluoresens Confocal Videomicroscopy

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

In vivo Near Infrared Fluorescence NIRF Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intrakraniell Implantasjon og<em&gt; In vivo</em&gt; Bioluminescent Imaging av tumorxenotransplantater i en mus modell System of glioblastoma multiforme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

Multi-modal Imaging av angiogenese i en Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastase Bruke Magnetic Resonance Imaging, Volumetrisk computertomografi og ultralyd

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel Høy oppløsning<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging teknikk for å studere den dynamiske respons Intrakraniale Structures til tumorvekst og Therapeutics

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19 F MR for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

I Vivo Optisk Imaging av hjernesvulster og leddgikt Bruke Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validering av Nanobody og antistoff Based<em&gt; I Vivo</em&gt; Tumor Xenotransplantat NIRF-bildebehandling Eksperimenter i Mus Bruke<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Flowcytometrisystemer og Mikros

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

In vivo Dynamics of Netthinne mikrogliaceller Aktivering Under Nevrodegenerasjon: Confocal oftalmoskopiske Imaging og Cell morfometri i Mouse Glaukom

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with ...

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

Rose Bengal Photothrombosis av Confocal Optical Imaging<em&gt; I Vivo</em&gt;: En modell av enkelt Vessel Stroke

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...