Name: in vivo imaging of tumor angiogenesis using fluorescence confocal videomicroscopy
Uploaded: 2013-09-11T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy at JoVE.com

1.. Kontrast maddenin hazırlanması <ol><li> FITC-dekstran 70 kDa için enjekte edilen doz, 500 mg / kg (FITC-dekstran 10 mg 20 gr ağırlığında bir fare için 0.1 ml tuzlu su içinde seyreltilmiş) &#39;dir. </li><li> Madde ışığa uzun süre maruz olmamalıdır. Ağartma önlemek için, alüminyum folyo ile tüp karşılamak için tavsiye edilir. </li></ol> 2. Anestezi <ol><li> Fareler ksilazin 01:04 karışımından bir intraperitoneal enjeksiyon ile anestezi edilmiştir (Rompun% 2, ...

<ol>
	<li>Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamental+concepts+of+the+angiogenic+process.">Fundamental concepts of the angiogenic process.</a> Curr Mol Med. 3 (7), 643-651 (2003).</li><li>Laemmel, E., Genet, M., Le Goualher, G., Perchant, A., Le Gargasson, J. F., Vicaut, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibered+confocal+fluorescence+microscopy+(Cell-viZio)+facilitates+extended+imaging+in+the+field+of+microcirculation.+A+comparison+with+intravital+microscopy.">Fibered confocal fluorescence microscopy (Cell-viZio) facilitates extended imaging in the field of microcirculation. A comparison with intravital microscopy.</a> J Vasc Res. 41 (5), 400-411 (2004).</li><li>Charnley, N., Donaldson, S., Price, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+angiogenesis.">Imaging angiogenesis.</a> Methods Mol Biol. 467, 25-51 (2009).</li><li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Taillieu, F., Cuenod, C., Siauve, N., Clement, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+contrast+enhanced+optical+imaging+of+capillary+leakage.">Dynamic contrast enhanced optical imaging of capillary leakage.</a> Technol Cancer Res Treat. 10 (1), 49-57 (2011).</li><li>Kurose, I., Kubes, P., Wolf, R., Anderson, D. C., Paulson, J., Miyasaka, M., Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+nitric+oxide+production.+Mechanisms+of+vascular+albumin+leakage.">Inhibition of nitric oxide production. Mechanisms of vascular albumin leakage.</a> Circ Res. 73 (1), 164-171 (1993).</li><li>Faye, N. F. L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macromolecular+capillary+leakage+is+involved+in+the+onset+of+anaphylactic+hypotension.">Macromolecular capillary leakage is involved in the onset of anaphylactic hypotension.</a> Anesthesiology. , (2012).</li><li>Faye, N., Fournier, L., Balvay, D., Thiam, R., Orliaguet, G., Clement, O., Dewachter, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Macromolecular Capillary Leakage Is Involved in the Onset of Anaphylactic Hypotension. Anesthesiology. 117 (5), 1072-1079 (2012).</li><li>Tozer, G. M., Kanthou, C., Baguley, B. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disrupting+tumour+blood+vessels.">Disrupting tumour blood vessels.</a> Nat Rev Cancer. 5 (6), 423-435 (2005).</li><li>Ntziachristos, V., Schellenberger, E. A., Ripoll, J., Yessayan, D., Graves, E., Bogdanov, A., Josephson, L., Weissleder, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+antitumor+treatment+by+means+of+fluorescence+molecular+tomography+with+an+annexin+V-Cy5.5+conjugate.">Visualization of antitumor treatment by means of fluorescence molecular tomography with an annexin V-Cy5.5 conjugate.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 101 (33), 12294-12299 (2004).</li><li>Cuccia, D. J., Bevilacqua, F., Durkin, A. J., Merritt, S., Tromberg, B. J., Gulsen, G., Yu, H., Wang, J., Nalcioglu, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+quantification+of+optical+contrast+agent+dynamics+in+rat+tumors+by+use+of+diffuse+optical+spectroscopy+with+magnetic+resonance+imaging+coregistration.">In vivo quantification of optical contrast agent dynamics in rat tumors by use of diffuse optical spectroscopy with magnetic resonance imaging coregistration.</a> Appl Opt. 42 (16), 2940-2950 (2003).</li></ol>

Tümör mikrodolaşımında çalışma tümör büyümesi, yayılması ve tedaviye 1 yanıtı hastalık patofizyolojisi gerekli hale gelmiştir. Optik görüntüleme bir fluoresan kontrast maddesi kullanılarak kılcal gözlemlemek ve morfolojik (Fonksiyonel Kılcal Yoğunluk) ve fonksiyonel (index kaçak) parametrelerini ölçmek için kullanılabilir tekniklerden biridir. Bu çalışmada kullanılan floresan mikroskobu görüntüleme avantajları ve sınırları hem de vardır. ...

Anjiyojenez, önceden mevcut damarlardan yeni kan damarlarının oluşumunu içeren karmaşık bir süreçtir 1&#39;dir. Arteryollerin, kılcal damarların ve venüllerin oluşan doku mikro patolojik değişiklikler, örneğin kanser, iltihap ya da diyabet gibi hastalıkların geniş bir ürün yelpazesi söz konusu olmaktadır. Bu kantitatif Mikrodamar yapısını ve fonksiyonunu değerlendirmek için yöntemler geliştirmek elzemdir. Görüntüleme gerçek zamanlı olarak ve in vivo olarak, bir non-veya mikro-invasif bir şekilde, mikrokapların çalışma sağlar ve aynı hayvanda 2 zamanla tekrar ölçer. Şu anda, dinamik kontrastlı (DCE) görüntüleme 3 yaygın doku mikrodolaşımı değerlendirmek için kullanılır. Dinamik kontrastlı görüntüleme zaman içinde intravenöz olarak enjekte edilen bir izleyici bir biyo dağılıma takip eden bir tekniktir. Bu alım, niceliksel parametreler doku kanlanmalı yansıtan elde edilebilir. DCE görüntülemeçoğu zaman CT, MRI veya ultrason ile kullanılmıştır. Bununla birlikte, bu görüntüleme teknikleri, özel deneysel cihazların kullanımı ile dışında kendi çözünürlük, en sık makroskopik kaldığı için, mikrokapların doğrudan görüntüleme izin vermez. Bu yazıda, fibered konfokal videomikroskopi ile, dinamik kontrastlı optik görüntüleme kullanarak mikroskopik ölçekte ve in vivo tümör damarsal çalışma öneriyoruz. Biz, molekül ağırlığı ve doku endotel özellikleri incelenmiştir 4 göre, interstisyuma endotel bariyerini damarlar ya da sızıntı içinde özel olarak kalan bir makromoleküler bir kontrast madde (FITC-dekstran) kullanılır. Bu sızıntı ve interstisyumda biriktirerek, doğru damarları çizen hem mikrovasküler yapı çalışması, ve kılcal geçirgenliği sağladı.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalogue number</td>
 <td>Comments (optional)</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Insulin serynge 
 Myjector 1ml 
 29G</td>
 <td>Terumo Europe </td>
 <td>BS-05M2913</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fluorescein isothiocyanate-dextran 70 kDa </td>
 <td>Sigma-Aldrich</td>
 <td>01619HH</td>
 <td>100 mg/mL 
 diluted in saline</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fibered confocal videomicroscopy</td>
 <td>Cellvizio - MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calibration and Cleaning Kit for LEICAFCM1000</td>
 <td>Leica Microsystems</td>
 <td>LSU-488</td>
 <td>Store at 4 &deg;C</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Probe ProFlexTM Z</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mosaicing software</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vessel detection software</td>
 <td>MaunaKea Technologies</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

in vivo imaging of tumor angiogenesis using fluorescence confocal videomicroscopy

Bir fiber optik demeti ile fibered konfokal floresan in vivo görüntüleme floresan konfokal mikroskopi gibi aynı prensibi kullanır. Bu, optik fiberlerin yoluyla in situ elemanlarında floresan heyecan ve daha sonra aynı fiber optik üzerinden, fotonların bir kaydedebilir. Işık kaynağı, elyaf demeti içinde bir öğe aracılığıyla verici ışık gönderir ve bu örnek üzerinde tarar, piksel, bir görüntü piksel yeniden bir lazerdir. Bu tarama özel bir görüntü işleme yazılımı ile birleştirerek, çok hızlı olduğu için, 12 kare / sn &#39;lik bir frekans ile gerçek zamanlı görüntüleri elde edilebilir. Biz bir konfokal floresan videomikroskopi cihazı kullanılarak, kantitatif kılcal morfolojisi ve fonksiyonunu karakterize etmek için bir teknik geliştirdi. Bizim deneyde ilk adım kılcal ağ görselleştirmek için tümörün dört kadranda 5 sn film kaydetmek oldu. Tüm filmleri (yazılım kullanarak işlendi ImageCell, seçilmiş çapı (bizim durumumuzda 10 mikron) etrafında gemilerin otomatik segmentasyon gerçekleştiren Mauna Kea Teknoloji, Paris Fransa). Böylece, toplam damar alanı ve görüntü toplam alanı arasındaki oran fonksiyonel kılcal yoğunluk &#39;ölçmek olabilir. Bu parametre genellikle patoloji araçlarını kullanarak ölçülen mikrovasküler yoğunluk için bir vekil belirtecidir. İkinci adım interstisyuma kılcal duvarından makromoleküler kontrast madde sızmasını ölçmek için 20 dakika boyunca tümörün film kaydetmek için oldu. Damarlarda bu fazla interstisyumda sinyal yoğunluğu oranının ölçülmesi ile, bir &quot;göstergesi kaçak &#39;kılcal geçirgenliği için bir belirteç olarak hareket eden, elde edildi.

Toplanan veriler kullanılarak, kantitatif Mikrodolaşımı yansıtan farklı parametreleri analiz edebilirsiniz. Biz çalışılan in vivo bir lifli konfokal videomikroskopi floresan sistemi (Cellvizio, Maunakea Technology, Paris, Fransa 2), bir makromoleküler fluoresan kontrast madde enjekte edildikten sonra floresein izotiosiyanat-dekstran kullanarak (Balb-c farelere implante bir kolon tümör periferik vasküler ağ 70 kDa (Sigma-Aldrich, Saint-Quentin Fallavier, Fra...

Watch this Scientific Journal Video about In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy at JoVE.com

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

Bu yazıda, dinamik kontrastlı floresan videomikroskopi kullanarak in vivo tümör mikrodamarlar analiz etmek için bir yöntem mevcut. İki sayısal parametreler elde edilmiştir: işlevsel tümörün damarlanma yansıtan kılcal yoğunluk ve endotel duvarın bir sızıntının yansıtma indeksi sızıntı.

Flüoresans Konfokal videomikroskopi kullanılarak tümör Angiogenesis İn vivo

Fibered confocal fluorescence in vivo imaging with a fiber optic bundle uses the same principle as fluorescent confocal microscopy. It can excite ...

Research

JoVE Journal

Medicine

In vivo Imaging of Tumor Angiogenesis using Fluorescence Confocal Videomicroscopy

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

In vivo Near Infrared Fluorescence NIRF Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

İnflamatuar Plak Kızılötesi Floresans (NIRF) İntravasküler Moleküler Görüntüleme, Multimodal Yaklaşım civarında in vivo Ateroskleroz Görüntüleme

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

Meme Kanseri Beyin metastaz tümör Hipoksi Dynamics in vivo Biyoparlaklık Görüntüleme Fare Modeli

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotactic Intracranial Implantation and In vivo Bioluminescent Imaging of Tumor Xenografts in a Mouse Model System of Glioblastoma Multiforme

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Glioblastoma multiforme (GBM) is a high-grade primary brain cancer with a median survival of only 14.6 months in humans despite standard tri-modality ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

Manyetik Rezonans Görüntüleme, Volumetrik Bilgisayarlı Tomografi ve Ultrason Kullanımı Meme Kanseri Kemik metastazı bir Nude Rat Model Angiogenezis Multi-modal Görüntüleme

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü<em&gt; In vivo</emTümör Büyüme ve Tedavi için İntrakranial Yapıların Dinamik Tepki Eğitim&gt; Görüntüleme Tekniği

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

Floresan SapC-DOPS Nanovesicles kullanma Beyin Tümörleri ve Artrit Vivo Optik Görüntüleme

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Validation of Nanobody and Antibody Based In Vivo Tumor Xenograft NIRF-imaging Experiments in Mice Using Ex Vivo Flow Cytometry and Microscopy

Nanobody ve Antikor Temelli Doğrulama<em&gt; İn Vivo</emFarelerde&gt; Tümör Xenograftlarında NIRF-görüntüleme Deneyler kullanma<em&gt; Ex vivo</em&gt; Sitometrisi ve Mikroskopi

This protocol outlines the steps required to perform ex vivo validation of in vivo near-infrared fluorescence (NIRF) xenograft imaging experiments in mice ...

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

In Vivo Dynamics of Retinal Microglial Activation During Neurodegeneration: Confocal Ophthalmoscopic Imaging and Cell Morphometry in Mouse Glaucoma

Fare Glokomda Konfokal Oftalmoskopik Görüntüleme ve Hücre morfometrisi: Nörodejenerasyonda sırasında Retina Mikroglial Aktivasyonu Vivo Dynamics

Microglia, which are CNS-resident neuroimmune cells, transform their morphology and size in response to CNS damage, switching to an activated state with ...

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo: A Model of Single Vessel Stroke

Rose Bengal Photothrombosis by Confocal Optical Imaging In Vivo:  A Model of Single Vessel Stroke

Konfokal Optik Görüntüleme ile Rose Bengal Fototromboz<em&gt; In Vivo</em&gt;: Tek Gemi İnme Bir Model

In vivo imaging techniques have increased in utilization due to recent advances in imaging dyes and optical technologies, allowing for the ability to ...