Name: high-throughput, automated extraction of dna and rna from clinical samples using trutip technology on common liquid handling robots
Uploaded: 2013-06-11T13:00:00
Duration: 10 min 47 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-throughput, Automated Extraction of DNA and RNA from Clinical Samples using TruTip Technology on Common Liquid Handling Robots at JoVE.com

وقدم الدعم لأجزاء من هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) تحت منحة R 44 AI072784. نشكر الدكتور كيرستن سانت جورج، سارة B. Griesemer، داريل امسون وايمي عميد مختبر للأمراض الفيروسية، مركز وادز ورث، جديد قسم الصحة لولاية نيويورك لvirions إنفلونزا كميا والوصول إلى التحقق من صحة سريريا الأنفلونزا في الوقت الحقيقي المقايسات PCR.

<ol>
	<li>Boom, R., Sol, C. J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+simple+method+for+purification+of+nucleic+acids.">Rapid and simple method for purification of nucleic acids.</a> J. Clin. Microbiol. 28, 495-503 (1990).</li><li>Baker, M. P., Mitchell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+genomic+DNA+from+blood+using+a+novel+filter-based+DNA+purification+technology.">Isolation of genomic DNA from blood using a novel filter-based DNA purification technology.</a> BioTechniques. 31, 142-145 (2001).</li><li>Sinclair, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+bead+or+not+to+bead:+applications+of+magnetic+bead+technology.">To bead or not to bead: applications of magnetic bead technology.</a> The Scientist. 12, 17-24 (1998).</li><li>Dederich, D. A., Okwuonu, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glass+bead+purification+of+plasmid+template+DNA+for+high+throughput+sequencing+of+mammalian+genomes.">Glass bead purification of plasmid template DNA for high throughput sequencing of mammalian genomes.</a> Nucl. Acids Res. 30, e32 (2002).</li><li>Levison, P. R., Badger, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+developments+of+magnetic+beads+for+use+in+nucleic+acid+purification.">Recent developments of magnetic beads for use in nucleic acid purification.</a> J. Chromatogr. A. 816, 107-111 (1998).</li><li>Hourfar, M. K., Schmidt, M., Seifried, E., Roth, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+an+automated+high-volume+extraction+method+for+viral+nucleic+acids+in+comparison+to+a+manual+procedure+with+preceding+enrichment.">Evaluation of an automated high-volume extraction method for viral nucleic acids in comparison to a manual procedure with preceding enrichment.</a> Vox Sang. 89, 71-76 (2005).</li><li>Perelle, S., Cavellini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+robotic+RNA+purification+protocol+based+on+the+NucliSens+easyMAG+for+real-time+RT-PCR+detection+of+hepatitis+A+virus+in+bottled+water.">Use of a robotic RNA purification protocol based on the NucliSens easyMAG for real-time RT-PCR detection of hepatitis A virus in bottled water.</a> J. Virol. Methods. 157, 80-83 (2009).</li><li>Riemann, K., Adamzik, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+manual+and+automated+nucleic+acid+extraction+from+whole-blood+samples.">Comparison of manual and automated nucleic acid extraction from whole-blood samples.</a> J. Clin. Lab. Anal. 21, 244-248 (2007).</li><li>Hukari, K. W., Shultz, M., Isely, N., Milson, R., West, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+completely+automated+sample+preparation+instrument+and+consumable+device+for+isolation+and+purification+of+nucleic+acids.">A completely automated sample preparation instrument and consumable device for isolation and purification of nucleic acids.</a> J. Lab. Autom. 16, 355-365 (2011).</li><li>Kessler, H., M&#252;hlbauer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+nucleic+acid+extraction.">Fully automated nucleic acid extraction.</a> MagNA Pure LC. Clin. Chem. 47, 1124-1126 (2001).</li><li>Miller, S., Seet, H., Khan, Y., Wright, C., Nadarajah, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+QIAGEN+automated+nucleic+acid+extraction+methods+for+CMV+quantitative+PCR+testing.">Comparison of QIAGEN automated nucleic acid extraction methods for CMV quantitative PCR testing.</a> Am. J. Clin. Pathol. 133, 558-563 (2010).</li><li>Dundas, N., Leos, N. K., Mitui, M., Revell, P., Rogers, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+automated+nucleic+acid+extraction+methods+with+manual+extraction.">Comparison of automated nucleic acid extraction methods with manual extraction.</a> J. Mol. Diagn. 10, 311-316 (2008).</li><li>Kruh&#248;ffer, M., Voss, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+the+QIAsymphony+SP+workstation+for+magnetic+particle-based+nucleic+acid+purification+from+different+sample+types+for+demanding+downstream+applications.">Evaluation of the QIAsymphony SP workstation for magnetic particle-based nucleic acid purification from different sample types for demanding downstream applications.</a> J. Lab. Autom. 15, 41-51 (2010).</li><li>Belgrader, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apparatus,+system,+and+method+for+purifying+nucleic+acids.">Apparatus, system, and method for purifying nucleic acids.</a> United States Patent. , (2010).</li><li>Chandler, D. P., Griesemer, S. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid,+simple+influenza+RNA+extraction+from+nasopharyngeal+samples.">Rapid, simple influenza RNA extraction from nasopharyngeal samples.</a> J. Virol. Methods. 183, 8-13 (2012).</li><li>Chan, K. H., Lai, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytical+sensitivity+of+rapid+influenza+antigen+detection+tests+for+swine-origin+influenza+virus+(H1N1).">Analytical sensitivity of rapid influenza antigen detection tests for swine-origin influenza virus (H1N1).</a> J. Clin. Virol. 45, 205-207 (2009).</li><li>Chan, K. H., Lama, S. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analytical+sensitivities+of+six+rapid+influenza+A+antigen+detection+test+kits+for+detection+of+influenza+A.">Comparative analytical sensitivities of six rapid influenza A antigen detection test kits for detection of influenza A.</a> subtypes H1N1, H3N2 and. 38, 169-171 (2007).</li><li>Fan, H. C., Blumenfeld, Y. J., Chitkara, U., Hudgins, L., Quake, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+diagnosis+of+fetal+aneuploidy+by+shotgun+sequencing+DNA+from+maternal+blood.">Noninvasive diagnosis of fetal aneuploidy by shotgun sequencing DNA from maternal blood.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, 16266-16271 (2008).</li></ol>

والكتاب والعاملين في Akonni النظم البيولوجية، وشركة الذين ينتجون المواد المستخدمة في هذه المقالة. وترعى حرية الوصول والإنتاج من هذه المادة بواسطة Akonni النظم البيولوجية، وشركة

بساطة مفهوم TruTip وسير العمل (الشكل 1) جعلها تتكيف بسهولة، الآلي، وكفاءة وفعالية بالنسبة لعدد من المصفوفات السريرية العينة، حجم العينة المدخلات، ونظم مناولة السائل. وينبغي الاعتراف، مع ذلك، أن كل عينة سريرية هي فريدة من نوعها، وسوف تختلف واحدة إلى أخرى في اللزوجة، والجسيمات، والمخاط، والملوثات السطحية، الميكروبية، و / أو الخلفيات الوراثية البشرية. نظرا الاختلافات المتوقعة في تكوين العينة السريرية والاستخدامات المقصودة من بروتوكول إعداد عينة TruTip الآلي، وبالتالي قد يكون من الضروري تعديل بعض الخطوات في إجراء TruTip من أجل تحقيق النتائج المرجوة لنوع عينة محددة. بغض النظر عن نوع العينة، ومع ذلك، المعلمات TruTip التي عادة ما يكون لها الأثر الأكبر على نقاء الحمض النووي و / أو استرداد ما يلي: <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> عينة الاختلاط والتجانس مع العازلة تحلل (والكحول). بينما TruTips ديك إعادةحجم المسام الكبيرة latively، تجانس العينة وتسييل الغاز الطبيعي مهم جدا لكفاءة تحلل الخلية، والخطوات اللاحقة ملزمة لTruTip متراصة. مع المحللة متجانسة وجيدة المسال، يمكن أن العينات التحرك من خلال TruTip مع معدلات التدفق العالي، مما يقلل من الوقت الكلي تجهيز العينات. كبير حجم البلازما بروتوكول يدل على إمكانات للمستخدمين لالتجانس بدقة وتسييل عينات من الصعب (على الخط أو خارج الخط)، على الرغم من حجم العينة مساهمة كبيرة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> معدلات التدفق. معدلات التدفق أبطأ خلال ملزم الحمض النووي أو شطف يؤدي عادة إلى ارتفاع غلة الحمض النووي، وإن كان ذلك على حساب مجموع وقت المعالجة. قد معدلات التدفق أبطأ أيضا أن يقلل من مدى قص الحمض النووي. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أرقام دورة. العدد الأمثل من الطموح والاستغناء دورات تعتمد على نوع العينة، ومجموع حجم العينة، ومعدلات التدفق. الخطوة 1 في الشكل رقم 1 هو عادة النقطة التي numbe دورةRS (ومعدلات التدفق) قد تتطلب بعض التحسين التجريبية، مع عينات مثل نضح البلعوم (الشكل 5) التي تمثل واحدة من أكثر تحديا لست] لتحسين ويرجع ذلك إلى مجموعة من اللزوجة NPA من مختلف المرضى. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجفيف. التجفيف الكامل للTruTip متراصة لا بد من منع المذيبات العضوية المتبقية من زملاء يبلغ حجمه مع تنقيته عينة الحمض النووي وعمليات المصب تثبيط أو الاختبارات. لأنه لم يتم تجفيفها TruTip عن طريق الطرد المركزي أو الترشيح فراغ، فمن المهم لزيادة كل من معدل تدفق وأرقام دورة خلال خطوة التجفيف. أحيانا هناك قطيرة المتبقية من محلول الغسيل على محطة من TruTip بعد الانتهاء من دورات التجفيف. هاميلتون الروبوت لديه القدرة على تنفيذ عملية &quot;لمسة طرف&quot; على جانب البئر للافراج عن قطرة، وبالتالي ضمان شطف الخالية من المذيبات. لا يملك النظام epMotion هذه الميزة، ولكن قبل شطف من محطة TruTip في مدرسةيمكن برمجتها العازلة ution لتحقيق التأثير نفسه. </li></ol> لأن الهندسة، المواد ماصة الحافة، وطريقة التعلق أحضان قناة الروبوتية هي فريدة من نوعها لكل مصنع صك، مطلوب بناء TruTip مختلفة لكل نظام مناولة السائل. أبعاد متراصة TruTip (قطر، سمك، وحجم المسام) لا ترتبط مع القدرة النووية ملزمة حمض (والكفاءة شطف)، كما هو متوقع لأي تقنية استخراج المرحلة الصلبة. بينما سميكة (&gt; 4 مم) المصفوفات قد تكون جزءا لا يتجزأ في TruTip 1 مل إلى زيادة قدرة الحمض النووي ملزم للحصول على عينات كبيرة الحجم و / أو تحقيق المساواة في قدرة ملزم عبر صيغ TruTip محددة، وهناك علاقة تبادلية بين سماكة TruTip ومعدلات التدفق خلال الخطوة الأولي ملزم (في وجود لست] الخام). وهكذا، فإنه في بعض الأحيان من المفيد تضمين كتل أكبر قطرها إلى أكبر حجم ونصائح ماصة للخطوات الأولية لبروتوكول الآلي، (على سبيل المثال &lt;/ EM&gt; في 5 مل هاميلتون / Akonni TruTips لقلع كبيرة الحجم). ونظرا للتكوينات TruTip محددة تمليها الشركات المصنعة من الروبوتات مناولة السائل، ومع ذلك، فإننا لا نتوقع بالضرورة TruTip غلة الحمض النووي لتكون مماثلة عبر منصات التعامل مع السائل من مصنعين مختلفين، أو عبر أحجام مختلفة TruTip. سوف العينات السريرية (حسب التعريف) تحتوي على كميات كبيرة من الحمض النووي الجيني الإنسان ما لم يتم الحصول عليها من مواقع العقيمة عادة (مثل السائل الشوكي الدماغي). أحيانا هو المطلوب الحمض النووي الجيني البشري (كما في الشكل 6)، في حين أنه في تطبيقات أخرى في الحمض النووي البشري يمثل خلفية الجيني غير المرغوب فيها (أما بالنسبة الشكل 5). وجود الحمض النووي الخلفية هي عادة ليست مشكلة طالما أن المبلغ الإجمالي للحامض النووي في العينة لا تتجاوز قدرة ملزم للمتراصة، والحمض النووي الخلفية يمكن أن تكون بمثابة الناقل إذا كان الهدف المنشود النوويحمض موجود في كميات ضئيلة. الهدف من ارتفاع حجم استخراج بروتوكول البلازما (الشكل 7) هو عزل (مجزأة) DNA الجنين في وجود فائض 10-20 أضعاف من الحمض النووي الأمهات، والذي يشبه إلى الهدف إعداد عينة من اختبارات الأمراض المعدية إلا أن تسلسل متطابقة للغاية ولا يمكن تمييزها عن طريق اختبار الجزيئي محددة للغاية و / أو التمييز الحجم. في هذه الحالة، يتم عزل الحمض النووي مجموع تعميم باستخدام 5 مل TruTip، والجزيئية العالية وانخفاض الوزن الجزيئي DNA الجنين اللاحقة يتم فصل من خلال اللاحقة ملزمة وشطف إلى مل TruTip 1 عن طريق تغيير الظروف العازلة ملزمة. انتقائية فصل حجم وإثراء الأحماض النووية المستهدفة على أساس ملزم وممتلكاتهم شطف إلى متراصة السيليكا هو وضع يختلف كثيرا من العمل من تحقيقه عن طريق الأغشية أو حجم الأعمدة تدور الاستبعاد. فصل حجم وإثراء الحمض النووي الميكروبي من الحمض النووي الجيني الإنسان قد يكونccomplished في التطبيقات المستقبلية عن طريق تخصيص ملزمة TruTip ومخازن شطف. أظهرت البروتوكولات الآلي هنا التأكيد على فائدة متراصة TruTip نفسها لتجهيز العينات السريرية متنوعة، وكيف يمكن تكييفها لكميات كبيرة ومحددة الروبوتات التعامل مع السائل. يؤدي أساليب مبسطة عادة في البروتوكولات استخراج أسرع مقارنة مع النظم الآلية الأخرى. بساطة التكنولوجيا TruTip، ومع ذلك، يتيح أيضا بعض المزايا من حيث التكلفة للراغبين في شراء، مؤتمتة نظام لتنقية حمض النووي الجديد، وذلك لأن الأجهزة الأساسية اللازمة لأتمتة إجراءات TruTip هي الذراع ماصة قناة نفسها بدلا من قضبان المغناطيسي، وأنظمة فراغ ، أو على متن جهاز طرد مركزي. يمكن استخدام لوحات كاشف معبأة سلفا أيضا تقليل مساحة والمواد الاستهلاكية المطلوبة، وضعف الإنتاجية في المدى. التقليل من مساحة سطح السفينة مع بروتوكولات TruTip يتيح أيضا للمستخدمين متقدمة لدمج المنبع أو دالعمليات المؤتمتة ownstream مع TruTip. على سبيل المثال حل easyBlood هاملتون إلى الدم الكامل يجزئ يمكن إدراجها مع طريقة استخراج الآلي TruTip، التي من شأنها تبسيط العمليات الحيوية بشكل كبير المصرفي. عمليات ما بعد الاستخراج مثل الكميات الحمض النووي، تطبيع، PCR انشاء، أو تسلسل الحمض النووي يتم أيضا دمجها بسهولة مع TruTip على منصات أكبر مناولة السائل.

تنقية الحمض النووي أمر ضروري لتشخيص معظم الجزيئية، واستخدام البحوث فقط، وتطبيقات علوم الحياة. ظهرت مناهج مختلفة منذ وقت الفينول / كلوروفورم الاستخراج، وتستند كثير منها على مبدأ أساسي من الحمض النووي ملزمة لالسيليكا في وجود الأملاح chaotropic 1. وقد كانت عملية استخراج المبسطة والآلية من خلال استخدام مختلف الأشكال وحبة التي تعتمد على الأغشية، مع مرشحات تدور، حبات مغناطيسية والمناهج ذات الصلة تهيمن على صناعة علوم الحياة (انظر الأمثلة في 2-13). في حين فعالة، والجسيمات والأغشية ويعرف القيود عندما واجه مع المصفوفات السريرية الصعبة. على سبيل المثال، الأغشية والأعمدة المستندة إلى حبة متوافقة، ذات أحجام مسام صغيرة (وبالتالي، والضغوط مرة أخرى عالية)، وتتطلب بعض نوع من الدعم من أجل أن تكون معالجتها بواسطة نظام الطرد المركزي أو فراغ. الخصائص الفيزيائية للأغشية والأعمدة حبة نتيجة فيالمقاومة فلويديك كبيرة، الأمر الذي يحد من نوع من العينات التي يمكن معالجتها بكفاءة دون انسداد الاستهلاكية، و / أو مجموع (المدخلات) حجم العينة التي يمكن معالجتها من خلال مسار تدفق أحادي إتجاهي. على العكس، يجب أن توزع جزيئات مغناطيسية في جميع أنحاء عينة من الانفعالات. الحاجة إلى توزيع متجانس الجزيئات المغناطيسية ضمن حل يحد من إجمالي حجم العينة المدخلات التي يمكن معالجتها مع معظم المواد الاستهلاكية حبة المغناطيسي. سمات عينة سريرية (مثل اللزوجة أو تعقيد) يمكن أن يؤدي إلى عدم كفاءة تركيز الجسيمات المغناطيسية على جانب أنبوب أو قضيب. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن الجسيمات الدقيقة السيليكا بقطع من الخرز أثناء عملية الاستخراج، وفقدان مغنطة وتلويث العينة النهائية. وقد تم تطوير هذه التكنولوجيا TruTip للتغلب على بعض هذه عينة الحمض النووي المعوقات والقيود تجهيز 14. عن طريق دمج متراصة مسامية داخلماصة، وخفضت فلويديك احداهما، والتي تمكن التحكم في التدفق من فراغ (أي ماصة الطموح). تمكن هذه الميزة عملية الاستخراج والأجهزة اللازمة لتنقية الأحماض النووية من أنواع عينة يصعب تبسيطها إلى حد كبير (الشكل 1). تم تصميم وهندسة والمسامية للمتراصة للحد من انسداد، في حين أن سمك متراصة توفر القدرة الكافية الحمض النووي ملزمة لحجم العينة تتراوح 1،0-5،0 مل. تدفق ثنائي الاتجاه خلال عينة الطموح والاستغناء يسمح لمرات الإقامة لفترات طويلة بين عينة استخراج ومتراصة ملزمة لكفاءة الانتعاش الحمض النووي وشطف، وتمكن أحجام عينة كبيرة نسبيا بحيث تتم معالجتها التي تتجاوز سعة وحدة التخزين من طرف ماصة نفسها. نحن ذكرت سابقا وضع وتطبيق إجراء TruTip دليل لتنقية الحمض النووي الريبي من عينات إنفلونزا البلعوم باستخدام راي واحد أو متعدد القنواتنين pipettor 15. تم الحصول على الكفاءات استخراج ما يعادل بين QIAcube الآلي وطرق TruTip دليل في 10 6 نسخ الجين إنفلونزا A لكل مل نضح البلعوم. وكان الهدف من هذه الدراسة إلى إثبات، الآلي النووي إجراءات متوسطة وعالية الإنتاجية TruTip حمض تنقية لنضح البلعوم (NPA) وغيرها من أنواع عينة ذات الصلة سريريا، وذلك باستخدام الروبوتات التعامل مع السائل التي توجد عادة في المختبرات السريرية المرجعية.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruTip Influenza Extraction Kit (EPM TruTips)</td>
			<td>Akonni Biosystems, Inc.</td>
			<td>300-11120</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% Ethanol</td>
			<td>Acros Organics/ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AC615110040</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>99% Acetone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270725-4L</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC-treated water</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>AM9906</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Reservoir, 30 ml</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>960050100</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep well plate 96/2,000 &mu;l</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>30502302</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epT.I.P.S. Motion Filtertips, 1,000 &mu;l</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>960050100</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>epMotion 5070 System</td>
			<td rowspan="3">Eppendorf</td>
			<td>5070 000.000</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispensing tool TM1000-8</td>
			<td>960001061</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reservoir rack</td>
			<td>960002148</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Table 1. Reagents and equipment for automated RNA extraction from NPA.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruTip gDNA Blood Extraction Kit (Hamilton TruTips)</td>
			<td>Akonni Biosystems, Inc.</td>
			<td>300-20341</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>95% ethanol</td>
			<td>Acros Organics/ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AC615110040</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>AMRESCO LLC</td>
			<td>E195</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Hamilton filtered CO-RE 96 tip rack</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>235905</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Hamilton non-filtered CO-RE 96 tip rack</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>235904</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Reagent Trough</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>187297</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deep Well 2 ml plate</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2800</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc 96 DWP-2 ml</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>27874</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent Trough</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-222-412</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton STAR System</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173027</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Independent Pipette Channels / Modular Arm</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173081/173050</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml 96-channel head</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>199090</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182085</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sample Carriers/Inserts</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173400/182238</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182090</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiflex Carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>188039</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HHS2 Heater Shaker Unit</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>199033</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack Carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>188047</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Table 2. Regents and equipment for 96-well genomic DNA extraction from whole blood.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Reagent/Material </td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TruTip R+D Circulating DNA Extraction Kit (Hamilton TruTips)</td>
			<td>Akonni Biosystems, Inc.</td>
			<td>Call to inquire</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>459828-1L</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Acros Organics/ThermoFisher Scientific</td>
			<td>AC327270010</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K</td>
			<td>AMRESCO LLC</td>
			<td>E195</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filtered 4 ml Tips</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>184022</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Unfiltered 1 ml Tips</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>235939</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-Deep Well Plates</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1896-2800</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Conical Tubes</td>
			<td>Corning/ThermoFisher Scientific</td>
			<td>05-526B</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Reagent Troughs</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>187297</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>120 ml Reagent Troughs</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182703</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Volume 96-Pos Reagent Troughs</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>14-222-412</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STARplus Autoload Workstation Base / Deck Module</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173025/190012</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 ml Independent Pipette Channels / Arm</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173081/173052</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 ml Independent Channel / Modular Arm</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>184090/173050</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plate Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182090</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiflex Carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>188039</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rack Carrier for 50 ml Reagent Troughs</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>188047</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>120 ml Reagent trough carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>185290</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tip Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182085</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 ml Tube Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>182245</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24 Position Sample Carriers</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173400</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>32 Position Sample Carrier</td>
			<td>Hamilton Robotics, Inc.</td>
			<td>173410</td>
			<td>&nbsp;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>&nbsp;</td>
			<td>Table 3. Reagents and equipment for large volume DNA extraction from plasma.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high-throughput, automated extraction of dna and rna from clinical samples using trutip technology on common liquid handling robots

TruTip هو بسيط الحمض النووي تكنولوجيا استخراج بموجبها يتم إدراج مسامية، مصفوفة ملزمة متجانسة في تلميح ماصة. الشكل الهندسي للمتراصة يمكن تكييفها للحصول على نصائح ماصة محددة تتراوح في الحجم 1،0-5،0 مل. المسامية كبيرة من متراصة تمكن العينات لزج أو معقدة لتمرير بسهولة من خلال ذلك مع الحد الأدنى من احداهما فلويديك. تدفق ثنائي الاتجاه يزيد من وقت الإقامة بين متراصة والعينة، وتمكن أحجام عينة كبيرة لتتم معالجتها ضمن TruTip واحد. الخطوات الأساسية، بغض النظر عن حجم العينة أو الهندسة TruTip، وتشمل تحلل الخلية، الحمض النووي ملزمة لالمسام الداخلية للTruTip متراصة، تجرف عينة مكونات غير منضم ومخازن تحلل، ويبلغ حجمه تنقية الأحماض النووية وتتركز في وجود مخزن مؤقت المناسبة. وأظهرت سمات والقدرة على التكيف من TruTip في ثلاثة بروتوكولات تجهيز العينات السريرية الآلي باستخدام epMotion إيبندورف 5070، هاميلتون نجم وSTARplus الروبوتات مناولة السائل، بما في ذلك عزل الحمض النووي الريبي من نضح البلعوم، والعزلة الحمض النووي الجيني من الدم الكامل، واستخراج الحمض النووي الجنيني والإثراء من كميات كبيرة من البلازما الأمهات (على التوالي).

وتظهر البيانات PCR الوقت الحقيقي للأنفلونزا استخراج الحمض النووي الريبي من NPA في الشكل 5A. يقدر الحمض النووي كفاءة الاستخراج مماثلة للنتائج التي تم الحصول عليها مع إصدار دليل من البروتوكول 15. ويلاحظ وجود استجابة خطية في متوسط ​​قيم C ر بين 10 و 10 4 6 نسخ الجين مل -1 المعدلة الأنفلونزا (R 2 = 0.99 و 0.98 لA الأنفلونزا وباء، على التوالي)، مع الانحرافات المعيارية في متوسط ​​C ر قيم أقل من 1 دورة. ويتجلى غياب التلوث المتبادل مع نظام epMotion في الشكل 5B، حيث كان يتخلل 12 عينة إيجابية NPA تحتوي على 10 مل 6 نسخ الجين -1 NPA مع 12 الفراغات العازلة. متوسط ​​C T لعناصر إيجابية كان 30.16 ± 0.14، وكانت جميع الفراغات العازلة سلبية. مجموع عينة زمن هو 16 و 28 و 40 دقيقة لمدة 8 و 16 و 24 عينات، على التوالي.لأن نضح البلعوم السريرية النموذجية أو مسحة سوف تحتوي على 10 7 الجين نسخ مل -1 (على افتراض 1،000 virions في TCID 50 16 و&gt; 10 4 TCID 50 مل -1 إنفلونزا 17)، ومن المتوقع أن تكون فعالة على أغلبية بروتوكول epMotion الآلي من العينات السريرية NPA. وبالنظر إلى مجموعة من الاختبارات الجزيئية التي أجريت على الحمض النووي الجيني البشري، والهدف الأساسي من استخراج الحمض النووي من الدم الكامل هو إنتاج خالية من الملوثات، وارتفاع الوزن الجزيئي الحمض النووي الجيني. اكتمال بروتوكول الآلي لمدة 96 العينات في غضون 1 ساعة، وهو ما يشكل تحسنا خلال النظم الآلية الأخرى يظهر (على سبيل المثال PROMEGA MagneSil = 90 دقيقة وQIAGEN QIAamp DNA الدم BioRobot MDX نظام = 2.5 ساعة). الشكل 6A الأشعة فوق البنفسجية / فيس محات الامتصاصية لل 45 عينات الدم إيجابية معالجتها في وقت واحد مع 45 الفراغات كاشف على بروتوكول هاميلتون نجم، بمتوسط ​​A <sub&gt; 260/280 نسبة 1.96 ومتوسط ​​نسبة A 260/230 من 1.93. وA 260/280 النسبة بين 1،7-2،0 ونسبة 260/230&gt; 1.7 تدل عموما من الحمض النووي نقية جدا، وخالية من الأملاح المتبقية والبروتينات أو المذيبات، ومقبولة للتطبيقات الجزيئية معظم المصب. 1٪ agarose هلام في الشكل 6B يدل على أن gDNA الناتجة من ارتفاع الوزن الجزيئي (&gt; 24 KB)، مع الحد الأدنى من القص. ومتوسط ​​العائد الحمض النووي من مجموعة كاملة من 45 عينات إيجابية هو 5.26 ± 0.46 ميكروغرام الحمض النووي البشري في 200 ميكرولتر من الدم الكامل، استنادا إلى الحياة تكنولوجيز Quantifiler الإنسان DNA كيت الكمي. وقد أجريت دراسات التلوث المتبادل مماثلة لتلك التي تظهر في الشكل 5B مع الفراغات السلبية العازلة السيطرة تتخللها عينات إيجابية واستخراج بالتوازي، وكانت جميع الفراغات السلبية مرة أخرى عن طريق PCR (لا يظهر). المطهرون gDNA هو أيضا مناسبة للعديد من التحليلات الأخرى المستندة إلى PCR (لا يظهر). وتظهر النتائج في الوقت الحقيقي من ثماني عينات تكرار لعينة البلازما الأمهات المجمعة معالجتها مع الإجراء TruTip كبيرة الحجم في الشكل 7. الانتهاء من بروتوكول كامل (بما في ذلك خارج الخط K بروتين الحضانة) في حوالي 2.5 ساعة، على غرار دليل QIAGEN اعارة كيت الأحماض النووية (أي مجموعات استخراج الآلي للمقارنة متاحة حتى الآن). متوسط ​​القيم ر C على جميع مكررات هي 34.58 ± 0.66 و 29.76 ± 0.50 للذكور الجنين (CHY) ومجموع الحمض النووي (CH1)، على التوالي، والذي يدل على التكرار ممتازة من طريقة استخراج الآلي. يتم حساب تركيز الحمض النووي الجنين داخل تجمع DNA مجموع (في مكافئات الجينوم)، على أساس تحليل نقطة مناسبا بالمقارنة مع المعايير، مع٪ متوسط ​​الناتج DNA الجنين عبر جميع العينات من 2.8٪. الحمض النووي الفعلي٪ الجنين لهذه العينة هو غير معروف لأنه تم تجميع عينات قبل تنفيذ الاستخراج. تكوين الحمض النووي الجنينياستخراج عينات البلازما في غير المجمعة باستخدام طريقة TruTip وعادة ما تكون 1.5 أضعاف مقارنة النتائج مع QIAGEN كيت الأحماض النووية اعارة (لا يظهر). <img alt="الشكل 1" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig1.jpg" /> الشكل 1. ويمكن إدراج عملية الاستخراج TruTip وتدفق العمل، بغض النظر عن نظام مناولة السائل. أخرى تحضير العينة أو خطوات التعامل مع السائل في الأعمال الروتينية الآلي اعتمادا على قدرات أداة التعامل مع السائل محددة والبرمجيات. <img alt="الشكل 2" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig2highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig2.jpg" /> الشكل 2. (A) إيبندورف epMotion 5070 عينة لوحة التخطيط. (B) ترتيب الكواشف / consumaBLES على المنضدة. يمكن تكوين لوحة عينة لمدة تصل إلى 24 عينة (أعمدة 1 و 5 و 9، على التوالي)، على الرغم من أن epMotion سيقوم بمعالجة فقط كحد أقصى من 8 عينات في وقت واحد. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig2large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="الشكل (3)" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig3highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig3.jpg" /> الشكل (3). هاميلتون نجم تخطيط سطح السفينة لتنقية الحمض النووي الجيني من الدم الكامل (وليس على نطاق و) الطابق المركز 1 = 1 مل هاميلتون نصائح تصفيتها؛ 2 = هاميلتون 1 مل نصائح غير مفلتر، 3 = Akonni / هاميلتون 1 مل LPT 2 مم TruTips؛ 4 = المدخلات الدم شركات الطيران عينة (أنابيب جمع الدم أو أنابيب microcentrifuge)؛ 5-9 = 290 مل أحواض كاشف للتحلل العازلة F، والإيثانول، وغسل العازلة J، K الاحتياطي اغسل وشطف العازلة A2، على التوالي؛ 10 = 96 دالآثار البيئية لوحة تجليد جيدا؛ 11 = 96 بئر عميقة غسل J؛ 12 = 96 عميق يغسل جيدا K؛ 13 = 96 لوحة عميق شطف جيدا؛ 14 = هاميلتون HHS2 سخان / شاكر مع نونك 96 عميق لوحة الحضانة جيدا؛ 15 = 50 مل حوض كاشف تحتوي على بروتين K. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig3large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="الشكل 4" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig4highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig4.jpg" /> الشكل 4. وقد تم تجهيز هاميلتون STARplus تخطيط سطح السفينة لتنقية الحمض النووي من عينات بلازما حجم كبير (وليس إلى نطاق). النظام مع 8 × 5 قنوات مل و 8 × 1 مل قنوات (لا يظهر في تخطيط سطح السفينة). سطح السفينة المركز 1 = 4 مل هاميلتون نصائح تصفيتها؛ 2 = Akonni / هاملتون 5 مل TruTips؛ 3 = عينات البلازما مصدر؛ 4 = 50 مل أنابيب مخروطية؛ 5 = 120 مل تحتوي على أحواض كاشف CN-W1، W2 وCN-CN-W4 reageNTS؛ 6 = أحواض كاشف المنخفض التي تحتوي على بروتين كاف، CN-B2، B3-CN، EBA2، المد وCN-W3 الكواشف؛ 7 = 290 مل تحتوي على حوض كاشف كاشف CN-L1؛ 8 = 290 مل تحتوي على حوض كاشف CN -B1 كاشف؛ 9 = 96 لوحات جيدة العميق لخطوة 1 و 10 = 96 لوحات بئر عميق للخطوة 2؛ 11 = شركات الطيران عينة لالمنقى، والمنتج النهائي؛ 12 = هاميلتون 1 مل نصائح فلتر؛ 13 = Akonni / هاميلتون 1 مل LPT 4 مم TruTips. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig4large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="الرقم 5" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig5highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig5.jpg" /> الشكل 5. (A). في الوقت الحقيقي PCR النتائج من استخراج TruTip الآلي من فيروس إنفلونزا أضاف ضمن نضح البلعوم (NPA). المدخلات حجم NPA = 100 ميكرولتر، حجم شطف = 50 ميكرولتر. النتائج هي متوسط ​​3 مكرر هxtractions من 5 الخلفيات NPA متميزة (ن = 15) في مستوى التخفيف والهدف الأنفلونزا. تم إجراء QPCR على النظام LightCycler 480 مع ظروف مقايسة هو موضح سابقا 15. (B) يتم الكشف عن أي انتقال التلوث عندما تتناثر 12 عينة إيجابية NPA مع عدم وجود ضوابط قالب والخاضعة لإجراء الاستخراج الآلي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig5large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="الشكل (6)" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig6.jpg" /> الشكل (6). نتائج الإنسان استخراج الحمض النووي الجيني من الدم الكامل. A) آثار الأشعة فوق البنفسجية و المرئية من 1000 معمل NanoDrop (ThermoFisher) من 10 اختيارها عشوائيا مكررات. B) agarose هلام 1٪ من TruTip المنقى gDNA. M = فيشر 24 KB ماكس DNA سلم. الممرات 1-4 = ~ 100 نانوغرام المنقى gDNA من أربعة عشوائيا مختارة مكررات. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50356/50356fig6large.jpg" target="_blank">انقر هنا لعرض أكبر شخصية</a> . <img alt="الرقم 7" fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50356/50356fig7highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50356/50356fig7.jpg" /> الرقم 7. تم استخراج النتائج في الوقت الحقيقي PCR من ثمانية تكرار TruTip الاستخراج تعميم بحرية الحمض النووي من البلازما. عينات الرمز بواسطة العلامات النجمية (* أو **) في أيام منفصلة. CHY الكمي DNA الجنين من الذكور وCH1 الكمي الاجمالي الحالي الحمض النووي (الجنين والأم). تم إجراء QPCR على نظام 480 LightCycler (روش) مع المقايسات التي تم نشرها مسبقا استهداف CHY وCH1 18.

Watch this Scientific Journal Video about High-throughput, Automated Extraction of DNA and RNA from Clinical Samples using TruTip Technology on Common Liquid Handling Robots at JoVE.com

High-throughput, Automated Extraction of DNA and RNA from Clinical Samples using TruTip Technology on Common Liquid Handling Robots

TruTip هو بسيط الحمض النووي تكنولوجيا استخراج بموجبها يتم إدراج مسامية، مصفوفة ملزمة متجانسة في تلميح ماصة. وبالتالي، فإن تنسيق إعداد عينة متوافقا مع الصكوك التعامل مع معظم السائل، ويمكن استخدامها لكثير من متوسطة إلى التطبيقات السريرية عالية الإنتاجية وأنواع العينة.

عالية الإنتاجية، استخراج الآلي من DNA و RNA من العينات السريرية باستخدام تكنولوجيا TruTip على الروبوتات مناولة السائل المشترك

TruTip is a simple nucleic acid extraction  technology whereby a porous, monolithic binding matrix is inserted into a  pipette tip. The geometry of the ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Molecular Biology

Bioengineering

Unit 1

Biochemistry of the Cell

SCIENTISTS IN ACTION

Polymer Microarrays for High Throughput Discovery of Biomaterials

[ميكروأرس] البوليمر لاكتشاف إنتاجية عالية من المواد الحيوية

The discovery of novel biomaterials that are optimized for a specific biological application is readily achieved using polymer microarrays, which allows a ...

Combinatorial Synthesis of and High-throughput Protein Release from Polymer Film and Nanoparticle Libraries

اندماجي تجميع وعالية الإنتاجية الإصدار البروتين من فيلم البوليمر ومكتبات جسيمات متناهية الصغر

Polyanhydrides are a class of biomaterials with excellent biocompatibility and drug delivery capabilities. While they have been studied extensively with ...

CometChip: A High-throughput 96-Well Platform for Measuring DNA Damage in Microarrayed Human Cells

CometChip: إنتاجية عالية منصة 96-حسنا لقياس الحمض النووي من التلف في خلايا الإنسان Microarrayed

DNA damaging agents can promote aging, disease and cancer and they are ubiquitous in the environment and produced within human cells as normal cellular ...

Using Tomoauto: A Protocol for High-throughput Automated Cryo-electron Tomography

باستخدام Tomoauto: بروتوكول لإنتاجية عالية الآلي البرد الإلكترون التصوير المقطعي

Cryo-electron tomography (Cryo-ET) is a powerful three-dimensional (3-D) imaging technique for visualizing macromolecular complexes in their native ...

Automated Robotic Liquid Handling Assembly of Modular DNA Devices

الآلي الجمعية معالجة السائل الروبوتية أجهزة وحدات الحمض النووي

Recent advances in modular DNA assembly techniques have enabled synthetic biologists to test significantly more of the available &#34;design space&#34; ...

Generic Protocol for Optimization of Heterologous Protein Production Using Automated Microbioreactor Technology

بروتوكول عام للاستفادة المثلى إنتاج البروتين مغايرة باستخدام تقنية ميكروبيوريكتور الآلي

A core business in industrial biotechnology using microbial production cell factories is the iterative process of strain engineering and optimization of ...

Optimizing the Use of a Liquid Handling Robot to Conduct a High Throughput Forward Chemical Genetics Screen of Arabidopsis thaliana

Optimizing the Use of a Liquid Handling Robot to Conduct a High Throughput Forward Chemical Genetics Screen of Arabidopsis thaliana

الاستخدام الأمثل "روبوت مناولة السائل" إجراء "عالية الإنتاجية إلى الأمام الكيميائية الوراثة شاشة" التمويل نبات

Chemical genetics is increasingly being employed to decode traits in plants that may be recalcitrant to traditional genetics due to gene redundancy or ...

Use of High-Throughput Automated Microbioreactor System for Production of Model IgG1 in CHO Cells

نظام ميكروبيوريكتور لإنتاج IgG1 النموذجي في الخلايا شو الآلي استخدام الفائق

Automated microscale bioreactors (15 mL) can be a useful tool for cell culture engineers. They facilitate the simultaneous execution of a wide variety of ...

Process Optimization using High Throughput Automated Micro-Bioreactors in Chinese Hamster Ovary Cell Cultivation

عملية التحسين باستخدام الإنتاجية العالية الإنتاجية المفاعلات الحيوية الدقيقة الآلية في زراعة الخلايا المبيض الهامستر الصينية

Optimization of bioprocesses to increase the yield of desired products is of importance in the biopharmaceutical industry. This can be achieved by strain ...

High Throughput Yeast Strain Phenotyping with Droplet-Based RNA Sequencing

ارتفاع الإنتاجية الخميرة سلالة Phenotyping مع تسلسل الحمض النووي الريبي القائم على دروبليت

The powerful tools available to edit yeast genomes have made this microbe a valuable platform for engineering. While it is now possible to construct ...