Name: culturing primary rat inner medullary collecting duct cells
Uploaded: 2013-06-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי Forschungsgemeinschaft דויטשה (DFG; KL 1415/3-2 וKL 1415/4-2).

1. הכנה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מכין את מנות התרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפשירו קולגן סוג IV O / N ב 4 ° C ולפזר אותו בחומצה אצטית 0.1% סטרילית. הנפח להשתמש תלוי בסוג ובמספר המנות שבתאים שנזרעו. השתמש 2 מיקרוגרם / 2 ס&quo...

<ol>
	<li>Stoos, B. A., Naray-Fejes-Toth, A., Carretero, O. A., Ito, S., Fejes-Toth, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+mouse+cortical+collecting+duct+cell+line.">Characterization of a mouse cortical collecting duct cell line.</a> Kidney International. 39, 1168-1175 (1991).</li><li>Graham, F. L., Smiley, J., Russell, W. C., Nairn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+a+human+cell+line+transformed+by+DNA+from+human+adenovirus+type+5.">Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5.</a> The Journal of general virology. 36, 59-74 (1977).</li><li>Gluzman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SV40-transformed+simian+cells+support+the+replication+of+early+SV40+mutants.">SV40-transformed simian cells support the replication of early SV40 mutants.</a> Cell. 23, 175-182 (1981).</li><li>Ala, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+studies+of+twelve+mutant+V2+vasopressin+receptors+related+to+nephrogenic+diabetes+insipidus:+molecular+basis+of+a+mild+clinical+phenotype.">Functional studies of twelve mutant V2 vasopressin receptors related to nephrogenic diabetes insipidus: molecular basis of a mild clinical phenotype.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 9, 1861-1872 (1998).</li><li>Richardson, J. C., Scalera, V., Simmons, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+strains+of+MDCK+cells+which+resemble+separate+nephron+tubule+segments.">Identification of two strains of MDCK cells which resemble separate nephron tubule segments.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 673, 26-36 (1981).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+2+Promotes+Cell+Migration+and+Epithelial+Morphogenesis.">Aquaporin 2 Promotes Cell Migration and Epithelial Morphogenesis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. , (2012).</li><li>Perantoni, A., Berman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+Wilms'+tumor+line+(TuWi)+and+pig+kidney+line+(LLC-PK1)+typical+of+normal+kidney+tubular+epithelium.">Properties of Wilms' tumor line (TuWi) and pig kidney line (LLC-PK1) typical of normal kidney tubular epithelium.</a> In vitro. 15, 446-454 (1979).</li><li>Katsura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+and+regulated+membrane+expression+of+aquaporin+1+and+aquaporin+2+water+channels+in+stably+transfected+LLC-PK1+epithelial+cells.">Constitutive and regulated membrane expression of aquaporin 1 and aquaporin 2 water channels in stably transfected LLC-PK1 epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92, 7212-7216 (1995).</li><li>Hull, R. N., Cherry, W. R., Weaver, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+characteristics+of+a+pig+kidney+cell+strain,+LLC-PK.">The origin and characteristics of a pig kidney cell strain, LLC-PK.</a> In vitro. 12, 670-677 (1976).</li><li>Nedvetsky, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+regulation+of+aquaporin-2+abundance+and+degradation+by+protein+kinase+A+and+p38-MAP+kinase.">Reciprocal regulation of aquaporin-2 abundance and degradation by protein kinase A and p38-MAP kinase.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 21, 1645-1656 (2010).</li><li>Iolascon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Two+Novel+Missense+Mutations+in+the+AQP2+Gene+Causing+Nephrogenic+Diabetes+Insipidus.">Characterization of Two Novel Missense Mutations in the AQP2 Gene Causing Nephrogenic Diabetes Insipidus.</a> Nephron Physiology. 105, p33-p41 (2007).</li><li>Deen, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+transfection+of+Madin-Darby+canine+kidney+cells+reconstitutes+vasopressin-regulated+transcellular+osmotic+water+transport.">Aquaporin-2 transfection of Madin-Darby canine kidney cells reconstitutes vasopressin-regulated transcellular osmotic water transport.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 8, 1493-1501 (1997).</li><li>Valenti, G., Frigeri, A., Ronco, P. M., D'Ettorre, C., Svelto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+functional+analysis+of+water+channels+in+a+stably+AQP2-transfected+human+collecting+duct+cell+line.">Expression and functional analysis of water channels in a stably AQP2-transfected human collecting duct cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 271, 24365-24370 (1996).</li><li>Steele, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+immortalization+of+principal+cells+from+mouse+collecting+duct.">Telomerase immortalization of principal cells from mouse collecting duct.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 299, F1507-F1514 (2010).</li><li>Bens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosteroid-dependent+sodium+transport+in+a+novel+immortalized+mouse+collecting+duct+principal+cell+line.">Corticosteroid-dependent sodium transport in a novel immortalized mouse collecting duct principal cell line.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 10, 923-934 (1999).</li><li>Hasler, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+regulation+of+aquaporin-2+expression+in+vasopressin-responsive+renal+collecting+duct+principal+cells.">Long term regulation of aquaporin-2 expression in vasopressin-responsive renal collecting duct principal cells.</a> The Journal of Biological Chemistry. 277, 10379-10386 (1074).</li><li>Miller, R. L., Sandoval, P. C., Pisitkun, T., Knepper, M. A., Hoffert, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+inhibits+apoptosis+in+renal+collecting+duct+cells.">Vasopressin inhibits apoptosis in renal collecting duct cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. , (2012).</li><li>Kleinman, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+complexes+with+biological+activity.">Basement membrane complexes with biological activity.</a> Biochemistry. 25, 312-318 (1986).</li><li>Storm, R., Klussmann, E., Geelhaar, A., Rosenthal, W., Maric, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmolality+and+solute+composition+are+strong+regulators+of+AQP2+expression+in+renal+principal+cells.">Osmolality and solute composition are strong regulators of AQP2 expression in renal principal cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 284, 189-198 (2003).</li><li>Maric, K., Oksche, A., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+expression+in+primary+cultured+rat+inner+medullary+collecting+duct+cells.">Aquaporin-2 expression in primary cultured rat inner medullary collecting duct cells.</a> Am. J. Physiol. 275, 796-801 (1998).</li><li>Liebenhoff, U., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Rab3-,+Rab5a-+and+synaptobrevin+II-like+proteins+in+a+preparation+of+rat+kidney+vesicles+containing+the+vasopressin-regulated+water+channel.">Identification of Rab3-, Rab5a- and synaptobrevin II-like proteins in a preparation of rat kidney vesicles containing the vasopressin-regulated water channel.</a> FEBS Lett. 365, 209-213 (1995).</li><li>Lorenz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+is+sufficient+for+triggering+the+exocytic+recruitment+of+aquaporin-2+in+renal+epithelial+cells.">Cyclic AMP is sufficient for triggering the exocytic recruitment of aquaporin-2 in renal epithelial cells.</a> EMBO Rep. 4, 88-93 (2003).</li><li>Tamma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prostaglandin+E2+analogue+sulprostone+antagonizes+vasopressin-induced+antidiuresis+through+activation+of+Rho.">The prostaglandin E2 analogue sulprostone antagonizes vasopressin-induced antidiuresis through activation of Rho.</a> J. Cell Sci. 116, 3285-3294 (2003).</li><li>Maric, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+volume+kinetics+of+adherent+epithelial+cells+measured+by+laser+scanning+reflection+microscopy:+determination+of+water+permeability+changes+of+renal+principal+cells.">Cell volume kinetics of adherent epithelial cells measured by laser scanning reflection microscopy: determination of water permeability changes of renal principal cells.</a> Biophys. J. 80, 1783-1790 (2001).</li><li>Gonzalez, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+stimulates+renin+in+inner+medullary+collecting+duct+cells+via+protein+kinase+C+and+independent+of+epithelial+sodium+channel+and+mineralocorticoid+receptor+activity.">Angiotensin II stimulates renin in inner medullary collecting duct cells via protein kinase C and independent of epithelial sodium channel and mineralocorticoid receptor activity.</a> Hypertension. 57, 594-599 (2011).</li><li>Chou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aquaporin-2+trafficking+by+vasopressin+in+the+renal+collecting+duct.+Roles+of+ryanodine-sensitive+Ca2++stores+and+calmodulin.">Regulation of aquaporin-2 trafficking by vasopressin in the renal collecting duct. Roles of ryanodine-sensitive Ca2+ stores and calmodulin.</a> The Journal of Biological Chemistry. 275, 36839-36846 (2000).</li><li>Uawithya, P., Pisitkun, T., Ruttenberg, B. E., Knepper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+native+inner+medullary+collecting+duct+cells+from+rat+kidney.">Transcriptional profiling of native inner medullary collecting duct cells from rat kidney.</a> Physiological Genomics. 32, 229-253 (2008).</li><li>Tchapyjnikov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+profiling+of+nuclei+from+native+renal+inner+medullary+collecting+duct+cells+using+LC-MS/MS.">Proteomic profiling of nuclei from native renal inner medullary collecting duct cells using LC-MS/MS.</a> Physiological Genomics. 40, 167-183 (2010).</li><li>Stefan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalization+of+cAMP-dependent+signaling+by+phosphodiesterase-4D+is+involved+in+the+regulation+of+vasopressin-mediated+water+reabsorption+in+renal+principal+cells.">Compartmentalization of cAMP-dependent signaling by phosphodiesterase-4D is involved in the regulation of vasopressin-mediated water reabsorption in renal principal cells.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 18, 199-212 (2007).</li><li>Klussmann, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitory+role+of+Rho+in+the+vasopressin-mediated+translocation+of+aquaporin-2+into+cell+membranes+of+renal+principal+cells.">An inhibitory role of Rho in the vasopressin-mediated translocation of aquaporin-2 into cell membranes of renal principal cells.</a> J. Biol. Chem. 276, 20451-20457 (2001).</li></ol>

אנו מציגים פרוטוקול מפורט להכנה וculturing של תאי IMCD עכברוש ראשוניים. גישת תשואות של עד 21 ס&quot;מ 2 של תאים מחולדה אחת 20. הניסוי דורש ציוד תרבית תאים סטנדרטי ויכול להתבצע על ידי אדם אחד בתוך כ 6 שעות. לכן, גישה זו היא מתאימה כמו שיטת מעבדה סטנדרטית. <p class="jove_content" sty...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50366">Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to: Enno Klussmann instead of: Enno Klussman

A correction to author list has been made for article Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells.

Erratum: Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

בתאים עיקריים צינור איסוף כליות, ארגינין-וזופרסין (AVP) שולט במים על ידי גירוי ספיג חוזר של החדרת המים ערוץ aquaporin-2 (AQP2) לתוך קרום הפלזמה. AVP נקשר לרצפטור וזופרסין סוג 2 G-חלבון בשילוב (V2R) גירוי cyclase adenylyl ובכך היווצרות cAMP. תחילתו של מפל איתות זה מובילה להפעלה של החלבון קינאז (PKA). PKA phosphorylates AQP2 בסרין 256 (S256), המהווה את הגורם העיקרי לחלוקה מחדש שלה משלפוחית ​​תאיות לתוך קרום הפלזמה. הכניסה הקרום מאפשרת ספיגה חוזרת של מים לאורך שיפוע האוסמוטי ועדינות מנגינות הומאוסטזיס מים בגוף. Dysregulation של ספיגת מים AVP בתיווך, בשל סטיות של הפרשת AVP או גורמי איתות AVP-מופעלים או קשור למחלות קשות. ירידה נגרמה על ידי מוטציות של V2R או AQP2 ספיגת מים מובילה לסוכרת תפלה nephrogenic, בעוד שגובה מעל פני יםרמת AVP פלזמה דם ated קשורה לספיגת מים מוגזמת במחלות לב וכלי דם, כגון אי ספיקת לב כרונית ותסמונת של הפרשת הורמון antidiuretic הולמת (SIADH). המשמעות של ספיגת מים AVP בתיווך נובעת לא רק מההשלכות שלה במחלה. טרנסלוקציה-Induced AVP של שלפוחית ​​AQP2 נושאים ולאיחוי עם קרום הפלזמה מייצגת תהליך exocytic קפדנות מחנה תלוי, אשר כיום אינה מובנת היטב. דוגמאות אחרות לexocytosis מחנה תלוי הן הפרשת רנין בכליה וH + הפרשה בבטן. לכן, הבהרת מנגנונים מולקולריים השולטים AQP2-טרנסלוקציה בתאי הכליה עיקריות לא רק עוזרת להבנת תהליכים מולקולריים דומים בסוגי תאים אחרים, אלא גם עשויה לסלול את הדרך לטיפולים חדשים לטיפול במחלות הקשורות להפרעות בספיגת מים AVP בתיווך . Elucidating AQP2 שליטה מנגנונים דורש איסוף מודלים תא עיקריים דביק. לשם כך מספר שורות תאי כליות יונקים שונים זמין. עם זאת, המודלים האלה יש כמה חסרונות. במערכות סלולריים רבות את רמת החלבון של AQP2 היא נמוכה (טבלת 1; M1, HEK293, COS-7, MDCK, LLC-PK1) 1-10, אחרים ectopically overexpress אדם (MCD4, WT10) 11,12 או עכברוש (CD8) 13 AQP2. בMCD4 וCOS-7 תאים רצפטור V2 לא בא לידי ביטוי. למיטב ידיעתנו אין קו תא קבוע כמודל זמין, הנגזר מאיסוף הצינור הלשדי הפנימי כליות, את אותו חלק של הכליה בי AQP2 הביטוי הוא נפוץ ביותר, אבל מצינור 1,11,13-16 קליפת המוח האיסוף . מודלים תא כאלה הם למשל mpkCCD הונצח בשימוש נרחב (לדוגמה 17) או את 14 קווים שהוקמו לאחרונה mTERT-CCD הסלולרי. שתי שורות תאי endogenously המפורש AQP2 וV2R אבל מאז הם הנגזריםצינור איסוף קליפת המוח הקרוב לוודאי מכיל proteome שונה לעומת לשדי פנימי איסוף צינור (IMCD) תאים. הם חייבים להביע למשל Na שונה + מערכות תחבורה. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לתאי IMCD עיקריים תרבות המבטאים V2R וAQP2 endogenously. מודל זה, אם כן, מייצג באופן קרוב ביותר את המצב הפיזיולוגי בצינור איסוף הכליות. כביסוס התרבות דורש רק תקן מעבדות אחרות ציוד מעבדה יכולות בקלות לאמץ את הגישה הזו.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name </td>
			<td>Company Catalog</td>
			<td>Number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type IV Mouse</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356233</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>H6254</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type CLS-II</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>C2-22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM + GlutMAX</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>21885108</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>N4014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultroser G</td>
			<td>Cytogen</td>
			<td>15950-017</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non essential amino acids (NEA)</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>K0293</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>15710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DBcAMP</td>
			<td>BIOLOG</td>
			<td>D009</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culturing primary rat inner medullary collecting duct cells

ארגינין-וזופרסין (AVP) מאפשר ספיג חוזר של מים על ידי כליות איסוף תאים עיקריים צינור ובכך עדינות מנגינות הומאוסטזיס מים בגוף. AVP נקשר לקולטנים V2 זופרסין (V2R) על פני השטח של התאים ובכך גורם לסינתזה של cAMP. זה מגרה תהליכי איתות תאיים מובילים לשינויים בזירחון של תעלת המים aquaporin-2 (AQP2). חלבון קינאז phoshorylates AQP2 ובכך מעורר את טרנסלוקציה של AQP2 משלפוחית ​​תאיות לתוך קרום הפלזמה להקל ספיגת מים משתן ראשוני. סטיות של שחרור מAVP איתות יותרת המוח או AVP המופעל בתאים עיקריים יכולות לגרום לסוכרת תפלה מרכזית או nephrogenic, בהתאמה; רמה גבוהה בדם פלזמה AVP קשורה למחלות לב וכלי דם, כגון אי ספיקת לב כרונית ותסמונת של הפרשת הורמון antidiuretic לא הולמת. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לcultivatiמלשד פנימי עכברוש העיקרי איסוף צינור (IMCD) תאים, שמבטא V2R וAQP2 endogenously. התאים מתאימים להבהרת מנגנונים מולקולריים שבבסיס הבקרה של AQP2 ובכך לגלות מטרות תרופה חדשות לטיפול במחלות הקשורות לחוסר ויסות של ספיגת מים AVP בתיווך. תאי IMCD מתקבלים מmedullae פנימי כליות חולדה ומשמשים לניסויים שישה עד שמונה ימים לאחר זריעה. יכולים להיות מתורבתים תאי IMCD במנות רגילות תרבית תאים, צלוחיות וצלחות מייקר כייל של פורמטים שונים, ההליך דורש רק כמה שעות, והוא מתאים למעבדות תרבית תאים סטנדרטיות.

הגידול המוצלח של תאי IMCD עכברוש עיקריים יביא בשכבת מחוברות 6-8 ימים לאחר הזריעה (איור 2). למנת תרבות 60 מ&quot;מ יש כ 6 x 10 6 תאים. התאים בחוזקה לדבוק במנות התרבות, שכן אלה היו מצופים בקולגן הסוג IV, מרכיב קרום במרתף 18. לכן, תאי IMCD לא לנתק גם במספר הליכי שטיפה י?...

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

ארגינין-וזופרסין (AVP) שולט בכוונון עדין של איזון מים בגוף דרך להקל על ספיגת מים על ידי תאי הכליה עיקריות. כאן, אנו מציגים פרוטוקול לגידול מדולרי פנימי עכברוש העיקרי איסוף תאי צינור המתאימים להבהרת מנגנונים מולקולריים שבבסיס ספיג חוזר של מים AVP בתיווך.

Medullary העכברוש הראשוני culturing הפנימי איסוף תאי Duct

Arginine-vasopressin (AVP) facilitates water reabsorption by renal collecting duct principal cells and thereby fine-tunes body water homeostasis. AVP ...

Research

JoVE Journal

Biology

Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds 

איסוף מדידת מגשרים nociceptive ועל פצעים דלקתיים כירורגי

We describe a methodology by which we are able to collect and measure inflammatory and nociceptive biochemical mediators at the surgical wound site. ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

פרוטוקול נוירונים culturing הסימפתטית מן הגרעינים עכברוש צוואר הרחם מעולה (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

תרבות ראשונית של הלב Myocytes למבוגרים עכברוש

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

ראשי תאים אנושיים אפיתל הסימפונות גדלה מ Explants

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

בידוד של תאי בסיס ותאי בלוטת Duct Submucosal מעכבר קנה נשימה

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

הכנת עובריים של עכברים תאים פיברובלסטים מתאים האדם culturing תאים עובריים pluripotent המושרה בתאי גזע

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

בידוד תרבות ראשונית של תאים בכבד עכברוש

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

בידוד של תאים חיסוניים של גידולים ראשוניים

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

Culturing של אדם תאי אפיתל באף בממשק האוויר הנוזלי

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

שיטה לCulturing עוברי<em&gt; ג elegans</em&gt; תאים

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...