Name: culturing primary rat inner medullary collecting duct cells
Uploaded: 2013-06-21T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

Bu çalışma, Deutsche Forschungsgemeinschaft (; KL 1415/3-2 ve KL 1415/4-2 DFG) tarafından desteklenmiştir.

1. Hazırlık <ol><li> Kültür kaplarına hazırlanması <ol><li> Çözülme Kollajen Tip 4 de IV O / N ° C ve% 0.1 steril asetik asit içinde çözülür. Kullanmak için ses hücreleri numaralı seribaşı için olduğu yemekler türüne ve sayısına bağlıdır. 2 mg / cm 2 kullanın. </li><li> En az 1 saat oda sıcaklığında inkübe edin ve yemekler için damıtılmış su (A tridest) ile iki kez yıkanır. </li><li> Yemekler düzgün kurumasını bekleyin. </li></ol></li><li> Ortam takviyesi <ol><...

<ol>
	<li>Stoos, B. A., Naray-Fejes-Toth, A., Carretero, O. A., Ito, S., Fejes-Toth, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+mouse+cortical+collecting+duct+cell+line.">Characterization of a mouse cortical collecting duct cell line.</a> Kidney International. 39, 1168-1175 (1991).</li><li>Graham, F. L., Smiley, J., Russell, W. C., Nairn, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+a+human+cell+line+transformed+by+DNA+from+human+adenovirus+type+5.">Characteristics of a human cell line transformed by DNA from human adenovirus type 5.</a> The Journal of general virology. 36, 59-74 (1977).</li><li>Gluzman, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SV40-transformed+simian+cells+support+the+replication+of+early+SV40+mutants.">SV40-transformed simian cells support the replication of early SV40 mutants.</a> Cell. 23, 175-182 (1981).</li><li>Ala, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+studies+of+twelve+mutant+V2+vasopressin+receptors+related+to+nephrogenic+diabetes+insipidus:+molecular+basis+of+a+mild+clinical+phenotype.">Functional studies of twelve mutant V2 vasopressin receptors related to nephrogenic diabetes insipidus: molecular basis of a mild clinical phenotype.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 9, 1861-1872 (1998).</li><li>Richardson, J. C., Scalera, V., Simmons, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+strains+of+MDCK+cells+which+resemble+separate+nephron+tubule+segments.">Identification of two strains of MDCK cells which resemble separate nephron tubule segments.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 673, 26-36 (1981).</li><li>Chen, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin+2+Promotes+Cell+Migration+and+Epithelial+Morphogenesis.">Aquaporin 2 Promotes Cell Migration and Epithelial Morphogenesis.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. , (2012).</li><li>Perantoni, A., Berman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Properties+of+Wilms'+tumor+line+(TuWi)+and+pig+kidney+line+(LLC-PK1)+typical+of+normal+kidney+tubular+epithelium.">Properties of Wilms' tumor line (TuWi) and pig kidney line (LLC-PK1) typical of normal kidney tubular epithelium.</a> In vitro. 15, 446-454 (1979).</li><li>Katsura, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+and+regulated+membrane+expression+of+aquaporin+1+and+aquaporin+2+water+channels+in+stably+transfected+LLC-PK1+epithelial+cells.">Constitutive and regulated membrane expression of aquaporin 1 and aquaporin 2 water channels in stably transfected LLC-PK1 epithelial cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92, 7212-7216 (1995).</li><li>Hull, R. N., Cherry, W. R., Weaver, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+characteristics+of+a+pig+kidney+cell+strain,+LLC-PK.">The origin and characteristics of a pig kidney cell strain, LLC-PK.</a> In vitro. 12, 670-677 (1976).</li><li>Nedvetsky, P. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+regulation+of+aquaporin-2+abundance+and+degradation+by+protein+kinase+A+and+p38-MAP+kinase.">Reciprocal regulation of aquaporin-2 abundance and degradation by protein kinase A and p38-MAP kinase.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 21, 1645-1656 (2010).</li><li>Iolascon, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Two+Novel+Missense+Mutations+in+the+AQP2+Gene+Causing+Nephrogenic+Diabetes+Insipidus.">Characterization of Two Novel Missense Mutations in the AQP2 Gene Causing Nephrogenic Diabetes Insipidus.</a> Nephron Physiology. 105, p33-p41 (2007).</li><li>Deen, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+transfection+of+Madin-Darby+canine+kidney+cells+reconstitutes+vasopressin-regulated+transcellular+osmotic+water+transport.">Aquaporin-2 transfection of Madin-Darby canine kidney cells reconstitutes vasopressin-regulated transcellular osmotic water transport.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 8, 1493-1501 (1997).</li><li>Valenti, G., Frigeri, A., Ronco, P. M., D'Ettorre, C., Svelto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+and+functional+analysis+of+water+channels+in+a+stably+AQP2-transfected+human+collecting+duct+cell+line.">Expression and functional analysis of water channels in a stably AQP2-transfected human collecting duct cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 271, 24365-24370 (1996).</li><li>Steele, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomerase+immortalization+of+principal+cells+from+mouse+collecting+duct.">Telomerase immortalization of principal cells from mouse collecting duct.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 299, F1507-F1514 (2010).</li><li>Bens, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosteroid-dependent+sodium+transport+in+a+novel+immortalized+mouse+collecting+duct+principal+cell+line.">Corticosteroid-dependent sodium transport in a novel immortalized mouse collecting duct principal cell line.</a> Journal of the American Society of Nephrology: JASN. 10, 923-934 (1999).</li><li>Hasler, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+regulation+of+aquaporin-2+expression+in+vasopressin-responsive+renal+collecting+duct+principal+cells.">Long term regulation of aquaporin-2 expression in vasopressin-responsive renal collecting duct principal cells.</a> The Journal of Biological Chemistry. 277, 10379-10386 (1074).</li><li>Miller, R. L., Sandoval, P. C., Pisitkun, T., Knepper, M. A., Hoffert, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vasopressin+inhibits+apoptosis+in+renal+collecting+duct+cells.">Vasopressin inhibits apoptosis in renal collecting duct cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. , (2012).</li><li>Kleinman, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basement+membrane+complexes+with+biological+activity.">Basement membrane complexes with biological activity.</a> Biochemistry. 25, 312-318 (1986).</li><li>Storm, R., Klussmann, E., Geelhaar, A., Rosenthal, W., Maric, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmolality+and+solute+composition+are+strong+regulators+of+AQP2+expression+in+renal+principal+cells.">Osmolality and solute composition are strong regulators of AQP2 expression in renal principal cells.</a> American Journal of Physiology. Renal Physiology. 284, 189-198 (2003).</li><li>Maric, K., Oksche, A., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aquaporin-2+expression+in+primary+cultured+rat+inner+medullary+collecting+duct+cells.">Aquaporin-2 expression in primary cultured rat inner medullary collecting duct cells.</a> Am. J. Physiol. 275, 796-801 (1998).</li><li>Liebenhoff, U., Rosenthal, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+Rab3-,+Rab5a-+and+synaptobrevin+II-like+proteins+in+a+preparation+of+rat+kidney+vesicles+containing+the+vasopressin-regulated+water+channel.">Identification of Rab3-, Rab5a- and synaptobrevin II-like proteins in a preparation of rat kidney vesicles containing the vasopressin-regulated water channel.</a> FEBS Lett. 365, 209-213 (1995).</li><li>Lorenz, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclic+AMP+is+sufficient+for+triggering+the+exocytic+recruitment+of+aquaporin-2+in+renal+epithelial+cells.">Cyclic AMP is sufficient for triggering the exocytic recruitment of aquaporin-2 in renal epithelial cells.</a> EMBO Rep. 4, 88-93 (2003).</li><li>Tamma, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+prostaglandin+E2+analogue+sulprostone+antagonizes+vasopressin-induced+antidiuresis+through+activation+of+Rho.">The prostaglandin E2 analogue sulprostone antagonizes vasopressin-induced antidiuresis through activation of Rho.</a> J. Cell Sci. 116, 3285-3294 (2003).</li><li>Maric, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+volume+kinetics+of+adherent+epithelial+cells+measured+by+laser+scanning+reflection+microscopy:+determination+of+water+permeability+changes+of+renal+principal+cells.">Cell volume kinetics of adherent epithelial cells measured by laser scanning reflection microscopy: determination of water permeability changes of renal principal cells.</a> Biophys. J. 80, 1783-1790 (2001).</li><li>Gonzalez, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+stimulates+renin+in+inner+medullary+collecting+duct+cells+via+protein+kinase+C+and+independent+of+epithelial+sodium+channel+and+mineralocorticoid+receptor+activity.">Angiotensin II stimulates renin in inner medullary collecting duct cells via protein kinase C and independent of epithelial sodium channel and mineralocorticoid receptor activity.</a> Hypertension. 57, 594-599 (2011).</li><li>Chou, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+aquaporin-2+trafficking+by+vasopressin+in+the+renal+collecting+duct.+Roles+of+ryanodine-sensitive+Ca2++stores+and+calmodulin.">Regulation of aquaporin-2 trafficking by vasopressin in the renal collecting duct. Roles of ryanodine-sensitive Ca2+ stores and calmodulin.</a> The Journal of Biological Chemistry. 275, 36839-36846 (2000).</li><li>Uawithya, P., Pisitkun, T., Ruttenberg, B. E., Knepper, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+profiling+of+native+inner+medullary+collecting+duct+cells+from+rat+kidney.">Transcriptional profiling of native inner medullary collecting duct cells from rat kidney.</a> Physiological Genomics. 32, 229-253 (2008).</li><li>Tchapyjnikov, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+profiling+of+nuclei+from+native+renal+inner+medullary+collecting+duct+cells+using+LC-MS/MS.">Proteomic profiling of nuclei from native renal inner medullary collecting duct cells using LC-MS/MS.</a> Physiological Genomics. 40, 167-183 (2010).</li><li>Stefan, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compartmentalization+of+cAMP-dependent+signaling+by+phosphodiesterase-4D+is+involved+in+the+regulation+of+vasopressin-mediated+water+reabsorption+in+renal+principal+cells.">Compartmentalization of cAMP-dependent signaling by phosphodiesterase-4D is involved in the regulation of vasopressin-mediated water reabsorption in renal principal cells.</a> J. Am. Soc. Nephrol. 18, 199-212 (2007).</li><li>Klussmann, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+inhibitory+role+of+Rho+in+the+vasopressin-mediated+translocation+of+aquaporin-2+into+cell+membranes+of+renal+principal+cells.">An inhibitory role of Rho in the vasopressin-mediated translocation of aquaporin-2 into cell membranes of renal principal cells.</a> J. Biol. Chem. 276, 20451-20457 (2001).</li></ol>

Biz primer sıçan IMCD hücrelerinin hazırlanması ve kültür için ayrıntılı bir protokol mevcut. Bu yaklaşım bir sıçan 20 hücreleri 21 cm 2 kadar verir. Deney, standart hücre kültürü ekipman gerektirir ve yaklaşık 6 saat içinde, tek bir kişi tarafından yapılabilir. Dolayısıyla, bu yaklaşım, bir standart laboratuar yöntemi olarak uygundur. Primer fare IMCD hücreleri, 96 oyuklu plakalar, 60 mm yemekler arasında, farklı büyüklükte kültür...

A correction was made to <a href="http://www.jove.com/video/50366">Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells</a>. There was an error with an author's name. The author's last name had a typo and was corrected to: Enno Klussmann instead of: Enno Klussman

A correction to author list has been made for article Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells.

Erratum: Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

Böbreğin toplayıcı ana hücrelerde, arjinin-vasopresin (AVP) su ekleme uyararak su emilimini kontrol plazma zarı içine kanal aquaporin 2 (AQP2). AVP adenilat siklaz ve böylece cAMP oluşumunu uyarıcı G-protein çiftli vazopressin tip-2 reseptörü (V2R) bağlanır. Bu sinyal akışının başlatılması protein kinaz A (PKA) aktivasyonuna yol açar. PKA plazma zarı içine hücre içi veziküllerden yeniden dağıtımı için en önemli tetikleyici olan, 256 (S256) serin de AQP2 fosforile. Membran ekleme ozmotik degrade ve ince ayar vücut su dengesinin birlikte su geri emilimini kolaylaştırır. Nedeniyle AVP salgı veya AVP-aktif sinyal nedenleri veya sapmaları AVP-aracılı su geri emiliminin bozulmasına, ciddi hastalıklar ile ilişkilidir. V2R veya AQP2 mutasyonlar neden azalma su geri emilimini bir elev ise, nefrojenik diabetes insipidus yol açarated kan plazma AVP düzeyi, kronik kalp yetmezliği ve uygunsuz antidiüretik hormon salgılanması (SIADH) en sendromu gibi kardiyovasküler hastalıklar aşırı su geri emilimini ile ilişkilidir. AVP-aracılı su geri emilimini önemi sadece hastalık kendi ima kaynaklanıyor. AQP2 taşıyan için veziküller ve plazma zarı ile füzyon AVP bağlı translokasyon şu anda iyi anlaşılmış değildir kesinlikle cAMP-bağımlı exocytic süreci temsil eder. Bir cAMP bağımlı ekzositozu için diğer örnekleri, böbrek ve H renin salınımı + mide salgı vardır. Bu nedenle renal ana hücrelerde AQP2-translokasyon düzenleyen moleküler mekanizmaların açıklanması, sadece diğer hücre tipleri içindeki moleküler süreçleri anlamak yardımcı olur, ancak, aynı zamanda AVP-aracılı su emiliminin bozuklukları ile bağlantılı hastalıkların tedavisi için yeni terapilere yol açabilecektir . Emekanizmaları kontrol AQP2 lucidating kanalı temel hücre modelleri toplama gerektirir. Bunun için farklı memeli böbrek hücre hatları bir dizi kullanılabilir. Ancak, bu modeller birkaç sakıncaya sahiptir. Birçok hücre sistemlerinde AQP2 protein düzeyi (Tablo 1; M1, HEK293, COS-7, MDCK, LLC-PK1) düşüktür 1-10, ektopik diğerleri aşın insan (MCD4, WT10) 11,12 veya sıçan (CD8) 13 AQP2. MCD4 ve COS-7 hücreleri içinde V2 reseptörü ifade değildir. Bildiğimiz kadarıyla orada böbrek iç medüller toplayıcı, AQP2 ifade en bol olan böbrek bir kısmının türetilmiştir kullanılabilir bir model olarak kalıcı bir hücre hattı, ancak kortikal toplayıcı 1,11,13-16 gelen . Bu tür hücre modelleri örnek, yaygın olarak kullanılan ölümsüzleştirdi mpkCCD (örneğin 17) veya yeni kurulan mTERT-CCD 14 hücre hatları içindir. Her iki hücre hatları ve endojen olarak ifade AQP2 V2R ancak türetilen yanakortikal toplama kanalı büyük olasılıkla kanal (IMCD) hücreleri toplamak iç medüller göre farklı bir proteom içerir. Bunlar örneğin farklı Na ifade etmelidir + taşıma sistemleri. Burada, V2R ve AQP2 endojen ifade kültürü birincil IMCD hücrelere bir protokol mevcut. Bu model, bu nedenle, böbrek toplama kanalında en yakın fizyolojik durumu temsil eder. Kültür kurulması gereğine göre sadece standart laboratuar ekipmanları vb laboratuarlar kolayca bu yaklaşım kabul edebilir.

<table border="1">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Name </td>
			<td>Company Catalog</td>
			<td>Number</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagen Type IV Mouse</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356233</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>H6254</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type CLS-II</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>C2-22</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM + GlutMAX</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>21885108</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nystatin</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>N4014</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultroser G</td>
			<td>Cytogen</td>
			<td>15950-017</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non essential amino acids (NEA)</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td>K0293</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Invitrogen GIBCO</td>
			<td>15710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DBcAMP</td>
			<td>BIOLOG</td>
			<td>D009</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

culturing primary rat inner medullary collecting duct cells

Arginin-vazopressin (AVP) böbrek kanalı temel hücre toplanması ve böylece ince ayar vücut su dengesi suyun geri emilimini kolaylaştırır. AVP, hücrelerin yüzeyi üzerinde vasopresin V2 alıcıları (V2R) ile bağlanır ve böylece, cAMP sentezini indükler. Bu su kanalı aquaporin 2 (AQP2) fosforlaştıncı değişikliklere yol açan hücresel sinyal sürecini hızlandırır. Protein kinaz A AQP2 phoshorylates ve böylece birincil idrar su geri emilimini kolaylaştırmak plazma zarı içine hücre içi veziküllerden AQP2 en translokasyon tetikler. Asıl hücrelerde hipofiz veya AVP-aktif sinyal gelen AVP serbest sapmaları sırasıyla, merkezi ya da nefrojenik diabetes insipidus neden olabilir; yüksek bir kan plazma AVP düzeyi, kronik kalp yetmezliği ve uygunsuz antidiüretik hormon salgılanması sendromu gibi kardiyovasküler hastalıklar ile ilişkilidir. Burada, cultivati ​​için bir protokol mevcutifade V2R ve AQP2 endojen kanal (IMCD) hücreleri, toplama birincil sıçan iç medüller on. Hücreler AQP2 bölgesinin kontrolü altında yatan moleküler mekanizmaların için uygun olan ve bu nedenle AVP-aracılı su emiliminin bozulmasına ile bağlantılı hastalıkların tedavisi için yeni bir ilaç bulmak için hedefler. IMCD hücreleri sıçan böbrek iç medullae elde edilir ve altı ila sekiz gün tohumlama sonra deneyler için kullanılır. IMCD hücreleri düzenli hücre kültürü yemekleri, matara ve farklı biçimlerde mikro-titre plakalar kültür olabilir, işlem sadece birkaç saat gerektirir ve standart hücre kültürü laboratuarlar için uygundur.

Primer fare IMCD hücreleri başarılı ekimi 6-8 gün tohumlama sonra konfluent tek tabaka (Şekil 2) ile sonuçlanır. 60 mm kültür çanak başına yaklaşık 6 x 10 6 hücre vardır. Bu tip IV kolajen, bir bazal membran bileşeni 18 ile kaplanmış olduğu gibi sıkı bir şekilde hücreler, kültür tabaklarına uygun. Bu nedenle, IMCD hücreleri birkaç ayrıntılı yıkama işlemleri sırasında bile terketmez. Yukarı, kültürlenmiş hücreler,% 80, endojen V2R ve AQP2 if...

Watch this Scientific Journal Video about Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells at JoVE.com

Culturing Primary Rat Inner Medullary Collecting Duct Cells

Arginin-vazopressin (AVP) böbrek temel hücreleri tarafından su geri emilimini kolaylaştırmak yoluyla vücudun su dengesi ince ayar kontrol eder. Burada, AVP-aracılı su geri emilimini moleküler mekanizmaları hakkında aydınlatılması için uygun toplayıcı kanal hücrelerinin primer sıçan iç medüller yetiştiriciliği için bir protokol mevcut.

Kanal Hücreleri Toplama kültür İlköğretim Rat İç Medüller

Arginine-vasopressin (AVP) facilitates water reabsorption by renal collecting duct principal cells and thereby fine-tunes body water homeostasis. AVP ...

Research

JoVE Journal

Biology

Collecting and Measuring Nociceptive and Inflammatory Mediators in Surgical Wounds 

Cerrahi Yaralar Nosiseptif ve İnflamatuar Arabulucular Toplama ve Ölçüm

We describe a methodology by which we are able to collect and measure inflammatory and nociceptive biochemical mediators at the surgical wound site. ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

Rat Üstün Servikal Ganglia (SCG) kültür Sempatik Nöronlar Protokolü

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Primary Culture of Adult Rat Heart Myocytes

Yetişkin Sıçan Kalp miyositler İlköğretim Kültür

Cultured primary adult rodent heart cells are an important model system for cardiovascular research.  Nevertheless, establishment of robust, viable ...

Primary Human Bronchial Epithelial Cells Grown from Explants

Eksplantlar gelen Yetiştirilen İlköğretim İnsan Bronşiyal Epitel Hücreleri

Human bronchial epithelial cells are needed for cell models of disease and to investigate the effect of excipients and pharmacologic agents on the ...

Isolation of Basal Cells and Submucosal Gland Duct Cells from Mouse Trachea

Fare Trakea gelen Bazal Hücre ve Submukozal Bezi Kanal Hücre İzolasyonu

The large airways are directly in contact with the environment and therefore susceptible to injury from toxins and infectious agents that we breath in 1. ...

Preparation of Mouse Embryonic Fibroblast Cells Suitable for Culturing Human Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells

Kültürleme İnsan Embriyonik ve Bağlı Pluripotent Kök Hücrelerinin için uygundur Fare embriyonik fibroblast hücreleri hazırlanması

In general, human embryonic stem cells (hESCs) and human induced pluripotent stem cells (hiPSCs)1 can be cultured under variable conditions. However, it ...

Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells

Sıçan Karaciğer Hücreleri İzolasyon ve İlköğretim Kültür

Primary hepatocyte culture is a valuable tool that has been extensively used in basic research of liver function, disease, pathophysiology, pharmacology ...

Isolation of Immune Cells from Primary Tumors

Primer Tümörler gelen Bağışıklık Hücre İzolasyonu

Tumors create a unique immunosuppressive microenvironment (tumor microenvironment, TME) whereby leukocytes are recruited into the tumor by various ...

Culturing of Human Nasal Epithelial Cells at the Air Liquid Interface

Hava Sıvı Arayüz İnsan Burun Epitel Hücrelerinin ekimi

In vitro models using human primary  epithelial cells are essential in understanding key functions of the respiratory  epithelium in the context of ...

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

A Method for Culturing Embryonic C. elegans Cells

Kültürleme Embriyonik için bir yöntem<em&gt; C. elegans</em&gt; Hücreler

C. elegans is a powerful model system, in which genetic and molecular techniques are easily applicable. Until recently though, techniques that require ...