Name: oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food
Uploaded: 2013-05-06T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door subsidies van de National Institutes of Health (AI079442 en AI091918) toegekend aan SEFD

1. Voorbereiding van Selective Agar Media (BHI / L + G) om darmmicrobiota Inhibit <ol><li> Weeg 26 g Brain Heart Infusion Agar (Difco), 7,5 g LiCl en 5,0 g glycine en plaats in een 1 liter kolf. Voeg 500 ml gedeïoniseerd water. </li><li> Verwarm op een magnetische roerder totdat de agar kookt, onder voortdurend roeren. Neem de kolf van het vuur, laat de bubbels te wikkelen kort, en breng weer aan de kook dan. </li><li> . Autoclaaf gedurende 30 minuten bij 121 ° C onder 16-19 psi op een vloeistof cyclus Let o...

<ol>
	<li>Becker, L. A., Evans, S. N., Hutkins, R. W., Benson, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+sigmaB+in+adaptation+of+Listeria+monocytogenes+to+growth+at+low+temperature.">Role of sigmaB in adaptation of Listeria monocytogenes to growth at low temperature.</a> Journal of Bacteriology. 182, 7083-7087 (2000).</li><li>Neunlist, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+salting+and+cold-smoking+on+the+culturability,+viability,+and+virulence+of+Listeria+monocytogenes+strain+Scott+A.">Effect of salting and cold-smoking on the culturability, viability, and virulence of Listeria monocytogenes strain Scott A.</a> Journal of Food Protection. 68, 85-91 (2005).</li><li>Aureli, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+outbreak+of+febrile+gastroenteritis+associated+with+corn+contaminated+by+Listeria+monocytogenes.">An outbreak of febrile gastroenteritis associated with corn contaminated by Listeria monocytogenes.</a> N. Engl. J. Med. 342, 1236-1241 (2000).</li><li>Dalton, C. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+outbreak+of+gastroenteritis+and+fever+due+to+Listeria+monocytogenes+in+milk.">An outbreak of gastroenteritis and fever due to Listeria monocytogenes in milk.</a> N. Engl. J. Med. 336, 100-105 (1997).</li><li>Frye, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+outbreak+of+febrile+gastroenteritis+associated+with+delicatessen+meat+contaminated+with+Listeria+monocytogenes.">An outbreak of febrile gastroenteritis associated with delicatessen meat contaminated with Listeria monocytogenes.</a> Clin. Infect. Dis. 35, 943-949 (2002).</li><li>Salamina, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+foodborne+outbreak+of+gastroenteritis+involving+Listeria+monocytogenes.">A foodborne outbreak of gastroenteritis involving Listeria monocytogenes.</a> Epidemiol. Infect. 117, 429-436 (1996).</li><li>Mead, P. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Food-related+illness+and+death+in+the+United+States.">Food-related illness and death in the United States.</a> Emerging Infectious Diseases. 5, 607-625 (1999).</li><li>Wing, E. J., Gregory, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes:+Clinical+and+experimental+update.">Listeria monocytogenes: Clinical and experimental update.</a> The Journal of Infectious Disease. 185, S18-S24 (2002).</li><li>Condotta, S. A., Richer, M. J., Badovinac, V. P., Harty, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Probing+CD8+T+cell+responses+with+Listeria+monocytogenes+infection.">Probing CD8 T cell responses with Listeria monocytogenes infection.</a> Advances in Immunology. 113, 51-80 (2012).</li><li>Disson, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+listeriosis+in+natural+and+genetically+engineered+animals.">Modeling human listeriosis in natural and genetically engineered animals.</a> Nat Protoc. 4, 799-810 (2009).</li><li>Czuprynski, C. J., Faith, N. G., Steinberg, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A/J+mice+are+susceptible+and+C57BL/6+mice+are+resistant+to+Listeria+monocytogenes+infection+by+intragastric+inoculation.">A/J mice are susceptible and C57BL/6 mice are resistant to Listeria monocytogenes infection by intragastric inoculation.</a> Infect. Immun. 71, 682-689 (2003).</li><li>Gajendran, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+IFNgamma+expression+is+insufficient+for+efficacious+control+of+food-borne+bacterial+pathogens+at+the+gut+epithelial+barrier.">Regional IFNgamma expression is insufficient for efficacious control of food-borne bacterial pathogens at the gut epithelial barrier.</a> Int. Immunol. 19, 1075-1081 (2007).</li><li>Lecuit, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+model+for+listeriosis:+role+of+internalin+in+crossing+the+intestinal+barrier.">A transgenic model for listeriosis: role of internalin in crossing the intestinal barrier.</a> Science. 292, 1722-1725 (2001).</li><li>Pron, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+study+of+the+intestinal+stage+of+listeriosis+in+a+rat+ligated+ileal+loop+system.">Comprehensive study of the intestinal stage of listeriosis in a rat ligated ileal loop system.</a> Infect. Immun. 66, 747-755 (1998).</li><li>Wollert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extending+the+host+range+of+Listeria+monocytogenes+by+rational+protein+design.">Extending the host range of Listeria monocytogenes by rational protein design.</a> Cell. 129, 891-902 (2007).</li><li>Ghanem, B. o. u., N, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=InlA+promotes+dissemination+of+Listeria+monocytogenes+to+the+mesenteric+lymph+nodes+during+food+borne+infection+of+mice.">InlA promotes dissemination of Listeria monocytogenes to the mesenteric lymph nodes during food borne infection of mice.</a> PLoS Pathogens. , (2012).</li><li>Kowal, M., Buda-Lewandowska, D., Plytycz, B., Styrna, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Day/night+food+consumption+in+mice+is+strain+and+age-dependent.">Day/night food consumption in mice is strain and age-dependent.</a> Folia Biol. (Krakow). 50, 1-3 (2002).</li><li>Freitag, N. E., Port, G. C., Miner, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Listeria+monocytogenes+-+from+saprophyte+to+intracellular+pathogen.">Listeria monocytogenes - from saprophyte to intracellular pathogen.</a> Nature reviews. Microbiology. 7, 623-628 (2009).</li><li>Camejo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+arsenal+of+virulence+factors+deployed+by+Listeria+monocytogenes+to+promote+its+cell+infection+cycle.">The arsenal of virulence factors deployed by Listeria monocytogenes to promote its cell infection cycle.</a> Virulence. 2, 379-394 (2011).</li></ol>

Inteeltmuizen zijn niet uniform ontvankelijk voor het voeden op alle momenten van de dag, en hun bereidheid om de verontreinigde brood eet zal afhangen van zowel het type stam en de leeftijd van de muizen 17. In onze ervaring, 6-9 weken oude B6 muizen zijn ontvankelijk voor het voeden op elk moment van de dag, maar BALB muizen zal niet consequent eten het brood stuk, tenzij het wordt aangeboden tijdens hun donker-cyclus. Het licht cyclus van de ruimte gebruikt om de dieren te huisvesten kunnen worden verander...

Listeria monocytogenes zijn facultatief intracellulaire bacteriële pathogenen die voedsel overgedragen infecties veroorzaken bij de mens. De bacteriën zijn resistent tegen veel van de processen is aan voedsel, zoals drogen beschermen, zouten of koeling 1,2 en infecties worden meestal verbonden verwerkt &quot;ready-to-eat&quot; voedingsmiddelen niet vóór verwarmd consumptie . In verscheidene eerdere uitbraken, de bron van L. monocytogenes-besmet voedsel werd geïdentificeerd, en de beperkte groep van blootgestelde personen werd op de voet gevolgd 3-6. In die voorbeelden, klinische ziekte bij overigens gezonde personen varieerde van een mild, self-limiting buikgriep tot meer ernstige intestinale en systemische infecties waarvoor ziekenhuisopname noodzakelijk was. L. monocytogenes infecties bij immuun gecompromitteerde individuen, zowel pasgeborenen en ouderen, zijn geassocieerd met een hoge mortaliteit (25-30%), zelfs bij behandeling met antibiotica <sup&gt; 7,8. Er is weinig bekend over de infectieuze dosis voor L. monocytogenes of de gastheer factoren die bepalen gevoeligheid voor infectie na orale transmissie, hoofdzakelijk door het ontbreken van een klein diermodel dat recapituleert deze uiteenlopende infecties resultaten. De meest gebruikte model van listeriose intraveneus (iv) inoculatie van muizen. De iv-model is zeer reproduceerbaar, en is zeer nuttig geweest voor het bestuderen van zowel naïeve en memory T-cel responsen tijdens infectie 9,10. Het nadeel van de iv model is dat het volledig omzeilt de intestinale fase van de infectie. Na overdracht door voedsel, het darmslijmvlies zorgt voor een barrière die vermoedelijk vertraagt ​​en beperkt het aantal bacteriën die voortdurend kunnen verspreiden naar de perifere weefsels. In tegenstelling, kan de hele inoculum te vinden in de milt en lever binnen enkele minuten van intraveneuze toediening, en deze grote bolus van organismen kan aangeboren immuunsysteem d overweldigenefenses in deze weefsels. Orale infectie van muizen met een sonde wordt minder vaak gebruikt, omdat grote doses (10 9 -10 11 CFU) meestal moeten darmflora bereiken 10. Ook heeft intragastrische (ig) inoculatie met een voeding naald niet het genereren van een reproduceerbare periode van gastro-intestinale infecties voorafgaand aan systemische verspreiding. Sommige laboratoria hebben gemeld dat L. monocytogenes bereiken de milt en lever binnen 4-12 uur na infectie (hpi), terwijl anderen toonden geen systemische verspreiding tot 48 hpi 11-15. Dit lab tot lab-variatie kan een gevolg zijn van de invasieve aard van inoculatie ig zijn, die kunnen resulteren in minder trauma aan het slijmvlies van de slokdarm en stimuleren van directe bloedbaan invasie van bacteriën. We hebben onlangs een nieuw muismodel van orale L. ontwikkeld monocytogenes infectie die nabootst alle fasen van menselijke ziekten 16. Infectie treedt op wanneer de muizen innemen stukken contgeamineerd voedsel, een proces dat niet-traumatische, en geen speciale vaardigheden vereist door het laboratorium onderzoekers. Voor een discrete tijd (36-48 uur), L. monocytogenes reproduceerbaar koloniseren alleen het maagdarmkanaal, waardoor onderzoek naar de mechanismen die door pathogene Listeria te verplaatsen in de darm mucosa en verspreiden perifere weefsels. Belangrijk is, kan het model worden gebruikt om verschillen in gastheer aangeboren weerstand tegen infecties te bestuderen. In een eerdere studie hebben we aangetoond dat BALB / c / By / J muizen zeer gevoelig voor voedsel overgedragen listeriose, met exponentiële replicatie van L. monocytogenes zich in de darm, milt, lever en galblaas 16. Daarentegen, C57BL / 6 muizen tegen voedsel gedragen besmetting, met slechts tijdelijke kolonisatie van L. monocytogenes zich in elk van deze weefsels. Een extra functie van het voedsel overgebrachte model dat nauw bootst menselijke ziekte is dat natuurlijke verspreidingde hersenen tijdens de latere stadia van de infectie (5-7 dpi) opgetreden.

<table border="1">
	<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Brain Heart Infusion Agar</td>
 <td>Difco</td>
 <td>BD-241830</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lithium chloride</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>L9650</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Glycine</td>
 <td>Omnipur</td>
 <td>4840</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>EDTA</td>
 <td>Gibco</td>
 <td>15575-038</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DTT</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>D5545</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Collagenase, type IV</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS004089</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>DNAse I</td>
 <td>Worthington</td>
 <td>LS002007</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Diff-Quik</td>
 <td>Dade-Behring</td>
 <td>B4132-1A</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PowerGen 1000 homogenizer</td>
 <td>Fisher</td>
 <td>14-261-06</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>stainless steel type 304 mesh #80</td>
 <td>Small Parts, Inc.</td>
 <td>CX-0080-C</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Cytospin</td>
 <td>Statspin</td>
 <td>M801-22</td>
 <td></td>
 </tr>
	 </tbody>
 </table>

oral transmission of listeria monocytogenes in mice via ingestion of contaminated food

L. monocytogenes zijn facultatief intracellulaire bacteriële pathogenen die voedsel overgedragen infecties veroorzaken bij de mens. Zeer weinig is bekend over de gastrointestinale fase van listeriose door het ontbreken van een klein diermodel dat nabootst menselijke ziekte. Dit document beschrijft een nieuw muismodel voor de mondelinge overdracht van L. monocytogenes. Met behulp van dit model, muizen gevoed L. monocytogenes verontreinigd brood een discrete fase van gastrointestinale infectie, gevolgd door een verschillende mate van systemische verspreiding in vatbare (BALB / c / By / J) of resistent (C57BL / 6) muizenstammen. Tijdens de latere stadia van de infectie, wordt verspreiding van de galblaas en de hersenen waargenomen. Het voedseltoxi model van listeriose zeer reproduceerbaar, niet gespecialiseerde vaardigheden vereist en kan worden gebruikt met een grote verscheidenheid van bacteriële isolaten en laboratorium muizenstammen. Als zodanig is het ideale model om zowel virulentie strategieën gebruikt door L. bestuderen monocytogenes </em&gt; intestinale kolonisatie, alsmede de gastheer respons op voedsel overgedragen invasieve bacteriële infectie bevorderen.

L. monocytogenes kolonies zichtbaar op BHI / L + G platen na 36-48 uur incubatie bij 37 ° C. De kolonies hebben een gladde, koepelvormige romig wit uiterlijk (figuur 1A). De groei wordt geremd voor de meerderheid van de darmflora, maar het is gebruikelijk om enkele kolonies die geen L. bekijken monocytogenes, vooral wanneer plating dunne darm of dikke direct zonder significante verdunning (Figuur 1B). Verdachte kolonies kan worden bevestigd door plating op CH...

Watch this Scientific Journal Video about Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food at JoVE.com

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

Dit document beschrijft een nieuwe werkwijze voor orale infectie van muizen met<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt;-Besmet voedsel. Het protocol kan gemakkelijk worden aangepast voor gebruik met andere voedsel overgedragen bacteriële pathogenen.

Mondelinge transmissie van<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; In Muizen via inname van besmet voedsel

L. monocytogenes are facultative intracellular bacterial pathogens that cause food borne infections in humans. Very little is known about the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Oral Transmission of Listeria monocytogenes in Mice via Ingestion of Contaminated Food

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Measuring Bacterial Load and Immune Responses in Mice Infected with Listeria monocytogenes

Het meten van bacteriën en immuunresponsen bij muizen geïnfecteerd met Listeria monocytogenes</em

Listeria monocytogenes (Listeria) is a Gram-positive facultative intracellular pathogen1. Mouse studies typically employ intravenous injection of ...

Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes

Imaging InlC Secretion to Investigate Cellular Infection by the Bacterial Pathogen Listeria monocytogenes

Beeldvorming InlC Afscheiding to Cellular Infectie Onderzoek door de bacteriële pathogenen<em&gt; Listeria monocytogenes</em

Bacterial intracellular  pathogens can be conceived as molecular tools to dissect cellular signaling  cascades due to their capacity to exquisitely ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Beoordeling van bacteriële invasie van hartcellen in cultuur en hartkolonisatie bij geïnfecteerde muizen met listeria monocytogenes

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

Transformation of Probiotic Yeast and Their Recovery from Gastrointestinal Immune Tissues Following Oral Gavage in Mice

Transformatie van probiotische gist en hun herstel van gastro-intestinale Immune Tissues Na orale sondevoeding in Muizen

Development of recombinant oral therapy would allow for more direct targeting of the mucosal immune system and improve the ability to combat ...

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA Purification from Intracellularly Grown Listeria monocytogenes in Macrophage Cells

RNA Zuivering van Intracellulair Grown<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; In macrofaag-cellen

Analysis of the transcriptome of bacterial pathogens during mammalian infection is a valuable tool for studying genes and factors that mediate infection. ...

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-&#947; Responses

Experimental Infection with Listeria monocytogenes as a Model for Studying Host Interferon-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â³ Responses

Experimentele infectie met<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Als een model voor de studie Host Interferon-γ Responses

L. monocytogenes is a gram-positive bacterium that is a cause of food borne disease in humans. Experimental infection of mice with this pathogen has been ...

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

An In Vitro Caseum Binding Assay that Predicts Drug Penetration in Tuberculosis Lesions

Een<em&gt; In Vitro</em&gt; Caseum Binding Assay die de penetratie van drugs in tuberculose-lesingen voorspelt

The eradication of tuberculosis disease requires drug regimens that can penetrate the multiple layers of complex pulmonary lesions. Drug distribution in ...

Listeria monocytogenes Infection of the Brain

Listeria monocytogenes Infection of the Brain

Listeria monocytogenes Infectie van de hersenen

Listeria monocytogenes is an intracellular bacterial pathogen that is frequently associated with food-borne infection. The ability of&#160;L. ...

Purification of a High Molecular Mass Protein in Streptococcus mutans

Purification of a High Molecular Mass Protein in Streptococcus mutans

Zuivering van een hoog molecuulmassa-eiwit in Streptococcus mutans

Elucidation of a gene&#39;s function typically involves comparison of phenotypic traits of wild-type strains and strains in which the gene of interest has ...

Imaging of In Situ Interferon Gamma Production in the Mouse Spleen following Listeria monocytogenes Infection

Imaging of In Situ Interferon Gamma Production in the Mouse Spleen following Listeria monocytogenes Infection

Beeldvorming van in situ interferon gamma productie in de muis milt na Listeria monocytogenes infectie

Cytokines are small proteins secreted by cells, mediating cell-cell communications that are crucial for effective immune responses. One characteristic of ...